Воробьев и бузова: Любовь с первого взгляда! У Алексея Воробьева и Ольги Бузовой роман?

Содержание

Алексей Воробьев смеется над Ольгой Бузовой

Несколько месяцев назад в сети появились слухи, что Ольга Бузова хочет очаровать певца Алексея Воробьева, для этого она комментировала его фотографии и искренне переживала, когда он поссорился со своей невестой. Даже появились разговоры, что у молодых людей начался страстный роман. Чуть позже мужчине пришлось делать официальное заявление о том, что с ведущей скандального проекта его ничего не связывает, хотя не стал отрицать, что они знакомы, пишет сайт dom2tv.ru.

По всей видимости, мужчине очень понравилось пиарится на славе новоиспеченной певицы, которая хоть и не обладает таким же голосом, как у него, однако песни Бузовой становятся хитами, да и новинками она балует публику значительно чаще своих коллег. Возможно, по этой причине Воробьев несколько дней назад решил высмеять Ольгу и Настю Кудри, которые записали совместную песню и даже сняли на нее весьма интересный клип.

Алексей вдруг заявил, что Настя и Оля просто обязаны обратиться в комитет по защите авторских прав и разобраться с американскими артистами Fifth Harmony и Kid Ink. А все дело в том, что их трек «Worth It» очень похож на песню «Нам будет жарко», правда первые выпустили свою песню еще в 2015 году.

«Мне кажется, что Fifth Harmony у кого-то тырнули припев. Я его точно где-то слышал. Девчонки, Оля Бузова и Настя Кудри, срочно обращайтесь в авторское сообщество! У вас припев украли один в один ваще!», — написал Алексей на свой страничке, чем знатно развеселил подписчиков. Многие тут же сравнили эти две песни и пришли к выводу, что Алексей прав, ведь композиции действительно очень похожи, а у Бузовой и ее напарницы могут возникнуть серьезные проблемы в случае, если американские певцы начнут искать правды в суде.

Читайте новости на неделю раньше эфиров, подписывайтесь на нас Вконтакте или Одноклассниках.

Алексей Воробьев открестился от романа с Ольгой Бузовой

После того, как Алексей Воробьев пережил предательство своей любимой девушки, его очень сильно поддерживала Ольга Бузова, которая не так давно развелась со своим мужем Дмитрием Тарасовым. Неоднократно в микроблоге певца ведущая «Дома-2» советовала ему забыть об избраннице, которая изменила ему.

В своих Stories Бузова довольно часто обращается к Воробьеву и всячески намекает на сотрудничество. Поэтому неудивительно, что в сети появились слухи об их намечающемся романе или, как минимум, совместном треке. Алексей не стал промолчать по этому поводу и опроверг домыслы фанатов в недавнем интервью. «Друзья, я слышал об этой новости и должен сказать, что ничего подобного в своей личной и тем более в профессиональной жизни я пока не намечаю… Сто процентов», — заверил Воробьев в новом эфире радиопередачи «Русские перцы».

Более того, по словам Алексея, они с Ольгой — просто знакомые. Воробьев отметил, что в последнее время ему все чаще задают вопросы о его взаимоотношениях с Бузовой, а однажды даже пытались женить на ней.

Woman.ru

Бузова заставила Воробъева снимать штаны одним взглядом

Телеведущая Ольга Бузова опубликовала на своей странице Instagram видео, на котором соблазняет, и весьма успешно, актера Алексея Воробьева. В ролике еще недавно горевавшая о расставании с рэпером Давидом Манукяном звезда «Дома-2» в прозрачном платье смотрит на артиста с поволокой, заставляя его дрожать от нахлынувших чувств — в порыве Воробьев даже бросился скидывать брюки!

Но фанаты Бузовой радоваться за новый виток в ее личной жизни не поспешили — видео, конечно, постановочное. В нем, слушая закадровый голос, Ольга и Алексей тренируют актерское мастерство, изображая разные эмоции по команде. По мнению поющей телеведущей, этот ролик претендует на почетное место в резюме пытающегося закрепиться в Голливуде Воробьева.

«Получилось? Леш, мне кажется, на Оскара точно сойдет! Обожаю твои звуки в TikTok», — подписала пост Бузова.

«Спасибо. Если бы все увидели дубли, где мы начинали смеяться, то Оскар нам точно был бы обеспечен», — ответил актер.

Instagram @buzova86

Поклонники знаменитостей пришли в восторг от того, как смотрятся вместе их кумиры. Многие посчитали, что за якобы разыгранной страстью кроется нечто большее, чем просто совместная работа над контентом.

«Воробьев сыграл так, будто реально любит»;

«А мне понравилось! Отличная игра!»

«Boeing с Оскарами ищет посадку»;

«Оля, вам надо в кино начать сниматься, однозначно!»

«Какие красивые! Так смотритесь!» — писали фолловеры.

В одной из свежих публикаций в Instagram Ольга вызвала похожие чувства у фанатов, разместив трогательное фото с целующим ее певцом Филиппом Киркоровым. В подписи к публикации селебрити отметила, что в гостях у короля российской эстрады настолько хорошо, что она даже подумывает о переезде к музыканту, пишут «Дни.ру». Почитатели и про эту пару говорили: «Отлично смотритесь!».

Однако пока подписчики «примеряют» Воробьева и Киркорова к Бузовой, в светских кругах поговаривают о возможном воссоединении звезды «Дома-2» с экс-бойфрендом Давидом Манукяном. Как ранее писал 5-tv.ru, на днях рэпер допустил высказывание, которое дало надежду на продолжение драматичной истории знаменитостей.

Ольга Бузова, Алексей Воробьев, Регина Тодоренко и другие на шоу Ильи Авербуха «Ледниковый период»

Кто: Ольга Бузова, Алексей Воробьев, Регина Тодоренко, Ольга Кузьмина, Влад Соколовский и другие

Где: дворец спорта «Мегаспорт»

Когда: 07.03.2021

Гала-концерт на льду «Ледниковый период» прошёл сегодня в ДС «Мегаспорт». Выступили участники десятого юбилейного проекта и знаменитые фигуристы.

Илья Авербух и Алина Загитова

Ольга Бузова и Дмитрий Соловьев

Влад Соколовский

Алексей Воробьев

Регина Тодоренко и Роман Костомаров

Диана Арбенина

Александр Панайотов

Ольга Кузьмина и Александр Энберт

Мариам Мерабова

Дарья Мороз с дочерью

Анастасия Мишина и Александр Галлямов

Риналь Мухаметов

Мария Зайцева

Антон Богославский

Повилас Ванагас и Маргарита Дробязко

Албена Денкова и Максим Ставицкий

Евгения Медведева

Вольфганг Черни

Иван Ригини

Екатерина Боброва

Вассерман, Воробьёв и Бузова снялись в рекламе «Пятёрочки» и PepsiCo

Торговая сеть и PepsiCo запустили совместную акцию «Битва завтраков в «Пятёрочке»», главными героями которой стали Алексей Воробьёв, Анатолий Вассерман и Ольга Бузова. В рамках «Битвы» селебрити представляют свои завтраки — бодрый, быстрый и умный. Кампания стартовала 14 января и продлится до 31 марта.

Её анонсирует ТВ-ролик, созданный агентством BBDO Moscow . Он знакомит потребителей с механикой участия и звёздами-героями. Коммуникацию поддерживают POSM и OOН, а также PR-активности. Команда агентства сообщила, что будет создана история по принципу сериала — с развитием сюжета и взаимодействием героев.

По словам участников съёмок, звёзды действительно показали себя героями. Ольга Бузова даже в самых коротких перерывах успевала общаться со своими поклонниками в Instagram. Алексей Воробьев, прилетевший на съемки прямо из Лос-Анжелеса, героически справлялся с джетлагом. Анатолий Вассерман, отметивший накануне съемок свой 67-й день рождения, в свободные минуты превращался в магического рассказчика: своими увлекательными историями и стихами на разных языках собирал вокруг себя внушительную часть съемочной группы.

Андрей Кузнецов, Creative Group Head BBDO Moscow:

Быть первым — всегда непросто, но очень интересно. Построить новую ситуацию потребления — это значит проложить путь всей категории. Помочь бренду выйти на новую для него территорию — значит подать пример другим брендам. Но BBDO не первый раз выступает в роли «ледокола». Я надеюсь, что «Битва завтраков» и ее супергерои помогут растопить лед в сердце даже самого скептически настроенного потребителя.

Дарья Тебар, директор по продажам и развитию категорий PepsiCo:

Завтрак — это действительно важная часть нашего дня. Но при этом сложно не заметить, что кто-то предпочтет начать день с йогурта, а другой не мыслит завтрак без фруктов. Поэтому и кампанию мы строили, опираясь на разнообразие вкусов разных людей, и приглашаем всех включиться в эту эпичную битву. Пусть победит вкуснейший!

Татьяна Степанова, директор по операционному и бренд-маркетингу торговой сети «Пятёрочка»:

Продуктивный день начинается с хорошего завтрака, и мы позаботились о том, чтобы гости наших магазинов могли выбрать для себя вкусный и полезный утренний перекус.

Каждый может выбрать подходящий для себя «звёздный» набор: зарядиться бодростью, как Ольга Бузова, быстро перекусить, как Алексей Воробьёв, или правильно подкрепиться, как Анатолий Вассерман, а в дополнение к этому получить приятные подарки.

Наша акция — первый пример на рынке российского ритейла, когда мы вышли на новый уровень удовлетворения потребностей покупателей, предлагая готовые решения.

Состав творческой группы:

Татьяна Степанова — директор департамента операционного и бренд-маркетинга
Анастасия Кулагина — бренд-менеджер сети

PepsiCo:

Дарья Тебар — Sales Director, Category Management and Shopper Marketing
Анна Мусаева — Customer Sr.engagement manager, NKA, X5
Евгения Синица — Customer Marketing Manager, NKA, X5
Ольга Филлипова — Customer Marketing Supervisor, NKA, X5
Ирина Дроздовская — General TV Producer

BBDO Moscow :

Дмитрий Втулкин — Creative Director
Андрей Кузнецов — Creative Group Head
Борис Бурашов — Copywriter
Виктория Коваленко — Art Director
Вениамин Матюнин — Creative Designer
Василий Гедзун — Technic Designer
Ксения Репина — Group Account Director
Ксения Ксенофонтова — Senior account manager
Валерий Горохов — Senior Producer
Дмитрий Баландин — Junior Producer

TheMarketingArm :

Анна Соколова — Chief Executive Officer
Татьяна Хмельницкая — New Business Director
Елизавета Дискусар — Celebrity & Casting Manager

Глава Подмосковья: Бузова – молодец, а Моргенштерну не хватает смысла

https://radiosputnik. ria.ru/20210315/vorobev-1601391672.html

Глава Подмосковья: Бузова – молодец, а Моргенштерну не хватает смысла

Глава Подмосковья: Бузова – молодец, а Моргенштерну не хватает смысла — Радио Sputnik, 15.03.2021

Глава Подмосковья: Бузова – молодец, а Моргенштерну не хватает смысла

Глава Московской области Андрей Воробьев в интервью тиктокеру Арине Ростовской поделился мнением о современных музыкантах. Радио Sputnik, 15.03.2021

2021-03-15T21:34

общество

московская область (подмосковье)

ольга бузова

андрей воробьев

баста (василий вакуленко)

ласковый май

моргенштерн (алишер моргенштерн)

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/09/1c/1577908760_161:0:2396:1257_1920x0_80_0_0_bfa5faeb189197bbd44791b2e4ed97ba.jpg

МОСКВА, 15 марта / Радио Sputnik. Глава Московской области Андрей Воробьев в интервью тиктокеру Арине Ростовской поделился мнением о современных музыкантах. Он отметил, что рэпер Моргенштерн мог стать еще успешнее, если бы перестал ругаться матом в своих песнях и добавил в них смысл.Ольга Бузова, по мнению Воробева, как артистка заслуживает уважения.Воробьев подчеркнул, что каждый может слушать то, что хочет.»Кому-то нравится с ранних лет симфоническая музыка, я к этому пришел позже. Мы танцевали под «Ласковый май». Кто-то смеется сейчас над этим, но у каждого времени есть свои герои, свои мелодии, свои ритмы. Важно, что есть доступ к ним, ты можешь общаться, можешь их обсудить», – рассказал подмосковный глава.Воробьев добавил, что ему нравится разная музыка. Он слушает не только классическую музыку, но и, например, треки рэпера Басты.Ранее радио Sputnik сообщило, что Бузова страдает от одиночества.Коротко и по делу. Только отборные цитаты в нашем Телеграм-канале.

https://radiosputnik.ria.ru/20210302/buzova-1599637475.html

московская область (подмосковье)

Радио Sputnik

internet-group@rian.ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og. xn--p1ai/awards/

2021

Радио Sputnik

internet-group@rian.ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://radiosputnik.ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

Радио Sputnik

internet-group@rian.ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e4/09/1c/1577908760_157:0:2888:2048_1920x0_80_0_0_9cb43f531d6f54c3636293a479afd91c.jpg

Радио Sputnik

internet-group@rian.ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Радио Sputnik

internet-group@rian.ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

общество, московская область (подмосковье), ольга бузова, андрей воробьев, баста (василий вакуленко), ласковый май, моргенштерн (алишер моргенштерн)

Бузова поддержала Воробьева после измены его девушки‍

Переживающая непростые времена телеведущая Ольга Бузова поспешила поддержать Алексея Воробьева после измены любимой девушки.

