Dom2 online fan: Дом-2. Официальный сайт реалити-шоу

PageSpeed Score

Siteadvisor Rating

Traffic Report

Estimated Valuation

Search Engine Indexes

Search Engine Backlinks

Safety Information

Website Ranks & Scores

Web Server Information

Hosted IP Address:

Hosted Country:

Location Latitude:

Location Longitude:

Page Resources Breakdown

Homepage Links Analysis

Social Engagement

Website Inpage Analysis

Websites Hosted on Same IP (i.e. 104.27.149.97)

Sexforum | Das Schweizer Sex und Erotikforum

Das etablierte Schweizer Sexforum für alles rund um Sex und Erotik. Erfahrungsberichte und Diskussionen zu Nutten, Sexclubs, Sexkinos und Massagen.

HTTP Header Analysis

Http-Version: 1.1
Status-Code: 200
Status: 200 OK
Date: Mon, 25 Jan 2016 08:29:40 GMT
Content-Type: text/html; charset=UTF-8
Transfer-Encoding: chunked
Connection: keep-alive
Vary: User-Agent
Expires: Thu, 19 Nov 1981 08:52:00 GMT
Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0
Pragma: no-cache
X-Cache: MISS
X-XSS-Protection: 1; mode=block
X-Frame-Options: SAMEORIGIN
X-Content-Type-Options: nosniff
Server: cloudflare-nginx
CF-RAY: 26a29c93ae282e8d-MIA
Content-Encoding: gzip

Domain Information

Domain Nameserver Information

DNS Record Analysis

Similarly Ranked Websites

Scottsdale Luxury Home

Sothebys | #1 in Arizona Luxury Real Estate | Complete buyer & seller real estate services for Arizona estates, Scottsdale luxury homes, executive & athlete homes, golf properties, condos, vacation homes, & land surrounding Scottsdale & Phoenix.

Infinite Leaks

r/InfiniteLeaks: For Infinity Train leaks.

Alexa Traffic Rank

Alexa Search Engine Traffic

Full WHOIS Lookup

Domain names in the .com and .net domains can now be registered
with many different competing registrars. Go to http://www.internic.net
for detailed information.

Domain Name: DOM2-FAN.COM
Registrar: PDR LTD. D/B/A PUBLICDOMAINREGISTRY.COM
Sponsoring Registrar IANA ID: 303
Whois Server: whois.PublicDomainRegistry.com
Referral URL: http://www.PublicDomainRegistry.com
Name Server: KARA.NS.CLOUDFLARE.COM
Name Server: ROB.NS.CLOUDFLARE.COM
Status: clientTransferProhibited https://www.icann.org/epp#clientTransferProhibited
Updated Date: 22-jan-2016
Creation Date: 14-jan-2016
Expiration Date: 14-jan-2017