Ведущая «Дома-2» и сама не понаслышке знает, что значит предательство и расставание с любимым человеком, поэтому и решила прийти на помощь коллеге в трудную минуту.

Певец, актер и режиссер Алексей Воробьев накануне сообщил поклонникам о том, что его сердце вновь свободно. Артист расстался со своей возлюбленной и обстоятельства, поспособствовавшие этому, сложно назвать приятными. На своей странице в Инстаграм Алексей написал, что его очередные романтические отношения завершились со скандалом. Судя по всему, причиной окончания романа стала измена его девушки.

Коллеги Воробьева по цеху поддержали его в трудную минуту. Не смогла остаться в стороне и Ольга Бузова, которая всего пару недель назад также вновь обрела свободу, избавившись от оков брака. Телеведущая одной из первых прокомментировала пост певца. Экс-супруга Дмитрия Тарасова написала, что предательство не прощается, а люди, которые хоть раз пошли на это, непременно повторят свою ошибку.

«Предавший один раз – предаст еще. Это люди такие. Предатели. Поэтому хорошо, что ты узнал», – написала Бузова в микроблоге артиста.

Алексей тут же ответил Ольге: «Ты понимаешь, о чем я».

Также прокомментировала измену возлюбленной Воробьева и еще одна его бывшая девушка — Виктория Дайнеко. Она оставила в комментариях смайл-эмодзи, выражающий соболезнование. Скорее всего, певица решила написать слова поддержки Воробьеву лично, поэтому в комментариях и ограничилась одним смайликом.

Напомним, что певец встречался с Дайнеко около года. Ходили слухи, что пара даже планировала пожениться, однако вместо этого артисты расстались, что, впрочем, не помешало им сохранить дружеские отношения.

Не забудьте добавить «INFORMING» в источники новостей

Не забудьте поделиться новостью!

Buzova Kwetara Na Ihere Anagh Eme Ya Maka ịhụnanya Ya

Ольга Бузова gbara ajụjụ ọnụ. О кветара на ọ нагх аква ụта мака алụмди на нвунье я на онье ọкпụкпọ егвурегву Дмитрий Тарасов.

Ольга Бузова gbara akwụkwọ maka gba alụkwaghịm na njedebe nke Декабрь 2016 г. Dabere na onye na-akwado ihe ngosi aha ọjọọ «Дом-2», kemgbe ahụ ọ chọtabeghị nwoke ekwesr. Otú ọ dị, Ольга anaghị ada mbà, ọ kwenyere na ọ ka ga-enwe obi ụt n’hụnanya.

Ọ bụ ihe na-akpali mmasị na Buzova adịghị akwa ụta di na Дмитрий Тарасов.«Ihe niile simple n’oge gara aga, o doro anya, kwesịrị ịd otu a. Amaara m na enweghị nloghachi. Enwere m ihere maka ịhụnanya m, mụ na nwoke biri ruo afọ isii. адịгбороджа Н’ака нке йа, мана а хụрụ м я н’анйа ма были йа дị ка ихе нчета. Афисии абụгхị афо, кама бụ оголого оге, эчегхịква м на ọ дị мкпа ихичапụ фото анйị неткр ак a b akụk. Ihe ọ na-eme — hapụ ya ka ọ nọgide na akọ na uche ya. Mana ihere anaghị eme m maka mmetụta m «, — ka o kwuru ụbọchị Ольга Бузова Женщина.

Mgbe ya na di ya gbasasịr, ТВ брюнетка malitere ọrụ abụ ya. Каосинадо, онье аху квуру на нке эмегху н’ихи оби мгбава я. «Ọtụtụ mmadụ na-akọwahie ọrụ m naanị, na-ejikọ ya naanị na ejije onwe m. N’ezie, achọrọ m ịbụ abụ mgbe niile, nọ na ogbo. Edere m abụ mbụ» Maka’u nke 2016, na-alụ di na nwunye nwee obi ike na anyị ga-anwụkọ ọnụ otu ụbọchị, na-ejide aka. Mgbe ahụ amabeghị m na di m nwere nwanyị ọzọ ruo na otu afọ ugb k

На-адọные…

Mgbe eziokwu gbasara mmekọrịta dị n’etiti Дмитрий Тарасов на Анастасия Костенко pụtara, ọrụ mbụ Ольга Бузова bụ «lanarị».

«N’oge mgbụsị akwụkwọ, onye nduzi m kpọr m wee kwuo na ihe niile adịla njikere maka oge mbụ. Achọghị m ibi! ”Ma ọ gaghị ekwe omume ịnyefe ihe ọ bụla. Anyị emeghị ndokwa maka ihe ngosi, agbapụghị vidiyo, n’ihi na mgbe ahụ isi ọrụ m bụ lanarị. ihe mgbu na ihe okike wee malite ịchụso rụ. М бụр абụ на анагхịзи м эмерụ ахụ. Ọ bụghị otu а. Agbalịr m ime ka onwe m dị jụụ n’ụzọ a ka m wee nwee ike ịga n’ihu. Mgbe ahụ ewepụtara м «Ndị mmadụ emeghị kwere», «Fụp», n’oge na-adịghịkwa anya album izizi.gbasara etu ọ dị m, obi dịkwa mụtọ na m jisiri ike metụ obi ndị nọ n’ọgbọ na kwa dị iche iche n’okwu nke aka m, «Ольга квуру.

бывшая жена Грачевского пришла точно в таком же наряде

После трагической гибели экстравагантной артистки в субботу психологическая помощь Нужна ее сожителям в микрорайоне Переделкино Ближнее на территории Новой Москвы. Труп женщины, висящий за окном снаружи дома, был найден на рассвете ее соседями.

Как выяснил МК, 24-летняя Асель Кондра из Санкт-Петербурга. Барышня живет в этом доме с момента его постройки в 2014 году. Девушка из богатой семьи купила ей однокомнатную квартиру на 11-м этаже, которую родители купили. Асель передвигалась на дорогой машине — «Ауди ТТ».

Асель всегда казалась неординарной всем соседям.

Она рассказала, что работает стилистом и моделью, а еще рисует картины, говорят жители. — И мы попросили ее не шуметь. Часто Асель вела ночной образ жизни — например, по ночам любила громко слушать музыку.

События субботнего утра запомнятся соседям художника с 10 этажа на всю жизнь. Здесь живет семейная пара, месяц назад у пары родился ребенок. По данным полиции, опрашивавшей гостей, в 4.50 молодая мама проснулась, чтобы покормить ребенка, когда вдруг увидела … ножки за окном. Она разбудила мужа, который буквально в шортах и босиком бросился наверх, стал стучать в дверь Асель и других соседей. На помощь пришел один из соседей.Дверь квартиры была заперта.

Вместе мужчины снова спустились на 10 этаж и через открытое окно попытались спасти девушку в черной одежде. Все предполагали, что произошел несчастный случай: девушка выпала из окна и повисла. Некоторое время она была жива и переехала. Увы, вытащить его из петли мужикам не удалось. Позже в квартире Асель полиция нашла письмо, из которого стало ясно, что она переживает из-за расставания с любимым. Аналогичное сообщение она оставила в Интернете.К ужасу местных жителей, девушка висела за окном почти 6,5 часов, пока спасатели не сняли ее с помощью люльки.

Как выяснилось, Асель стояла на учете у психиатра, в апреле лечилась в больнице. Затем она попыталась умереть, но чудом спаслась, открыв дверь. Три дня Асель находилась в коме, на четвертые более-менее пришла в сознание. Психиатры диагностировали биполярное расстройство. К сведению, этим недугом страдал великий мастер Винсент Ван Гог.Некоторые ученые, кстати, определили связь между творчеством и умственной отсталостью. При этом недуге любая, даже незначительная мелочь может вывести человека из душевного равновесия.

Родственники как могли поддержали Асель после выписки из больницы, о чем она написала в Instagram.

Однако соседи заподозрили, что артист принимает какое-то лекарство. И это тоже могло быть причиной субботней трагедии. Не так давно ночью из ее квартиры раздавались мольбы о помощи.

«Асель кричала, что ей больно и страшно. Сначала хотели вызвать полицию, но решили постучать. Мужчина открыл. У Асель было странное состояние с неестественно открытыми учениками », — рассказали соседи.

Отцу художника сообщили о смерти дочери, и мужчина, как утверждают в полиции, заболел. А супружеской паре, ставшей невольным свидетелем трагедии, теперь нужна помощь психологов.

Нуууу, вот как я сказал, что от любого стресса депрессивное безнадежно
Ты должен стать тупым куском дерьма.Я так хорошо себя чувствую летом?

Немного высокохудожественной жести. Стало известно, что в субботу в Новой Москве красиво скончалась 24-летняя художница Асель Кондра. Причем вышла так красиво, что соседям сейчас нужна психологическая помощь.

Девушка довольно странная, как бы художник, стилист и модель, но во всех этих областях она так продвинулась сама. Квартиру на 11 этаже в приличном доме купили ее родители, и она там жила. Девушка была на учете у психиатров с диагнозом модное среди творческих людей заболевание — биполярное расстройство.И вот на тебе — молодой человек решил с ней расстаться. Асель красиво оделась, по ночам немного кричала (соседи слышали), а потом прыгнула в окно с петлей на шее. Ее ноги заметили соседи внизу около 5 утра (сейчас им нужна психологическая помощь).

Вот фото из соседнего дома. Девушка так провисала за окном шесть часов, прежде чем ее сняли.

Прощальный ролик также был снят по новой моде.Чтоб в Инстаграмм все было красиво. И веревочка тоже красивая, девушка на красивой батарее подогрева намотала второй конец.

Журнал «ЭкоГрад» получил фотографии от читателей в связи со сбором материалов об отношении читателей журнала к «новым поправкам» в Уголовный кодекс. Соответствующий закон был принят весной 2017 года на заседании Госдумы.

Напомним, речь идет об изменениях, направленных на создание комплекса мер по выявлению преступлений, связанных с доведением или склонением детей к самоубийству, а также по предотвращению суицидального поведения.

Учитывая характер преступных действий, предлагается установить отдельную уголовную ответственность за побуждение и содействие совершению самоубийства, а также предусмотреть меры наказания за действия, направленные против широкого круга лиц и, независимо от последствий, имеющие социально опасный характер.

Принятые в первом чтении законопроекты предлагают дополнить Уголовный кодекс Российской Федерации новыми статьями — «Склонность к самоубийству или содействие самоубийству», «Организация деятельности, связанной с склонением граждан к самоубийству» и » Вовлечение несовершеннолетнего в совершение действий, представляющих опасность для жизни несовершеннолетнего «.А также ввести повышенную ответственность за доведение несовершеннолетних, беременных женщин и групп людей до самоубийства.

Напомним, что среди основных законов весенней сессии Госдумы 2017 года председатель нижней палаты российского парламента Вячеслав Володин выделил создание национальной платежной системы, борьбу с самоубийствами в социальных сетях, а также а также суррогатный алкоголь.

Игорь Солонцов

Лера Кондра — популярная российская телеведущая, известная также как певица и актриса.Она хорошо выступает на показах в качестве модели. Благодаря потрясающе красивой внешности у девушки нет проблем с предложениями о работе. Лера умело совмещает активное восхождение по карьерной лестнице с отдыхом в кругу семьи и друзей, поскольку считает, что важнее домашнего уюта нет ничего.

Детство Леры Кондры

Девочка родилась в городе Москва 27 мая 1985 года. Родилась в семье тренера сборной России по волейболу, олимпийского чемпиона Владимира Кондры.Возможно, именно ему Валерия обязана своим непоколебимым желанием победить и своей железной силой воли. Из-за спортивной карьеры семье отца постоянно приходилось переезжать с места на место, поэтому все детство Лера провела в разъездах, из-за чего у нее не было постоянных друзей и привязанностей.

Знаменитый отец возлагал на девушку большие надежды и хотел, чтобы она стала спортивным журналистом. Но у Валерии были совсем другие планы — с ранних лет она мечтала стать манекенщицей, тайком просматривая журналы от родителей, на страницах которых красивые и уверенные в себе девушки демонстрировали одежду ведущих домов моды.Поэтому Лера прошла обучение на модельных курсах, ничего не сказав отцу.

Начинающая модель очень органично и непринужденно получилась на фотографиях, а также уверенно себя чувствовала на модных показах, поэтому очень скоро ее заметили и стали приглашать на кастинги и съемки. О стремительно развивающейся карьере дочери родители узнали случайно, когда Лере позвонили на домашний телефон, чтобы сообщить место и время следующих съемок. К этому времени Валерия уже была довольно успешной и известной моделью.

Тем не менее, девочка прислушалась к советам родителей и поняла, что высшее образование ей не повредит, поэтому она поступила в Российский университет дружбы народов на факультет журналистики, после чего начала свое «настоящее» , как утверждал ее отец, работать.

Телевизионная карьера Леры Кондры

Валерия Кондра начинала журналистскую карьеру на серьезном телеканале «Звезда», где ей приходилось освещать боевые действия. Работа показалась девушке очень ответственной и напряженной, поэтому она перешла на канал RenTV, где стала ведущей авторской программы «Я путешественник», выходящей в эфир каждую субботу.График работы был настолько тяжелым, а количество рейсов — настолько большим, что даже Лера, привыкшая к постоянным поездкам, не выдерживала нагрузки. Более того, совмещать работу журналистом и участие в съемках и модных показах в качестве модели становилось все сложнее.

Лера Кондра и Ираклий Пирцхалавин на видео «Сделай шаг»

Когда девушке предложили перейти на канал МузТВ, она с радостью согласилась. Именно там ее заметили продюсеры клипа Ираклия Пирцхалава «Сделай шаг».Посмотрев небольшую демонстрацию пресс-релиза, устроенного Лерой Кондрой, они четко сошлись во мнении, что она — именно то, что нужно для успеха видео.

Проработав с певицей всего два дня, Лера стала известна на всю страну, причем заработала столько денег, сколько не получала за все время своей карьеры. Сотрудничество с Пирцхалавой оказалось настолько плодотворным, что был записан очередной видеоклип Ираклия «Вокруг Земли», в котором Валерия уже поет.После этого девушка поняла, что хочет продолжить работу в музыкальном направлении, для чего даже поступила в ГИТИС. Но одновременно учиться и работать оказалось очень сложно, поэтому Валерия выбрала работу, бросив учебу.

Музыкальная карьера Леры Кондры

Самым первым индивидуальным проектом Валерии Кондры стал клип «Бармен Саша», вышедший на экран в 2011 году. Он сразу завоевал популярность, актуален и сейчас, как легкий и ненавязчивый летний мотив.Второй песней в исполнении певца стала провокационная работа «Компас». Это видео снял режиссер Влад Опельянц, ранее работавший с такими звездами первой величины, как Алла Пугачева, Валерий Меладзе и Земфира. В ролике также участвовала американская актриса Наташа Алам, а необычный и яркий сюжет не оставил равнодушным никого.

Лера Кондра и Константин Крюков — Это неправда

Самым скандальным клипом Валерии стал клип на песню «Это неправда», в котором снялся известный молодой актер

Как выяснил МК, 24-летняя Асель Кондра родом из Санкт-Петербурга.Петербург. Барышня живет в доме с момента его постройки в 2014 году. Девушка из обеспеченной семьи, родители купили ей однокомнатную квартиру на 11 этаже. Асель передвигалась на дорогой машине — «Ауди ТТ».

Асель всегда казалась всем соседям необыкновенной.

Она рассказала, что работает стилистом и моделью, а еще рисует, говорят жители. — И мы попросили ее не шуметь. Часто Асель вела ночной образ жизни — например, по ночам любила громко слушать музыку.

Как выяснилось, Асель была на учете у психиатра, в апреле лечилась в больнице. Затем она попыталась умереть, но чудом спаслась, открыв дверь. Три дня Асель находилась в коме, на четвертые более-менее пришла в сознание. Психиатры диагностировали биполярное расстройство. К сведению, этим недугом страдал великий мастер Винсент Ван Гог.Некоторые ученые, кстати, определили связь между творчеством и умственной отсталостью. При этом недуге любая, даже незначительная мелочь может вывести человека из душевного равновесия.

Родственники как могли поддержали Асель после выписки из больницы, о чем она написала в Instagram.

«Асель кричала, что ей больно и она напугана. Сначала хотели вызвать полицию, но решили постучать. Мужчина открыл. У Асель было странное состояние с неестественно открытыми учениками », — рассказали соседи.

Бузова поддержала Воробьева после предательства возлюбленного.Кто разбил Воробьеву сердце и его новые откровенные признания Последние новости из раздела «Культура»

Как сообщает «СтарХит», , друзья Леши, рассекретили незнакомца. «Эта девушка обидела Лешу. Он прилетел в США сниматься на четыре месяца. Решила удивить любимого и вернулась в Москву на 15 часов. Он почти сутки прилетел и кинулся к ней, а она вела себя так, что этот пост появился в Instagram Леши … »

По предположению друзей артиста, солисткой группы оказалась солистка группы. предательница Диана Иваницкая-Шорикова (21), с которой Алексей закрутил роман в прошлом году.

«У Леша было много девушек, но с нежностью он отзывался только о Диане , — добавила подруга Воробьева … — Ребятам понравилась атмосфера секретности, они старались не появляться на публике, поэтому чтобы не попасться. Алексей очень ценил эти отношения и радовал свою возлюбленную подарками и огромными букетами роз.Но случившееся разрушило все — они расстались, даже не оставшись друзьями. Диана совершила поступок, который Леха Я не мог простить.«

Действительно, в Instagram Леша Диана никогда не появлялась на публике, но сама девушка выложила одну фотографию с Воробьёв .

Это произошло полгода назад, когда она участвовала в показе. Диана примерила свадебное платье , и Леша, видимо, пришел поддержать ее на показ. Под совместным снимком девушка подписала так: «Моя роза» (со ссылкой на показ). Кстати, такая же фотография есть на « avatar »Диана » На связи «.

Интересно, что впервые Алексей разместил в Instagram незнакомца, обнимающего свою собаку Элвис , в. Примерно тогда же стало известно, что Diana якобы (37). Они не раз появлялись на мероприятиях и не скрывали своих чувств — целовались на камеру. И девушка рассказала удивительную историю своего знакомства. Так что тут что-то не влезает …

Кстати, в профиле Диана продолжала появляться фото из Хрусталев … Например, последний снимок с ним она выложила перед Новым годом. А по праздникам Диана отдыхала рядом с океаном, как Хрусталев , уехавший на Бали … Но были ли они вместе — непонятно. Геолокацией девушка не поделилась с подписчиками.

Но если они вместе с Дмитрием были на Бали то Воробьев как раз писал не про нее! Кстати, позже выяснилось, что ее коллега по группе Маша Гончарук (26) тоже на популярном острове среди звезд, да еще на руках у Хрусталёва ! Какой поворот!

В общем, неизвестно, была ли Диана в Москва в тот момент, когда Воробьев поделился своей историей.Но уже через три дня девушка пошла на премьеру мультфильма «Балерина» поздравить (15) (дочь Веры Брежневой (34)), озвучившую одного из персонажей.

Сейчас Диана находится в Таиланде с друзьями, а два дня назад я опубликовал фотографию какого-то татуированного незнакомца, держащего ее за руку. Не правда ли, Диана и Воробьева связаны отношениями, это пока неизвестно.

Но Лешу все равно переполняют чувства.Сначала Воробьев опубликовал фото, на котором он с девушкой, похожей на Диану (ее лицо не было полностью включено в кадр), веселятся и поют песни под гитару. «Знаете, это была последняя мелодия, которую кто-то сыграл на этой гитаре. И когда я разнес его вдребезги, я был счастлив, потому что разбил каждую частичку твоих воспоминаний », — написал он.

Фото Алексея Воробьева — ???? ???????. (@ mr.alexsparrow) 26 января 2017 г. в 5:39
по тихоокеанскому стандартному времени
Спустя несколько минут Алексей выложил очередное фото, на котором пил виски, и подпись под фото стала почти признанием: «Я очень долго скрывал от всех свою личную жизнь.И если кому-то не нравится то, что я сейчас пишу в своем инстаграмме, то поймите одно — это не для вас … Это для меня и для нее, потому что мне больше не о ком высказаться. Да, конечно, взрослый, особенно артист, должен держать все при себе, выходить на сцену и улыбаться. Но меня сейчас нет на сцене, так что мне очень жаль. Я никого не заставляю читать то, что я пишу, нравится то, что я опубликовал, и писать обнадеживающие комментарии, это мне ничуть не помогает, так что ваше мнение о том, что и как мне делать сейчас, поверьте, мне мало интересно .Здесь нет демократии или народных собраний, каждый является монархом своего внутреннего и виртуального мира, поэтому, если вас что-то не устраивает, откажитесь от подписки без ваших высокохудожественных советов о том, кому и как жить. «
.

Красивый и талантливый, конечно, но в любви как-то все не везет, изменявшую девушке он скрывает то, что, скорее всего, говорит, и искренность своих чувств. Опять холостяк. Не фанатка его, но счастья желаю. Я смотрела передачу о нем, где он рассказывал, как вернулся к жизни, а потом на сцене после аварии меня тронули его откровения!

Вот та самая девушка, с которой Алексей Воробьев встречался до недавнего времени.Наверное, даже полюбил, потому что из самой Америки, где снимался, прилетел сделать любимой сюрприз. В итоге получил сам. Это надо поменять на самого Алексея Воробьева!

Лично мне так и не удалось ее опознать. Да и на фото видно, что девушка не хотела афишировать отношения.

Оказывается, в начале 2017 года Алексей Воробьев снова на свободе и уже сейчас может пойти на шоу Холостяк.

Даже если у него завяжется длительный роман, не факт, что он нам сообщит.

Как видите, Леша любит только громко кричать о разлуке.

Алексей Воробьев снова на свободе).

Похоже, на любовном фронте художнику не везет.

Но в этой профессии, кажется, редко можно найти настоящее семейное счастье.

Или в этот раз так).

Известно, что следующая девочка Алексей подарил ему рога. На этом и скрылись.

Ее личность не афишируется.

И после столь громкого расставания, пока художник один.Думаю, ему понадобится время, чтобы снова завязать серьезные отношения.

2017 только начался, у Алексея Воробьева скандал, девушка ему изменила и они растаяли. В сети это уже проходило, Алексей не делал из этого секрета, заодно продвигал. Поэтому Алексей теперь снова свободен и как говорится quot; в активном поискеquot ;.

Несмотря на то, что красавец Алексей Воробьев, раненный в самое сердце, находясь в плену далеко не самых приятных эмоций, связанных с новостью об измене своей избранницы, очень красноречиво и открыто поделился своими личными переживаниями в Интернете, личность quot; роковая дамаquot; все еще остается большой вопрос.

А все потому, что Алексей не пошел дальше разговора о собственном разочаровании и боли от измены. Более того, он удалил исходный пост из Сети, заменив его довольно выразительной тирадой, в которой он отправил всех чрезмерно любопытных … в поход по окрестностям со своей бывшей девушкой.

Для наглядности я даже разместил соответствующее фото, на котором симпатичное личико некогда любимой и единственной было скрыто от всех, кто хотел узнать больше о том, что произошло таким образом:

Этот пост в его личном кабинете Instagram красноречиво говорит о том, что в ближайшее время и из первых уст мы вряд ли узнаем имя того, кто разбил сердце известной певице.

Глубина переживаний Алексея Воробьёва и довольно цитата. freshquot; Ранения сердца, на мой взгляд, тоже говорят о том, что пока обманутый сердцеед не готов вступать в новые отношения и на данный момент один.

Певцу можно только посочувствовать и пожелать удачи в выборе будущей спутницы!

В данный момент известный певец Алексей Воробьев находится в свободном полете.

Хотя до недавнего времени молодой человек был в серьезных отношениях с девушкой.И это могло даже дойти до свадьбы.

Но, к сожалению или к счастью … Парень, решивший сделать сюрприз любимой и любимой, прилетев на несколько часов из США, нашел его горячим. Девушка изменила Алексею.

Неизвестно, кто этот человек, мгновенно наполнивший и разбивший Воробьеву сердце.

Действительно, Воробьев снова на свободе, так как его уже бывшая девушка изменила артисту, и конечно это стало причиной расставания пары.Алексей решил не озвучивать имя девушки, которая с ним это сделала, а назвал ее женщиной легкого поведения, что было очень неприятно для этой девушки. Пока ему не особо везет в отношениях, и его поклонники могут радоваться, ведь его сердце снова свободно.

Личность девушки, изменившей Алексею Воробьеву, осталась за кадром. Алексей не хотел его озвучивать. Известно, что у них были очень серьезные отношения.

Когда певец прилетел в Россию из Америки специально, чтобы удивить любимую, он нашел ее просто за измену.Был громкий скандал. Воробей прощать девушкам не собирается.