>>> Last update of whois database: Mon, 25 Jan 2016 08:29:39 GMT

Comments / Ratings / Reviews / Feedbacks for dom2-fan.com

эротика

Проскользнув языком секс эротика видео между ее губами, я протянул руки и раздвинул их, пока ее клитор не выступил в верхней части ее щели. Я наклонился так, чтобы обхватить его губами, и пососал, прежде чем надавить на него языком, вызывая дрожь, и ее руки вцепились в мои волосы. Неудивительно, что ее бедра приподнялись против моего лица, и в удивительно короткие сроки porn brazzers com hd video она кончила. То, что она дразнила меня обнаженной, и что она тоже была возбуждена, подтверждалось скоростью ее оргазма. Поднявшись вверх по ее телу, я простерся над ней ниц, снова поцеловав ее. «Боже мой, это было хорошо». «Да, конечно», — ответила я, услышав, как в этот момент отключился душ. «Лучше оденься, — сказал я, — твоя мама, просто выключи душ». «Мммм. Я лучше останусь с тобой голым». «Трудно пойти на ужин в таком виде». «Да, я полагаю.» На самом деле Мэри была просто в кружевном бюстгальтере и трусиках, когда тетя Трейси открыла секс дверь и вышла, как и Мэри — завернувшись в полотенце. «Твоя очередь», — сказала она, не комментируя, что Мэри все еще в основном раздета, или что она, очевидно, сняла полотенце и заменила его трусиками с открытой спиной и бюстгальтером, пока я был в комнате. Взяв sex brazzers.com movies hd сумку, которую я не собирался распаковывать, как они, так как у меня было всего несколько вещей, я взял ее с собой в душ. ~ «Вы и Мэри можете получить эту кровать», — сказала тетя Трейси, когда мы вернулись с ужина, подтвердив, что она признала, что ожидала, что я буду спать с ее дочерью, и неосознанно подтвердив решение, которое мы с Мэри приняли ранее относительно того, какая кровать , «если вы не хотите, чтобы тот free porn video hd находился подальше от окна». Когда мы вернулись в комнату после обеда, Мэри схватила ночную одежду и пошла прямо в туалет. «Ты уверен?» — спросила я, все еще не совсем веря, что тетя Трейси разрешала мне спать в одной постели с Мэри, пока она была в комнате. Подразумевалась идея, что мы будем заниматься сексом — и она будет прямо здесь, мой член расширяется при этой мысли, мой разум съеживается при watch porn videos online той же мысли. Трейси остановилась и смотрела на меня почти минуту, прежде чем заговорить. «Да, я уверен.» Она повернулась и посмотрела, а затем села на кровать, прежде чем указать мне на противоположную кровать. «Вы двое — взрослые. Вы двое уже занимались сексом раньше, и мы все это знаем. Я могу либо попытаться отрицать очевидную похоть между вами двумя, либо я могу игнорировать это. Если я попытаюсь hd free porn movies отрицать это, вы будете пытаться чтобы улизнуть, вы будете пытаться найти где-нибудь тихий уголок, чтобы перекусить, вы рискуете и попадете в то место, где вам не следует быть. Я уже знаю, что вы и Мэри занимаетесь сексом, так что вы можете также сделай это в своей постели «. Дверь в ванную открылась прямо тогда, когда Мэри вышла в комнату и сказала: «Твоя очередь». Я взглянул на тетю Трейси, она кивнула porn spankbang.com video на ванну, показывая глазами, что мне пора. Я вытащил из сумки спортивные шорты и зубную щетку и направился в ванну. На самом деле я не смотрел на Мэри, когда она выходила, но теперь, повернувшись обратно к ванне, я фактически оказался лицом к лицу с ней, когда она шла, чтобы снять одежду, в которой была. Она полностью изменилась из всего, и хотя она не была обнаженной, она почти могла быть porn youporn.com movies такой. Ее нижняя часть была заключена в облегающие шорты для мальчиков, которые заканчивались ниже ее пупка, которые не были такими открытыми, как ее нижнее белье в стрингах ранее, ее пухлые половые губы создавали очень заметный верблюжий носок в ее промежности. Ее живот был обнажен, а верх — белая майка из спагетти , которая была достаточно тонкой, чтобы не скрывать ее соски, большая часть ее груди была porn redtube.com hd обнажена над U-образной шеей с глубоким вырезом. Я не сомневался, что она нарочно оделась чертовски сексуально, хотя мне приходилось задаваться вопросом, было ли это для меня, или что она рекламировала своей матери, что это было для меня. Я прошел мимо нее в ванну и сделал свое дело. Когда я вернулся, тетя Трейси переоделась в коротенькую пижаму. Хотя это было не так показательно, как у Мэри www.xvideo.com, я видел, как мягко шевелится ее большая грудь, когда она протискивалась мимо меня, чтобы почистить зубы. Мэри уже была в постели по ту сторону. Я положил одежду обратно на сумку и снова повернулся к кровати. Я потянулся и выключил свет на столе, прежде чем поднял простыню и скользнул на ближнюю сторону, только чтобы Мэри подошла ко мне, как только я это сделал. Обернувшись к ней, она протянула free porn movie