Итак, сердце певца снова свободно и открыто для новых отношений.

На фото та же девушка, но кто она, покажет время.

Исполнитель, певец и просто красивый мужчина Алексей Воробьев потерпел фиаско с любимой девушкой. Когда певица отсутствовала в Москве, а уехала в США для исполнительской работы, приехав quot; сюрпризquot; домой, нашел возлюбленную ?? Это обычное дело даже для таких красивых мужчин, как Алексей Воробьев.

Все увиденное и услышанное Алексей разместил в своем Instagram, а его коллеги по шоу-бизнесу не преминули выразить певцу слова поддержки.

Что-то получается, что Алексей Воробьев постоянно находится в образе бессменных женихов.

Алексей Воробьев — молодой талантливый музыкант, певец и актер. Своей красотой и талантом он продолжает покорять женские сердца, но сегодня его сердце свободно. Юный сердцеед снова стал завидным женихом. И хотя сейчас у него никого нет, но все ждут, кто станет его избранницей, так как ясновидящий угадал ему, что ближе к 30 он встретит свою будущую жену.А пока в его сердце только одна женщина — мама!

Судя по рассказу самого Алексея Воробьева и по красноречиво оформленной и сопровождаемой соответствующими комментариями его фото в Instagram, сейчас в начале 2017 года певец ни с кем не встречается … Тема получилась очень банально — Лша хотел порадовать свою девушку (его зовут нигде не называет), пролетев к ней за несколько часов тысячи километров без предупреждения, но был вынужден лично удостовериться в своей измене, увы… То есть на данный момент певец снова свободен, и нужно отдать ему должное — хоть он и злится на бывшую девушку, и ругает, но личность не раскрывает — видимо, делает не хочу привлекать к своей персоне дурное внимание …

Лша Воробьева снова холостяк. Не везет ему в любовных делах. Я только начал встречаться с девушкой, а она ему уже изменила.

Алексей подумал, что внезапный перелет из США к девушке на свидание произведет фурор, но оказалось, что девушке его сюрприз больше не нужен.Она отлично повеселилась с другим мужчиной, и Алексей застал любимую на этом занятии.

Имя девушки неизвестно, но реакция Алексея была, мягко говоря, не очень адекватной. В своем инстаграмме он отправил всех людей вместе со своей девушкой в трех письмах. Поклонники певца очень обиделись, и он поспешил извиниться.

Нельзя так себя вести, Алексей, или даже без девушки останешься без поклонников.

Алексей Воробьев в этой ситуации, по моему личному мнению, поступил как джентльмен.Имя его бывшей возлюбленной, изменившей ему с другим, не называется. Он только называл ее женщиной легкого поведения.

Почему теперь известно ее имя? Если бы я позвал его замуж, то было бы интереснее.

Но ему очень умело удавалось скрыть тот факт, что у него даже была девушка, ведь ему приписывали романы со многими красотками после quot; Холостякquot ;.

Есть только фотографии, которые выставил Алексей Воробьев, обнаружив государственную измену.Но лица девушки там не видно.

И цифра очень вау.

Не думаю, что Алексей долго будет мучиться, такой красавец быстро найдет ей замену.

Кто та загадочная девушка, которая изменила Алексею Воробьеву, неизвестно. Певица не называет своего имени. Месяц назад стало известно, что Воробьев наконец-то нашел себе спутницу жизни, однако, решив удивить девушку и приехав на днях раньше срока, обнаружил ее изменой.

Вот что об этом сказал Алексей Воробьев:

В Instagram Воробьев опубликовал несколько фотографий со своей девушкой (но не назвал ее имени) с гневными и слегка оскорбительными текстами, но позже извинился за свою ярость и попросил подписчиков принести извинения.

Instagram.com/mr.alexsparrow

Когда смотришь на Алексея Воробьева, кажется, что у него не должно быть проблем с девушками: успешные, талантливые, красивые — почему не мужчина мечты? Однако на самом деле все иначе: на прошлой неделе певец поделился личными переживаниями по поводу предавшей его возлюбленной.Затем Алексей написал о своем разбитом сердце целый пост: «Я летал 13 часов, пробыл в Москве всего 18 часов с момента выхода из самолета и посадки на новый рейс, где я теперь снова проведу 13 часов в полете. И знаешь, что? Это стоило того. Теперь я точно знаю, что чудес не бывает. Я прилетел, чтобы побыть с девушкой хоть на несколько часов, и улетаю холостяком … Мораль истории такова: хочешь сделать сюрприз и перелететь через океан на день для кого-то , лучше предупредите о своих намерениях », — написал Воробьев в Instagram.

Поклонники певца забили тревогу: какая девушка посмела так обидеть их кумира? Ведь лицо любимой Алексей не показывал, а имя скрывал — чтобы не сглазить. И наконец, журналистам удалось выяснить, кто разбил сердце певца: по словам друзей Воробьева, его бывшая возлюбленная — 21-летняя Диана Иваницкая-Шорикова, солистка группы «Динама», с которой Алексей завел роман в прошлом году. . «У Леши было много девочек, но с нежностью он отзывался только о Диане», — сказал друг звезды журналистам «СтарХита».- Алексей дорожил этими отношениями и радовал возлюбленную подарками и огромными букетами роз. Произошедшее все испортило — они расстались, даже не оставшись друзьями. «

instagram.com/dianadinama/

Примечательно, что в конце прошлого года появилась информация о романе Дианы Иваницкой с телеведущим Дмитрием Хрусталевым. Тогда пара часто появлялась вместе на мероприятиях и обнималась перед фотографами, но никак не комментировала свои отношения.

Стало известно имя девушки, с которой артист разорвал отношения. Близкие друзья Алексея Воробьева утверждают, что он относился к ней очень серьезно и совсем не был готов к разочарованию. Теперь режиссер и музыкант с головой окунулись в работу, чтобы поскорее забыть о том, что с ним произошло.

После множества громких романов Алексей Воробьев научился тщательно скрывать свои отношения, считая, что счастье любит тишину. Но на днях, видимо, в приступе ярости, артист опубликовал в Instagram пост, в котором обвинил возлюбленную в предательстве.

«Эта девушка обидела Лешу», — рассказал «СтарХиту» один из друзей артиста Макс. — Он прилетал сниматься в США 4 месяца. Решила удивить любимого и вернулась в Москву на 15 часов. Он почти сутки прилетал и кинулся к ней, а она вела себя так, что этот пост появился в инстаграмме Леши … »

Поклонники недоумевали, кто так обидел актера и режиссера: музыкальный менеджер Нина, которая часто выкладывала фото со своей собакой Элвисом, Настя Дворянская, которую артист считает своей «крестницей», или Мисс Россия Женя Дравина.Но оказалось, что это Диана из группы «Динама».

«У Леши было много девушек, но только о Диане он отзывался с нежностью», — делится Макс со СтарХитом. — Ребятам понравилась атмосфера секретности, они старались не появляться на публике, чтобы не попасться. Алексей очень дорожил этими отношениями и радовал возлюбленную подарками и огромными букетами роз. Но случившееся разрушило все — они расстались, даже не оставшись друзьями. Диана совершила такой поступок, которого Леха не смог простить.«

Когда Воробьев сообщил подписчикам своего микроблога об измене любимой, они сразу стали выяснять, в чем дело. Однако вскоре режиссер и сам музыкант дали понять, что не намерены возвращаться к этому вопросу. Алексей перечеркнул все, что его связывало с девушкой, и попытался погрузиться в рабочий процесс. Именно работа, по словам самого художника, способна вывести его из самой тяжелой депрессии.

Не так давно стало известно, что Воробьев был вынужден надолго покинуть Россию ради продолжительных съемок в сериале, в котором его утвердили на одну из ролей.Детали выгодного контракта, а также название популярного проекта Алексей держит в секрете.

Новости СМИ Adnow

Обливки Новости

Toilette D’oro, «Maybach» E Maldive: Quali Doni Sognano Buzova, Baretsky E Borisova?

Non sognano iPhone e MacBook, с Максом Мара и его сеттимана в отеле в пяти минутах ходьбы.Possono permettersi più di altri e non esitano a dirlo ad alta voce. Кинди Ольга Бузова имеет аммассо, что и каппотто лисо, нель пегиоре деи казино, зибеллино и майбах звучат градации на лей. Tuttavia, si è subito interrotta: «Quello di cui ho veramente bisogno, mi sono abituato ad acquisire me stesso. Adesso mi piace fare più regali. La cosa Principale per me è che viene dal cuore «. Quale altro ricco e famoso, che può permettersi molto, vuole risvere in dono? Baretsky è мгновенно осмелились a Buzova una pelliccia Stas Baretsky L’ex musicista del gruppo» Leningrado «Stas Baretsky ездить по делла баналита деи дезидери ди Оля.Tra di noi: le donne single oltre i trenta amano le pellicce, e meno amore e sesso nella vita, più sognano pellicce costose dai cadaveri di sortunati bellissimi animali. «Non so perché questo regalo le sembri sorprendente. Avevo un cappello di lince — niente di insolito, i capelli sotto sono duri e la parte superiore è morbida come una piuma — Baretsky è sorpreso. Стас è пронто a pelliccia regalare в Buzova una una piuma — Baretsky è sorpreso. di lince, ma a una condizione: se trova lavoro nella suaagenzia di pompe funebri.- Sono pronto a darle come primo stipendio. Stiamo andando molto bene nel settore dei funerali in questo momento. Non pensare che io sia stipato nel suo amante. Здесь все супер, все, это авто, а не двигатель. Il mio sogno più grande è la mia attività funeraria cresca e che compaiano più aggenzie. C’è anche l’idea di creare e mettere in produzione una bara con coperchio in vetro — per coloro che sono morti di coronavirus (sono sepolti in una bara chiusa — ndr). Барецкий с содержанием воды дорато.Dice Che la Vecchia Maiolica — это diventata troppo piccola. У Сафронов есть опыт работы в Бахрейне, Никас Сафронов и Орнелла Мути, Никас Сафронов, не любя рисовать, но осмелился, чтобы вы никогда не забыли, что это за дом, как таковое, само по себе, и потому, что оно само по себе, и все, что вам нужно. — Vivo modestamente. Вот и все, что у Porsche e un grazioso appartamento nel centro di Mosca dove incontro gli ospiti, ma mi servono. Одно только без автомобиля на Rolls-Royce. Sono semper pronto a spendere soldi per l’alloggio di amici e parenti e anche per le лекарства.Devo volare в бизнес-классе, чтобы не забыть о жизни. Ma Posso Anche Volare Vicino Al Bagno, Non mi Troublea affatto. Non ho bisogno di caviale o Champagne, sto guardando un film o leggendo un libro sul mio iPad. A Capodanno, se tutto va bene, l’artista volerà con i suoi figli Stefan e Luka All Maldive. Ed Entro il 2022, spera di Complete la ristrutturazione di una casa ad Alanya turca. Nel frattempo — это империя, приготовленная из королевских каподанцев для других: вы можете увидеть фотографии Бахрейна и увидеть королевство всех ваших друзей, итальянскую итальянскую Орнеллу Мути.»Vivo e dipingo i miei quadri per gli altri, sono cresciuto così», принимает Никас. Александр Васильев: переговоры о костюмах Дана Борисова, все службы, не связанные с Каподанно. La neve e il vento non sono belli per una stella, sarebbe in terre calde, dove il mare, il sole e la sabbia. Дана Борисова — Non c’è abbastanza calore, bel tempo, — condivide la stella. — Ma nessun posto dove volare. Vorrei volare alle Maldive, ma i cani non sono ammessi e io e mia figlia voliamo semper con il nostro cane.Quest’anno, Борисова эпоха в vacanza con sua figlia nel territorio di Краснодар. Va bene, ma non era abbastanza per lei. История моды Александр Васильев sogna il suo, professionalale, ma anche costoso. Александр Васильев — Voglio avere un new archivio per la mia collection di costumi в Mosca.Questo dovrebbe essere un store indipendente, — sottolinea e guessche un normal monolocale a Bibirevo non è la sua opzione. Non è pronto a fare un regalo così costoso a se stesso e spera che i fan o gli ammiratori lo aiutino.

Image
Синтетический липопротеин низкой плотности (sLDL) избирательно доставляет паклитаксел в опухоль с низкой системной токсичностью
Abstract
Липопротеин низкой плотности (LDL), который является основным носителем для доставки холестерина, был использован в качестве отличного кандидата для Доставка лекарств к опухоли основана на высоких требованиях к холестерину многих раковых клеток. Имитируя структуру и состав ЛПНП, мы разработали синтетический липопротеин низкой плотности (sLDL) для инкапсуляции паклитаксел-альфа-линоленовой кислоты (PALA) для терапии опухолей.Нагруженные PALA sLDL (PALA-sLDL) и PALA-нагруженные микроэмульсии (PALA-ME, без домена связывания для LDLR) показали одинаковые размеры с высокой эффективностью загрузки лекарственного средства (> 90%). Исследования in vitro продемонстрировали, что PALA-sLDL демонстрирует повышенную способность захвата клетками и лучшую цитотоксичность в отношении гиперэкспрессированных LDLR-клеток U87 MG по сравнению с PALA-ME. Механизмы захвата PALA-sLDL вовлечены в рецептор-опосредованный эндоцитоз и макропиноцитоз. Кроме того, исследования in vivo биораспределения и ингибирования роста опухоли PALA-sLDL были исследованы на мышах с опухолью U87 MG с ксенотрансплантатом.Результаты показали, что PALA-sLDL демонстрирует более высокое накопление опухоли, чем PALA-ME, и более высокую эффективность ингибирования опухоли (72,1%) по сравнению с Taxol ^® (51,2%) и PALA-ME (58,8%), но с меньшей токсичностью. Эти исследования показали, что sLDL потенциально можно использовать в качестве ценного носителя для селективной доставки противоопухолевых препаратов к опухоли с низкой системной токсичностью.
Ключевые слова: синтетический липопротеин низкой плотности (sLDL), биомиметик, PTX-альфа линоленовая кислота (PALA), противоопухолевая эффективность, низкая системная токсичность
ВВЕДЕНИЕ
Химиотерапия рака является общепринятым подходом для лечения злокачественные новообразования.Однако большинство химиотерапевтических агентов часто вызывают серьезные побочные эффекты, поскольку они вызывают аналогичную цитотоксичность как в раковых, так и в здоровых клетках. Следовательно, эффективная и сайт-специфическая доставка противоопухолевых препаратов к опухоли представляет собой важнейшую проблему для успеха терапии рака.
Паклитаксел (PTX) — одно из наиболее широко используемых соединений при лечении злокачественных новообразований человека, но ограничено его низкой растворимостью в воде (0,3 мкг / мл) [1, 2]. В настоящее время Cremophor EL ^® (полиоксиэтилированное касторовое масло) и этанол в соотношении 1: 1 используется для увеличения растворимости PTX и продается как Taxol ^®.Однако Cremophor EL может вызывать множество побочных эффектов, таких как реакции гиперчувствительности и нейротоксичность [3]. Чтобы избежать неблагоприятного воздействия обычных составов PTX, появилось множество нанопрепаратов, кульминацией которых стал коммерческий продукт Abraxane ^®, который допускает более высокие дозы PTX по сравнению с Taxol ^® из-за отсутствия Cremophor EL. [4]. Однако высокая цена и высокая токсичность, вызванная метаболизмом, серьезно ограничивают использование Abraxane® ^® [5].Таким образом, существует большой спрос на разработку более эффективной и безопасной системы доставки для PTX.
Существует множество свидетельств того, что многие типы раковых клеток имеют необычно высокие потребности в холестерине. Липопротеины низкой плотности (ЛПНП) являются нормальным компонентом крови и действуют как основной носитель для доставки холестерина в ткани [6]. Рекрутирование ЛПНП в раковые клетки делает ЛПНП отличным кандидатом для доставки различных видов лекарств и контрастных агентов за счет депонирования в его липофильном ядре или гидрофильной оболочке [7–9].Основным липопротеином ЛПНП является аполипопротеин В-100 (апоВ-100), который представляет собой гликопротеин массой 550 кДа с девятью аминокислотами (3359–3367, RLTRKRGLK), служащим связывающим доменом для рецептора ЛПНП (LDLR) [10, 11]. Глиобластома — одна из наиболее распространенных и злокачественных первичных опухолей головного мозга, которая имеет высокий уровень смертности и короткий средний прогноз благодаря высокой инфильтрационной способности и значительному ангиогенезу [12, 13]. LDLR высоко экспрессируется через гематоэнцефалический барьер (BBB) и клетки глиобластомы, но субэкспрессируется в нормальных клетках ткани головного мозга [14-17], что делает LDL потенциальным носителем лекарства для нацеленной доставки опухоли головного мозга.
Есть три способа получить ЛПНП. Одним из них является извлечение ЛПНП из сыворотки млекопитающих, но его трудно выделить в больших количествах, а состав и размер выделенных ЛПНП варьируются. Другой подход заключается в использовании восстановленных ЛПНП, состоящих из липидной эмульсии, стабилизированной очищенным апоВ-100 [18, 19]. Однако из-за большой молекулярной массы и легкой агрегации апоВ-100 с помощью этого подхода невозможно генерировать большие количества восстановленных ЛПНП. Недавние исследования доказали, что возможно создать синтетический ЛПНП (sLDL), используя липидную эмульсию (ME) и пептид, состоящий из LDLR-связывающего домена апоВ-100, для замены сывороточного LDL [11, 20, 21].
В этом исследовании sLDL, который имитирует LDL, был выбран в качестве носителя для доставки PTX в опухоль. Однако эффективность загрузки PTX в sLDL слишком мала. Полиненасыщенные жирные кислоты являются важными питательными веществами в организме человека и играют большую роль в обмене веществ. Недавние исследования показали, что полиненасыщенные жирные кислоты могут снижать риск сердечно-сосудистых заболеваний и проявлять противоопухолевую активность за счет образования биоактивных липидных метаболитов [22, 23]. Альфа-линоленовая кислота (АЛК) является одной из наиболее изученных ненасыщенных жирных кислот и оказывает антипролиферативное действие на опухоль [24, 25].Мы синтезировали конъюгаты PTX-ALA (PALA) и предположили, что PALA может улучшить липофильность PTX и впоследствии повысить эффективность загрузки PTX в sLDL. Затем связывающий домен LDLR апоВ-100 был конъюгирован с DSPE-PEG и дополнительно модифицирован на поверхности микроэмульсии для достижения ожидаемого нацеливания на опухоль и терапевтического эффекта.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Синтез DSPE-PEG
₂₀₀₀-пептида и PALA
DSPE-PEG ₂₀₀₀ -пептид (рисунок) был синтезирован с использованием DSPE-PEG ₂₀₀₀ -Mal и пептида реакцией присоединения Майкла.Об успешном синтезе свидетельствовали молекулярные сдвиги около 5192,43 m / z, и каждый пик находился на расстоянии 44 Да от молекулярной массы мономера этиленоксида в анализе MALDI-TOF MS (рисунок). Прирост молекулярной массы DSPE-PEG ₂₀₀₀ -пептида из DSPE-PEG ₂₀₀₀ -MAL составлял около 2210 Да, что соответствовало молекулярной массе пептида.
Схемы синтеза DSPE-PEG2000-пептида (A) и его MALDI-TOF MS (B)
PALA (рисунок) был синтезирован из PTX и ALA в одну стадию путем связывания ALA с PTX на 2′- гидроксильное положение.Об успешном синтезе свидетельствовали молекулярные сдвиги в анализе MALDI-TOF MS (рисунок), в котором сдвиги в 1152, 1136 и 855 подразумевали [PALA + K ⁺], [PALA + Na ⁺] и [PTX + H ⁺] соответственно. Кроме того, идентификация PALA была также подтверждена с помощью ЯМР ¹ H. По сравнению с PTX, химические сдвиги PALA при 1 ppm и 5,35 ppm, которые соответственно представляют водород в метильных и двойных связях ALA, указывают на успешное ковалентное связывание PTX и ALA (рисунок).
Схемы синтеза PALA (A) и его MALDI-TOF MS (B) и ¹ H ЯМР (C)
Получение и характеристика PALA-ME и PALA-sLDL
PALA-ME и PALA- sLDL были приготовлены модифицированным методом эмульгирования-ультразвуковой обработки (рисунок). Разница между PALA-ME и PALA-sLDL заключалась в том, что PALA-sLDL содержал DSPE-PEG ₂₀₀₀ -пептид, в то время как PALA-ME не содержал. Эффективность загрузки PALA в PALA-ME была значительно выше, чем у PTX, что согласуется с нашими ожиданиями (рисунок).Как видно на рисунке и, и PALA-ME, и PALA-sLDL имели одинаковые размеры и сферические формы. Средний размер частиц, гранулометрический состав и эффективность загрузки PALA-ME и PALA-sLDL показаны в таблице.
Подготовка PALA-sLDL
( A ). PALA-ME был получен идентичным способом, но не содержал DSPE-PEG ₂₀₀₀ -пептид. Эффективность загрузки PTX-ME и PALA-ME ( n = 3) ( B ). Распределение размеров PALA-ME ( C ) и PALA-sLDL ( D ) по динамическому светорассеянию.Просвечивающая электронная микрофотография PALA-ME ( E ) и PALA-sLDL ( F ).
Таблица 1
Характеристики наночастиц ( n = 3)
Эффективность захвата (%)
Название образца Диаметр ^* (нм) Индекс полидисперсности
PALA-ME 51,80 ± 0,29 0,102 ± 0,017 92,36 ± 0,92
PALA-sLDL 66.80 ± 1,03 0,163 ± 0,015 95,39 ± 0,76
Экспрессия LDLR в клетках U87 MG и HepG2
ELISA использовали для обнаружения LDLR в клетках U87 MG и HepG2. Было определено, что количество LDLR в клетках U87 MG и HepG2 составляет 22,96 и 6,38 нг / 10 ⁴ клеток. Учитывая молекулярную массу ЛПНП (115 кДа), количество экспрессии ЛПНП в клетках U87 MG и HepG2 было рассчитано как 1,20 × 10 ⁷ и 3,34 × 10 ⁶ / клетка (рисунок), соответственно.
Количество ЛПНП в отдельной клетке
Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 3).
Поглощение клетками клетками U87 MG и HepG2
Поглощение клетками определяли по флуоресценции свободного кумарина-6 (COU) и COU, загруженных в различные препараты (COU-ME и COU-sLDL), с помощью проточной цитометрии и конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) в клетках U87 MG и HepG2 соответственно. После инкубации в течение 2 часов значительно более высокая интенсивность флуоресценции наблюдалась в клетках U87 MG после обработки COU-sLDL по сравнению с COU-ME, что указывает на то, что поглощение COU-sLDL было значительно увеличено из-за существования sLDL (рисунок) .Более того, такой же результат наблюдался с помощью CLSM для клеток U87 MG (рисунок). В то время как для клеток HepG2 не было значительной разницы в интенсивности флуоресценции групп COU-sLDL и COU-ME (рисунок), что подразумевает, что поглощение COU-sLDL и COU-MR для клеток HepG2 было одинаковым. Результат CLSM для клеток HepG2 (рисунок) соответствовал результатам, полученным при проточной цитометрии.
Поглощение COU клетками U87 MG, определенное с помощью проточно-цитометрического анализа (A) и конфокального анализа (B).
Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 3).
Поглощение COU клетками HepG2, определенное с помощью проточного цитометрического анализа (A) и конфокального анализа (B)
Результаты представлены как среднее ± стандартное отклонение ( n = 3).
Цитотоксичность PALA-sLDL
CCK-8 использовали для анализа цитотоксичности Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL против клеток HepG2 и U87 MG после инкубации в течение 48 часов. Как показано на рисунке, жизнеспособность клеток HepG2 и U87 MG зависела от концентраций РТХ. При низкой концентрации РТХ (<1 мкМ) Taxol ^® показал более высокую цитотоксичность, чем PALA, PALA-ME и PALA-sLDL.Цитотоксичность PALA, PALA-ME и PALA-sLDL увеличивалась с увеличением концентрации PTX и почти до такого же уровня, когда концентрация PTX составляла более 5 или 10 мкМ. Цитотоксичность PALA-sLDL была слабее, чем PALA, для клеток HepG2, в то время как цитотоксичность PALA-sLDL была более сильной в отношении клеток U87 MG, что может быть связано с различной дозой клеточного поглощения PALA из разных составов. IC ₅₀ четырех составов для различных клеточных линий показаны в таблице.
Цитотоксичность различных составов для HepG2 (A) и U87 MG (B)
Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение ( n = 4).
Таблица 2
IC _{Обработка 50} (мкМ) клеток HepG2 и U87 MG различными препаратами ( n = 4)
21 Таксол PAL21A21 PALA-ME 907
Клеточные линии Таксол PALA-sLDL
HepG2 0.0131 ± 0,0059 0,131 ± 0,023 0,319 ± 0,042 0,424 ± 0,111
U87 MG 1,14 ± 0,29 1,67 ± 0,28 4,98 ± 0,64 1,28 эксперимент по блокированию рецепторов и механизм захвата клетками U87 MG
Чтобы подтвердить, что механизм захвата sLDL связан с высоким уровнем экспрессии LDLR, мы провели тест конкурентного блока путем предварительной инкубации с избытком свободного пептида для насыщения ЛПНП на поверхности клеток U87 MG.На рисунке показано, что интенсивность флуоресценции клеток, инкубированных с COU-sLDL, снижалась после блокирования свободным пептидом в течение 0,5 часа, что указывает на то, что интернализация COU-sLDL была связана с экспрессией LDLR.
Эксперимент по блокировке рецепторов (A) и механизм поглощения (B) клетками U87 MG
Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение ( n = 3).
Эффекты истощения АТФ и различных ингибиторов эндоцитоза на захват sLDL оценивали на клетках U87 MG.Как показано на рисунке, поглощение COU-sLDL клетками U87 MG значительно ингибировалось NaN ₃ (агент истощения АТФ), M-β-CD (агент истощения холестерина), хлорпромазин (клатрин-опосредованный ингибитор эндоцитоза), нистатин ( ингибитор эндоцитоза, опосредованного кавеолами) и вортманнин (ингибитор макропиноцитоза), что указывает на то, что поглощение COU-sLDL зависит от энергии и участвует в опосредованном кавеолами пути эндоцитоза, пути клатрин-опосредованного эндоцитоза и макропиноцитозе.Хлорпромазин (ингибитор закисления эндосом) не ингибировал поглощение COU-sLDL, что означает, что поглощение COU-sLDL может не быть связано с закислением эндосом.
Biodistribution
in vivo
Клетки U87 MG (5,0 × 10 ⁶) имплантировали подкожно в правую подмышку голых мышей для создания модели опухоли ксенотрансплантата. Для мониторинга биораспределения свободных DiR, DiR-ME и DiR-sLDL после введения в течение 72 часов использовалась флуоресцентная визуализация в реальном времени.Как показано на рисунке, свободный DiR быстро выводится из организма. В опухоли практически не было видимого распределения свободного DiR. Но для DiR-ME и DiR-sLDL было обнаружено, что сигналы флуоресценции в опухоли со временем увеличиваются и достигают максимума через 36 часов, что может способствовать эффекту ЭПР. Более того, по сравнению с DiR-ME было показано, что интенсивность флуоресценции накопления DiR-sLDL в опухоли была сильнее во всех временных точках, что можно объяснить синергическим направлением эффекта EPR и рецептор-опосредованного эндоцитоза sLDL.
In vivo NIR-флуоресцентная визуализация мышей с опухолью U87 MG через 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 60 и 72 часа после в / в инъекции свободных DiR, DiR-ME и DiR-sLDL
Участок опухоли отмечен пунктирным кружком.
Подавление роста опухоли
in vivo
По сравнению с контролем объем опухоли у мышей после лечения Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL в течение 10 дней (рисунок) составлял 2,1, 2,0, 2,4 и 3,6 раза соответственно.Вырезанные опухоли мышей, обработанных PALA-sLDL, также имели наименьший размер (рисунок) и вес (рисунок). Эти результаты показали, что PALA-sLDL оказывает сильнейшее противоопухолевое действие in vivo . Кроме того, хотя цитотоксичность PALA была слабее, чем у Taxol ^® in vitro , PALA in vivo продемонстрировал противоопухолевую эффективность, аналогичную таксолу ^®.
Профиль объема опухоли-времени (A) и профили массы тела-времени (B) голых мышей BALB / c с опухолью U87 MG после инъекции 0.9% NaCl (контроль), Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL
Фотография ( C ) и вес ( D ) солидных опухолей, удаленных из различных групп лечения по окончании исследования. Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 6).
Изменение веса мышей
Потеря веса является важным показателем для мониторинга побочных эффектов химиотерапии опухолей. Масса тела (рисунок) мышей, получавших таксол ^®, значительно снизилась и была самой легкой во всех группах, что указывает на то, что таксол ^® обладал самой сильной токсичностью.Кроме того, последовательное увеличение массы тела мышей, получавших соответственно PALA, PALA-ME и PALA-sLDL, показало, что ковалентная модификация и нано-составы могут снизить токсичность PTX. Кроме того, наибольшая прибавка в весе у мышей, получавших PALA, может быть связана с питательной ролью полиненасыщенных жирных кислот.
Иммуногистохимический анализ ксенотрансплантатов
Противоопухолевая эффективность PALA-sLDL была дополнительно подтверждена морфологическим и иммуногистохимическим анализами.Парафиновые срезы иссеченной опухоли использовали для анализа H&E. По сравнению с контрольной группой, неплотное расположение клеток, точечный участок или небольшой очаг некроза, сжатие и агглютинация ядра и пустого участка наблюдались во всех группах Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL (рис. ), что свидетельствовало об изменении морфологии клеток и структуры опухолевой ткани.
Гистологический (H&E) анализ образцов опухолей из разных групп лечения
Обнаружение апоптоза TUNEL проводили с использованием замороженных срезов опухолевых тканей, на которых красный цвет TUNEL указывал на апоптоз опухолевых клеток (рисунок).Все группы лечения показали положительное окрашивание TUNEL, а индекс апоптоза в группах Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL был в 3,50, 3,51, 6,31 и 7,88 раз выше, чем в контрольной группе (рисунок). .
Терапевтический эффект на апоптоз путем окрашивания рассеченной опухолевой ткани по TUNEL (A)
Апоптотические индексы опухолей в каждой группе ( B ). Результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение ( n = 6).
ОБСУЖДЕНИЕ
ЛПНП является естественным переносчиком холестерина в сосудистой системе.Нанопрепараты, имитирующие ЛПНП, изучались при доставке лекарств к опухолям [20, 21]. Синтетический подход был принят в этом исследовании для получения sLDL, состоящего из основной композиции LDL и LDLR-связывающего домена (RLTRKRGLK) аполипопротеина [10, 26]. Первоначально был выбран PTX для инкапсуляции в sLDL, но эффективность загрузки была ниже 20% (как показано на рисунке). Учитывая сильную гидрофобность ядра ЛПНП, было высказано предположение, что увеличение липофильности PTX может улучшить эффективность загрузки лекарственного средства.Исследование продемонстрировало 4-кратное увеличение включения паклитаксела олеата в ЛПНП по сравнению с паклитакселом [27]. Таким образом, производное жирной кислоты, ALA, было выбрано для конъюгирования с PTX для повышения липофильности PTX в нашей работе. Конъюгация ALA-PTX может увеличивать межмолекулярное взаимодействие между лекарственным средством и основными составляющими ЛПНП, такими как высоколипофильные триглицериды и сложные эфиры холестерина, что может повышать эффективность загрузки лекарственного средства в sLDL. Воодушевило то, что эффективность загрузки PALA была значительно увеличена до более чем 90%.После загрузки PALA диаметр PALA-sLDL составлял около 66 нм, что, как считалось, обеспечивает отличную экстравазацию и распределение в опухолевых тканях за счет эффекта ЭПР [28–31].
Хотя цитотоксичность in vitro PALA на клетки HepG2 и U87 MG была слабее, чем у PTX (рисунок), противоопухолевый эффект in vivo PALA на несущих опухоль U87 MG голых мышей BALB / c был аналогичен Таксол ^® (рисунок). Что еще более важно, PALA продемонстрировал относительно низкую токсичность in vivo по сравнению с PTX с точки зрения изменения массы тела.Это явление можно объяснить причиной того, что высвобождение PTX из PALA ниже, чем у Taxol ^®, поскольку процесс разложения PALA был длительным, а период полураспада PALA больше, чем у PTX in vivo [ 32]. Более того, питательная роль полиненасыщенных жирных кислот может противостоять токсичности PTX [33]. Аналогичные результаты были получены при исследовании скваленоил-PTX, который показал более слабый противоопухолевый эффект, чем PTX in vitro , в то время как аналогичный терапевтический результат и более мягкие изменения массы тела и более высокая выживаемость in vivo [34] .
Печень является основным органом метаболизма ЛПНП, и ЛПНП чрезмерно экспрессируется в клетках ГЭБ [14, 15] и глиобластомы [16, 17]. Линии клеток HepG2 и U87 MG были отобраны для оценки противоопухолевой активности различных препаратов. Однако клеточное поглощение и цитотоксичность PALA-sLDL не показали значительного улучшения, чем PALA-ME в клетках HepG2, но продемонстрировали лучший эффект на клетки U87 MG (Фигуры и). Эти результаты соответствовали уровню экспрессии LDLR в двух типах клеток (рисунок), что указывает на то, что sLDL может поглощаться раковыми клетками с более высокой экспрессией LDLR.Более того, исследование уровней LDLR и белка, связанного с LDLR, показывает, что клетки U87 MG имели в 2 раза больше рецепторов LDL и имели 3,71-кратное содержание белка, связанного с рецепторами, чем клетки HepG2 [35]. Механизм клеточного поглощения липопротеинов низкой плотности представляет собой эндоцитоз, опосредованный рецепторами, который был подтвержден экспериментами по блокированию рецепторов и экспериментами с ингибиторами эндоцитоза (рисунок).
In vivo почти не было распределения свободного DiR в опухоли, а свободный DiR быстро удалялся и почти исчезал через 72 часа (рисунок).Накопление DiR-sLDL в опухоли было выше, чем DiR-ME, и более высокая интенсивность флуоресценции могла быть обнаружена до 72 часов, что указывает на превосходную способность опухоли к накоплению и длительный период полужизни DiR-sLDL в кровотоке. Эти характеристики являются решающими факторами для противораковых агентов, обеспечивающих выдающийся терапевтический эффект и дегрессивную системную токсичность. Кроме того, печень и селезенка являются главными органами ретикулоэндотелиальной системы (РЭС), поэтому биораспределение DiR-ME и DiR-sLDL в этих тканях выше, чем в других частях тела.
Для мышей, несущих опухоль с помощью ксенотрансплантата U87 MG, ожидалось, что PALA-sLDL будет накапливаться в опухоли для усиления противоопухолевого эффекта одновременно за счет эффектов EPR и опосредованного LDLR целевого эффекта. В результате эффективность ингибирования опухолей таксолом ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL составила 51,2%, 50,0%, 58,8% и 72,1% соответственно, что продемонстрировало, что PALA-sLDL обладает самым сильным противоопухолевым действием. эффект in vivo , и его противоопухолевый эффект был выше, чем у Taxol ^® (рисунок).На основании результатов морфологического и иммуногистохимического анализа показано, что сильный противоопухолевый эффект PALA-sLDL связан с усилением апоптоза опухолевых клеток и повреждением опухолевых тканей. (Рисунки и).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Дистеароил-глицерофосфоэтаноламин-полиэтиленгликоль ₂₀₀₀-малеимид (DSPE-PEG ₂₀₀₀ -Mal) был приобретен у NOF Corporation (Токио, Япония). Пептид (CYKLEGTTRLTRKRGLKLA) был индивидуально синтезирован GL Biochem (Шанхай, Китай).Паклитаксел (PTX) был приобретен в Norzer Pharmaceutical Co., Ltd. Альфа-линоленовая кислота (ALA) была приобретена в ANPEL Laboratory Technologies (Шанхай, Китай). Фосфатидилхолин сои (SPC), неэтерифицированный холестерин (UC), триолеин (TO) и холестерилолеат (CO) были от Lipoid (Людвигсхафен, Германия), Wako Ltd. (Токио, Япония), Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd (Пекин, Китай) и InnoChem Science & Technology Co., Ltd. (Пекин, Китай) соответственно. Solutol ^® HS 15 производства BASF (Германия).Дициклогексилкарбодиимид (DCC) и 4-диметиламинопиридин (DMAP) были получены от Sinopharm Group Co., Ltd. Набор для подсчета клеток -8 (CCK-8) был получен от SolarbioScience & Technology Co., Ltd (Пекин, Китай). Кумарин-6 (COU) был приобретен в компании Sigma-Aldrich (США). Набор TUNEL был получен от KeyGEN Biotech Co., Ltd. (Нанкин, Китай). Набор для иммуноферментного анализа (ELISA) для LDLR был получен от USCN Life Science Inc. Модифицированная среда Игла (MEM), DMEM, пенициллин-стрептомицин, трипсин и Hoechst 33258 были получены от Macgene Technology (Пекин, Китай).
Культура клеток
Клетки U87 MG (клетки глиобластомы человека) культивировали в MEM с добавлением 1% заменимых аминокислот, 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS, GIBCO, США), 100 МЕ / мл пенициллина и 100 мг / мл. мл стрептомицина. Клетки HepG2 (опухолевые клетки печени человека) культивировали в среде DMEM с добавлением 1% заменимых аминокислот, 10% FBS, 100 МЕ / мл пенициллина и 100 мг / мл стрептомицина.
ELISA для обнаружения LDLR
ELISA использовали для обнаружения LDLR в клетках U87 MG и HepG2.Прежде всего, клетки U87 MG и HepG2 были разрушены ультразвуком соответственно. После ультрацентрифугирования при 10000 об / мин в течение 10 мин был получен супернатант. Затем разбавленный стандарт, холостой пробы и образец обрабатывали в соответствии с протоколом производителя. После этого оптическую плотность каждой лунки измеряли с помощью ридера для микропланшетов iMark (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США) при длине волны 450 нм.
Синтез DSPE-PEG
₂₀₀₀-Пептид
Пептид конъюгировали с DSPE-PEG ₂₀₀₀ -MAL (1.2: 1) в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH 7,4) при комнатной температуре (20–25 ° C) в течение 6 ч при интенсивном перемешивании [36, 37]. Реакционную смесь диализовали (отсечение молекулярной массы MWCO 3,5 кДа) в дистиллированной воде в течение 24 часов для удаления непрореагировавших пептидов. Конечный раствор лиофилизировали и хранили при -20 ° C до использования. Полученный пептид DSPE-PEG ₂₀₀₀ подтверждали путем определения молекулярной массы полученного пептида DSPE-PEG ₂₀₀₀ с использованием MALDI-TOF MS.
Синтез конъюгатов PTX-ALA (PALA)
PALA был синтезирован из PTX и ALA в одну стадию, которая связала ALA с PTX в 2′-гидроксильном положении [38]. К раствору PTX (140 мг, 164 мкмоль) в метиленхлориде (10 мл) в атмосфере аргона добавляли DMAP (20 мг, 164 мкмоль), DCC (67,6 мг, 328 мкмоль) и ALA (46 мг, 164 мкмоль). добавлен. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 часов. После разбавления подходящим диэтиловым эфиром реакционную смесь последовательно промывали 5% -ной соляной кислотой, водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия.Смесь сушили над сульфатом натрия и концентрировали на роторном испарителе. Наконец, для разделения продукта использовали радиальную хроматографию (силикагель; этилацетат-гексан). ¹ H ЯМР и MALDI-TOF MS использовали для характеристики продукта.
Приготовление PALA-ME и PALA-sLDL
Микроэмульсия, содержащая PALA (PALA-ME), была приготовлена модифицированным методом эмульгирования-ультразвуковой обработки [37, 39]. Вкратце, PALA, триолеин (TO), холестерилолеат (CO) и неэтерифицированный холестерин (UC) растворяли в соответствующем количестве этанола и нагревали на водяной бане до 60 ° C.Затем этанол удаляли нагреванием и перемешиванием магнитной мешалкой в течение нескольких минут с образованием масляной фазы. Solutol ^® HS 15 и SPC растворяли в PBS и выдерживали на водяной бане при 60 ° C для образования водной фазы. Водную фазу добавляли к масляной фазе при перемешивании магнитной мешалкой при 600 об / мин. После этого полученную первичную эмульсию диспергировали с помощью ультразвука и помещали в ледяную баню до получения дисперсии для затвердевания. Для приготовления загруженной PALA биомиметической микроэмульсии липопротеинов низкой плотности (PALA-sLDL) использовали идентичную процедуру, за исключением того, что DSPE-PEG ₂₀₀₀-пептид использовали для замены эквивалентного количества SPC.PALA-ME и PALA-sLDL фильтровали через мембранный фильтр 0,22 мкм для удаления лекарственного средства, которое не было загружено в нанопрепараты.
Характеристика PALA-ME и PALA-sLDL
Средний диаметр и распределение частиц PALA-sLDL и PALA-ME были измерены методом динамического светорассеяния (DLS) с использованием Malvern Zetasizer Nano ZS (Zetasizer 3000HS, Малверн, Вустершир, UK) при 25 ° C. PALA-sLDL и PALA-ME также были морфологически охарактеризованы с помощью просвечивающего электронного микроскопа (TEM, JEOL, JEM-200CX, Япония).
Количество PALA, включенного в PALA-sLDL и PALA-ME, определяли с помощью ВЭЖХ. Система ВЭЖХ состояла из насоса LC-20AT, УФ-детектора SPD-20A и автосамплера SIL-20A (Shimadzu, Япония). Подвижная фаза состояла из ацетонитрила: бидистиллированной воды [0–10 мин (6: 4), 10–12 мин (6: 4–0: 10), 12–28 мин (0:10), 28–30 мин. , (0: 10–6: 4)] вводили со скоростью 1 мл / мин. Длина волны обнаружения составляла 227 нм. Использовали колонку RP-18 (4,6 мм × 250 мм, размер пор 5 мкм, Diamonsil ^®).Эффективность загрузки рассчитывалась по W _{, загруженное лекарство} / W _{, общее лекарство} × 100%, где W _{общее лекарство} и W _{загруженное лекарство} представляет количество PALA до и после фильтрации через мембранный фильтр 0,22 мкм, соответственно.
Исследования клеточного поглощения с помощью проточной цитометрии и конфокального лазерного сканирующего микроскопа
Клеточное поглощение U87 MG и HepG2 исследовали с помощью проточной цитометрии путем определения флуоресценции различных составов, нагруженных кумарином-6 (COU).Клетки U87 MG и HepG2 высевали в 6-луночные планшеты (Corning, NY, USA) в количестве примерно 4 × 10 ⁵ клеток / лунку и инкубировали в течение 24 часов. Затем среду в каждой лунке заменяли свежей средой MEM или DMEM без FBS и содержащей свободный COU (100 нг / мл) или эквивалентную концентрацию загруженного COU ME (COU-ME) и загруженного COU sLDL (COU-sLDL) для 2 часа под 5% CO ₂ при 37 ° C соответственно. После инкубации клетки трижды промывали холодным PBS, отделяли 0,05% трипсином и еще трижды промывали холодным PBS для удаления COU, который не поглощался клетками.Наконец, клетки ресуспендировали в 0,5 мл PBS и детектировали с помощью проточной цитометрии (Becton Dickinson, Сан-Хосе, Калифорния, США). Автофлуоресценцию клеток использовали в качестве контроля.
Кроме того, конфокальный лазерный сканирующий микроскоп (CLSM) также использовался для подтверждения клеточного поглощения с U87 MG и HepG2. Вкратце, клетки U87 MG и HepG2 высевали в чашки со стеклянным дном в количестве примерно 4 × 10 ⁵ клеток / чашку и инкубировали в течение 24 часов. Затем среду в каждой чашке заменяли свежей средой MEM или DMEM без FBS и содержащей свободный COU (100 нг / мл) или эквивалентную концентрацию COU-ME и COU-sLDL в течение 2 часов при 5% CO ₂ ат. 37 ° С соответственно.После инкубации клетки трижды промывали холодным PBS и фиксировали 4% формальдегидом в течение 10 мин при 37 ° C. После еще трех полосканий холодным PBS, Hoechst 33258 (5 мкг / мл) использовали для окрашивания ядер клеток в течение дополнительных 20 минут при 37 ° C. Для визуализации клеток использовали CLSM (Leica, Гейдельберг, Германия). COU и Hoechst 33258 возбуждали лазерами с длиной волны 488 нм и 345 нм соответственно.
Анализ цитотоксичности
Цитотоксичность таксола ^®, PALA (6 мг / мл, растворенного в Cremophor EL: этаноле (1: 1)), PALA-ME и PALA-sLDL в отношении клеток U87 MG и HepG2 измеряли с использованием набор для подсчета клеток -8 (CCK-8).Клетки высевали в 96-луночный планшет при плотности примерно 5000 клеток на лунку. После инкубации в течение 24 часов клетки обрабатывали различными препаратами в диапазоне концентраций в течение 48 часов. Затем среду в каждой лунке заменяли 100 мкл свежей клеточной среды, содержащей 5% раствор CCK-8. После инкубации в течение 2 ч оптическую плотность каждой лунки измеряли с помощью ридера для микропланшетов iMark (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния, США) при длине волны 570 нм.
Эксперимент по блокированию рецепторов и оценка механизма захвата
Проточная цитометрия, описанная выше, была использована для эксперимента по блокированию рецепторов LDLR и оценки механизма захвата.В эксперименте по блокированию рецепторов свободный пептид добавляли к бессывороточной культуральной среде и инкубировали в течение 0,5 ч перед добавлением COU-sLDL. В эксперименте по механизму поглощения NaN ₃ (1%), M-β-CD (10 мМ), хлорохин (30 мкМ), хлорпромазин (20 мкМ), нистатин (25 мкМ) и вортманнин (0,8 мкМ) были соответственно добавляли к бессывороточной культуральной среде и инкубировали в течение 0,5 ч перед добавлением COU-sLDL.
In vivo Характеристики биораспределения и накопления опухолей sLDL
Самцы голых мышей BALB / c (17-20 г) были приобретены у Vital River (Пекин, Китай), и все животные содержались в стандартных условиях содержания с свободный доступ к стандартной пище и воде.Весь уход за животными и обращение с ними осуществлялись с одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных при Научном центре здравоохранения Пекинского университета.
клеток U87 MG (5,0 × 10 ⁶) имплантировали подкожно в правую подмышечную впадину голых мышей. Когда объем опухоли достигал приблизительно 400 мм ³, мышей случайным образом делили на 3 группы ( n = 3 на группу) и обрабатывали свободными DiR, DiR-ME и DiR-sLDL путем инъекции в хвостовую вену. Доза DiR составляла 80 мкг / кг.Затем через 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48 и 72 ч введения мышей анестезировали и визуализировали с помощью системы визуализации FX PRO Multi-mode in vivo (США).
Исследование ингибирования роста опухоли in vivo
Для оценки эффективности ингибирования опухоли in vivo модели мышей-опухоленосителей были созданы в соответствии с процедурой, описанной выше. Когда объем опухоли достигал приблизительно 100 мм ³, мышей случайным образом делили на 5 групп ( n = 6 на группу) и обрабатывали 0.9% физиологический раствор (в качестве контрольной группы), Taxol ^®, PALA, PALA-ME и PALA-sLDL соответственно. Доза PTX составляла 7,5 мг / кг. Объем опухоли рассчитывали по формуле: Объем (³ мм) = ( a × b ²) / 2, где a и b — большая и малая оси опухоли. [37]. Эффективность ингибирования опухоли оценивали путем сравнения среднего объема опухоли обработанных мышей (T) с объемом опухоли контрольных мышей (C), то есть эффективность ингибирования опухоли = (1 – T / C) × 100 (%).Через 10 дней мышей умерщвляли, ткани опухоли вырезали, взвешивали и фотографировали. Вес тела каждой мыши контролировали каждый день.
Иммуногистохимический анализ ксенотрансплантатов
Патологические изменения опухолевых тканей, удаленных у мышей nude, оценивали с помощью окрашивания гематоксилином / эозином (H&E). Вкратце, опухоли иссекали на 10 день, фиксировали в 4% растворе параформальдегида, заливали парафином и разрезали на срезы толщиной 5 мкм. Окрашивание H&E проводили на всех ксенотрансплантатах для анализа морфологии.
Апоптоз опухолевой ткани определяли с помощью анализа мечения ник-конца dUTP (TUNEL), опосредованного терминальной дезоксинуклеотидтрансферазой (TdT). Вкратце, опухоли иссекали, замораживали в среде для заливки ОКТ и разрезали на срезы толщиной 5 мкм. Все замороженные срезы были обнаружены с помощью набора для определения гибели клеток in situ (KeyGEN, Нанкин, Китай) в соответствии с протоколом производителя. Образцы анализировали с помощью CLSM (Leica SP5, Гейдельберг, Германия). Плотность апоптотических клеток оценивали по индексу апоптоза (AI%), который определяли как процент апоптотических клеток в общем количестве опухолевых клеток.
Статистический анализ
Все данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение (SD) трех или более образцов. При статистической оценке выполняли тест Стьюдента t или односторонний дисперсионный анализ (ANOVA). Значение P менее 0,05 считалось статистически значимым (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,005).
Воробьев перелез через забор и ругался на прохожих (фото)
Известный художник Алексей тоже считается профессиональным художником.Художник настолько озабочен собственной работой, что без замены и страховки берет на себя самые сложные трюки и так непринужденно кричит на людей, что они пугаются.
В настоящее время Алексей находится в Москве на съемках мелькающего телесериала «Девчонки» о 4-х веселых подругах, которые играют Галину Боб, Анастасию Денисову, Полину Максимову и Таисию Вилкову. Роль одного из персонажей привлекающего зрителя проекта берет на себя воробьи, которые должны болтаться на работе между U.С. и Россия и рискуют оказаться на съемочной площадке, воплощая самые смелые идеи режиссера.
Художник рассказал в собственном Instagram, что на этот раз ему велели перелезть через забор и кричал на прохожих. Алексею приходилось без страховки балансировать на большой высоте, осторожно ходить по узкой стене, часто ориентируясь на водосточную трубу. А снизу за шуткой и бесстрашными звездами наблюдали несколько фотографов. Изобразите собственный подвиг ради искусства воробьев выложите на личной страничке.
«Так время от времени начинается день.Приходит режиссер телесериала # Девчонки Сергей Корягин и делает предложение, от которого нельзя отрицать: «почему бы вам не залезть на забор и не кричать на прохожих, а мы потом #TNT покажем», — представляет Подписки собственного микроблога с волшебным и безжалостным миром кино Алексея.
Фанаты, как и ожидалось, все как 1 в страхе схватились за сердце и отругали храбреца: «Нежно не падает», «вся крайность …..», «Эти безумные, как ты от таких предложений никогда не откажешь». Ты бы только где-нибудь политик! »,« Алекс, ты чокнутый, осторожней)) бесстрашный альпинист) »,« А кукареку кричать? Сергеевич Здравствуйте.! ».
Кстати, это не самое экстремальное, что пришлось сделать Алексею. Воробьев всерьез считался рекордсменом по количеству травм среди российских звезд. Артист уже из окна прыгнул под колеса, бросился даже сгорел Многие из тех действий блондинки совершили на съемках фильма с динамиком под названием «Самоубийство».
Но на других сайтах Алексей всегда ждал опасности. Как сообщалось ранее, музыкант Melbourne Herald sun был серьезно ранен в результате неумелого обращения с автоматом Калашникова. Штурмовая винтовка.На съемках военного фильма Воробьев снялся в такой роли, что схватился за раскаленный ствол пистолета и получил серьезный ожог.
На съемках очередного фильма звезда упала с высоты 10 метров. Воробьев снялся в фильме, где его герой находится в пещере сокровищ. Внезапно она начинает рассыпаться, и Алексей, что бы это ни было, должен спасти своего экранного любовника. Съемки проходили в павильоне, а в качестве пещеры был построен специальный десятиметровый тоннель с острыми камнями внутри.В результате обрушения этих камней воробьи упали и получили множественные ранения.
разделы: Знаменитости
(PDF) Влияние различных длин волн света от светодиодов на антиоксидантную систему морских цианобактерий Synechococcus sp.
Yun et al. (2015) Половое созревание рыбы, подвергшейся воздействию светодиодов
219 http://e-fas.org
Ли Й.Х., Ду Дж.Л., Йен Ф.П., Ли С.Й., Дюфур С., Хуанг Дж.Д., Сан LT и
Чанг К.Ф.2001. Регулирование секреции гонадотропина II плазмы
половыми стероидами, ингибиторами ароматазы и антиэстрогенами в pro-
tandrous black porgy, Acanthopagrus schlegeli Bleeker. Comp
Biochem Physiol B 129, 399-406.
Ли Ю.Р., Цунекава К., Мун М.Дж., Умм Х.Н., Хуанг Джи, Осуги Т., Отаки Н.,
Сунакава И., Ким К., Воодри Х., Квон Х.Б., Сеонг Дж.Й. и Цуцуи
К. 2009. Молекулярная эволюция множественные формы кисспептинов и
рецепторов
GPR54 у позвоночных.Эндокринология 150, 2837-2846.
Lythgoe JN. 1979. Экология зрения. Clarendon Press, Oxford,
U.K., стр. 270.
Мано Х., Кодзима Д. и Фукада Ю. 1999. Экзо-родопсин: новый родопсин ро-
, экспрессируемый в шишковидной железе зебраша. Brain Res Mol
Brain Res 73, 110-118.
McCullough BD. 1999. Оценка надежности статистического программного обеспечения:
Часть II. Американский статистик 53, 149–159.
McFarland WN.1991. Визуальный мир коралловых рифов. В: Продажа П.Ф.
(Ред.) Экология рыб на коралловых рифах. Academic Press, San
Diego, USA, стр. 16-38.
Миго Х., Коуэн М., Тейлор Дж. И Фергюсон Х.В. 2007. Влияние спектрального состава
и интенсивности света на мелатонин, стресс и повреждение сетчатки
у атлантического лосося после смолта, Salmo salar. Аква-
Культура 270, 390-404.
Мин TS, An KW, Kil G-S и Choi CY.2009. Связанная с полом и тканями
экспрессия двух типов мРНК ароматазы p450 в протан-
drous black porgy, Acanthopagrus schlegeli, во время смены пола:
Профили экспрессии после введения экзогенного гормона.
Anim Cells Syst 13, 439-445.
Нельсон Э.Р., Вилер В.Б., Коул В.С. и Хабиби Х.Р. 2007. Гомологичная регуляция подтипов рецепторов эстрогена
у goldsh (Carassius au-
ratus). Мол Репрод Дев 74, 1105-1112.
Pankhurst NW и Porter MJR. 2003. Холодное и темное или теплое и светлое:
вариации на тему экологического контроля воспроизводства.
Fish Physiol Biochem 28, 385-389.
Пархар И.С., Огава С. и Сакума Ю. 2004. Захваченные лазером одиночные дигокси-
генин-меченых нейронов гонадотропин-высвобождающего гормона типов
обнаруживают новый рецептор, связанный с G-белком (Gpr54) во время созревания. у цихлиды sh. Эндокринология 145, 3613-3618.
Патил Дж. И Гунасекера Р.М. 2008. Тканевая и половая диморфная экспрессия
мРНК ароматазы яичников и головного мозга в японской медаке
(Oryzias latipes): значение их преимущественной роли
в дифференцировке и развитии яичников и нервов. Gen Comp
Endocrinol 158, 131-137.
Poling MC, Kim J, Dhamija S and Kauffman AS. 2012. Разработка —
, регуляция половых стероидов и фенотипическая характеристика экспрессии гена
RF-амид-родственного пептида (Rfrp) и рецепторов RF-амида
в гипоталамусе мыши.Endocrinology 153, 1827–
1840.
Роа Дж., Наварро TM и Тена-Семпере М. 2011. Кисспептины в репродуктивной биологии
: общие знания и последние разработки.
Биол Репрод 85, 650-660.
Роч Г.Дж., Басби Е.Р. и Шервуд Н.М. 2011. Эволюция GnRH: div-
и глубже. Gen Comp Endocrinol 171, 1-16.
Сойер С.Дж., Герстнер К.А. и Каллард Г.В. 2006. ПЦР-анализ в реальном времени
из гипофиза нерки.Дж. Эндокринол 188, 417-423.
Bentley GE, Perto N, Ukena K, Tsutsui K и Wingeld JC. 2003. Go-
-надотропин-ингибирующий пептид у певчих воробьев (Melospiza melo-
dia) в различных репродуктивных условиях и у домашних воробьев
(Passer domesticus) относительно гормона куриного гонадотропина
. J Neuroendocrinol 15, 794-802.
Бласкес М. и Пиферер Ф. 2004. Клонирование, анализ последовательности, распределение в тканях и специфическая для пола экспрессия нервной формы ароматазы P450
у молоди морского окуня (Dicentrarchus labrax).Mol Cell
Endocrinol 219, 83-94.
Boeuf G и Le Bail PY. 1999. Влияет ли свет на рост sh
? Аквакультура 177, 129-152.
Бромаж Н., Портер М. и Рэндалл С. 2001. Нормы окружающей среды —
созревания в фермерских хозяйствах с особым упором на роль
фотопериода и мелатонина. Аквакультура 197, 63-98.
Ciccone NA, Dunn IC, Boswell T, Tsutsui K, Ubuka T., Ukena K и
Sharp PJ.2004. Гормон, ингибирующий гонадотропин, подавляет экспрессию go-
надотропина альфа и бета субъединицы
фолликулостимулирующего гормона в гипофизе домашней курицы. J Neuroendo-
кринол 16, 999-1006.
Колледж WH. 2009. Кисспептины и нейрональная передача сигналов ГнРГ. Тенденции
Endocrinol Metab 20, 115-121.
de Vlaming VL. 1975. Влияние фотопериода и температуры на активность надаля у костистых карповых, Notemigonus crysoleucas.
Biol Bull 148, 402-415.
Фалькон Дж., Миго Х., Муньос-Куэто Дж. А. и Каррильо М. 2010. Текущие
знания о системе мелатонина при костистости sh. Gen Comp En-
докринол 165, 469-482.
Funes S, Hedrick JA, Vassileva G, Markowitz L, Abbondanzo S, Go-
lovko A, Yang S, Monsma FJ и Gustafson EL. 2003. KiSS-
1 рецептор GPR54 необходим для развития репродуктивной системы мышей
.Biochem Biophys Res Commun 312, 1357-
1363.
Greytak SR, Champlin D and Callard GV. 2005. Выделение и характеристика
двух форм ароматазы цитохрома Р450 в киллишах (Fun-
dulus heteroclitus): дифференциальная экспрессия в замороженных
и незагрязненных средах. Aquat Toxicol 71, 371-389.
Иваса Т., Мацудзаки Т., Мураками М., Киноучи Р., Осуги Т., Герельцет-
сег G, Ёсида С., Ирахара М. и Цуцуи К.2012. Developmen-
Изменения в гормоне, ингибирующем гонадотропин у млекопитающих,
(GnIH), ортологе RF-амид-родственного пептида (RFRP) и родственного ему рецептора
GPR147 в гипоталамусе крысы. Int J Dev Neurosci 30,
31-37.
Ким Н.Н., Шин Х.С., Чой Й.Дж. и Чой С.Й. 2014. Кисспептин регулирует экспрессию гена оси
гипоталамус-гипофиз-гонады во время полового созревания
у коричного клоуна, Amphiprion melanopus.
Comp Biochem Physiol B 168, 19-32.
Кобаяси М., Морита Т., Икегучи К., Йошизаки Г., Сузуки Т. и Ва-
Табе С. 2006. Биологическая активность рекомбинантного гольдоша in vivo
гонадотропинов, продуцируемых бакуловирусом в личинках тутового шелкопряда.
Навигация по записям
Previous Post:Кто ушел из дома 2 на последнем женском голосовании: Татьяна Кирилюк — Правда ПФО
Next Post:Христов венцислав: Венцислав Христов, новости о персоне, последние события сегодня
Leave a Reply Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *
Комментарий *
Имя *
Email *
Сайт

Рубрики
Алёна Водонаева
Боня
Виктория Боня
Водонаева
Екатерина Колисниченко
Записи эфиров
Интересные факты
Колесниченко
Новости
Разное
Раньше
Сезонные сборники
Слухи
Слухи знаменитостей
Сплетни
Эфир
Эфиры
Search for:
2019 © Все права защищены.

Название образца	Диаметр ^* (нм)	Индекс полидисперсности
PALA-ME	51,80 ± 0,29	0,102 ± 0,017	92,36 ± 0,92
PALA-sLDL	66.80 ± 1,03	0,163 ± 0,015	95,39 ± 0,76

Алексей Воробьев смеется над Ольгой Бузовой

Алексей Воробьев открестился от романа с Ольгой Бузовой

Рекомендуем

Бузова заставила Воробъева снимать штаны одним взглядом

Ольга Бузова, Алексей Воробьев, Регина Тодоренко и другие на шоу Ильи Авербуха «Ледниковый период»

Вассерман, Воробьёв и Бузова снялись в рекламе «Пятёрочки» и PepsiCo

Глава Подмосковья: Бузова – молодец, а Моргенштерну не хватает смысла

Бузова поддержала Воробьева после измены его девушки‍

Buzova Kwetara Na Ihere Anagh Eme Ya Maka ịhụnanya Ya

бывшая жена Грачевского пришла точно в таком же наряде

Детство Леры Кондры

Телевизионная карьера Леры Кондры

Музыкальная карьера Леры Кондры

Реклама

Новости СМИ Adnow

Обливки Новости

Последние новости из раздела «Культура»

Toilette D’oro, «Maybach» E Maldive: Quali Doni Sognano Buzova, Baretsky E Borisova?

Синтетический липопротеин низкой плотности (sLDL) избирательно доставляет паклитаксел в опухоль с низкой системной токсичностью

Abstract

ВВЕДЕНИЕ

РЕЗУЛЬТАТЫ

Синтез DSPE-PEG

Получение и характеристика PALA-ME и PALA-sLDL

Таблица 1

Экспрессия LDLR в клетках U87 MG и HepG2

Поглощение клетками клетками U87 MG и HepG2

Цитотоксичность PALA-sLDL

Таблица 2

Biodistribution

Подавление роста опухоли

Изменение веса мышей

Иммуногистохимический анализ ксенотрансплантатов

ОБСУЖДЕНИЕ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Культура клеток

ELISA для обнаружения LDLR

Синтез DSPE-PEG

Синтез конъюгатов PTX-ALA (PALA)

Приготовление PALA-ME и PALA-sLDL

Характеристика PALA-ME и PALA-sLDL

Исследования клеточного поглощения с помощью проточной цитометрии и конфокального лазерного сканирующего микроскопа

Анализ цитотоксичности

Эксперимент по блокированию рецепторов и оценка механизма захвата

Иммуногистохимический анализ ксенотрансплантатов

Статистический анализ

Воробьев перелез через забор и ругался на прохожих (фото)

(PDF) Влияние различных длин волн света от светодиодов на антиоксидантную систему морских цианобактерий Synechococcus sp.

Leave a Reply Отменить ответ