руки и обняла меня. «Боже, я так возбуждена», — прошептала она, ее рука упала на мои шорты, ее рука проникла внутрь. «Я тоже», — прошептала я, мой член быстро расширился от ее ласки, даже когда моя собственная рука опустилась на ее грудь. Сжимая ее грудь, я поднял пальцы на ремешок для спагетти и сдвинул его вниз, поймав верх и обнажив верхнюю часть ее груди. Наклонившись, я засосал ее сосок себе в рот porn xvideos hd, вызвав у нее воркование удовольствия в ответ. Шум смываемого унитаза и раковины, когда она чистила зубы в ванной, предупредил меня о скором возвращении тети Трейси. Отодвинувшись, я накинул простыню на ее обнаженную грудь и сам откинулся на спинку стула. Тетя Трейси, казалось, полностью игнорировала нас. «В какое время вы хотите идти утром?» спросила она. «До Universal Studios всего несколько минут, и free porn brazzers hd они не открываются до 9. Я думаю, если мы встанем в 7 и пойдем завтракать, мы сможем быть там примерно в то время, когда они откроются? Как вы думаете?» Мэри перекатилась ко мне, ее грудь все еще была обнажена под простыней, и что ее рука снова сжимала мой член под простыней, очевидно, тете Трейси вообще не было известно. Я протянул руку через свое тело и наполнил руку красотой Мэри, когда она porno brazzers tube hd ответила: «Звучит хорошо, мама». «Хорошо, ребята, постарайтесь немного поспать», — хихикнула она, взбивая подушку и затем откинувшись на спинку кресла, — «не мешайте мне спать всю ночь». «Хорошо, мама», — ответила Мэри, подчеркнув «Мать», а затем села, потянулась, схватилась за нижний край майки и сняла ее. Достигнув дальнего края кровати, она бросила ее на пол, а затем потянулась вниз www.brazers.com, приподняла бедра и сняла шорты для мальчиков. Мгновенно моя кузина обнажилась рядом со мной, и ее руки потянулись к моим шортам, еще до того, как погас свет. Я не ожидал, что мы просто разденемся и пойдем на это, но после того, как тетя Трейси выключила свет, это почти именно то, что произошло. Я не сопротивлялся, стягивая мои шорты, и хотя изначально я думал о тетушке Трейси, которая была прямо porno xhamster.com там, всего в нескольких шагах от меня, в считанные секунды природа взяла верх, и я полностью забыл обо всем, кроме сексуальной шалуньи на руках Который не мог дождаться, когда мой член войдет в нее. В том, что Мэри снова была агрессивной (по крайней мере, для начала), сомневаться не приходилось. Ее рот сомкнулся на моем, наши языки боролись за позицию. Горячее сексуальное тело, пытавшееся заставить меня hd pornhub.com приставать к ней, вскоре оказалось в центре моего внимания, мысли о молчаливой тете Трейси в другом конце комнаты были полностью забыты. Мои руки гладили тело Мэри, а руки Мэри ласкали мои. Поцелуи и ласки превратились в ее катание на мне, превратились в ее ловлю моего члена и, наконец, мою руку, которая потянулась вниз и удерживала меня на месте. Мэри поскользнулась, выровнялась и опустилась hd xnxx.com на меня, постепенно садясь, простыня отпадала. Вскоре Мэри ехала верхом на моей пастушке, полностью обнаженная в темноте комнаты. Я на мгновение подумал, наблюдает ли ее мать, а затем снова полностью забыл о ней, когда наши плотские побуждения взяли верх. Положение было, по-видимому, идеальным для Мэри, это не заняло много времени, и я почувствовал надвигающийся оргазм от нее porno chaturbate.com, хотя это не доставило мне удовольствия так быстро. Я набил ладонями ее груди, а затем наклонился, чтобы пососать сначала один сосок, а затем другой в свой рот. Напряжение на моей спине было слишком сильным, чтобы оставаться в таком состоянии надолго, и, опираясь на одну руку, я потянулся назад и взял подушку Мэри, сдвинув ее за собой вдвое. Теперь, получив поддержку, я снова наклонился к груди Мэри, посасывая порно в хорошем качестве один сосок за другим и одновременно играя другой рукой. Тело Мэри напряглось, когда она довела меня до оргазма, наконец с возгласом «О, черт!» все ее тело содрогнулось. Задыхаясь, она наклонилась ко мне, подушки мешали нам лечь на землю. Я снова потянулся назад и переместил подушку, чтобы я мог лечь обратно, и она последовала за мной вниз, лежа на мне сверху с моим членом все еще внутри нее. «Я порнохаб хотела этого весь день», — прошептала она мне на ухо, покусывая его. «Ты кончил?» «Нет.» «О, хорошо.» Обхватив меня рукой, она перекатилась на свою сторону кровати, притянула меня к себе и раздвинула ноги шире, обхватив мои нижние ноги. «Твоя очередь», — прошептала она. Теперь, лежа в ее миссионерском стиле, я сначала приподнялся на локтях, а затем на руках, медленно вытаскивая свой член из ее шелкового hd seks video online тепла. Достигнув конца, я медленно вернул свой меч в ножны, а затем повторил, постепенно набирая скорость. Каждый толчок был немного быстрее, усиливая как мое, так и ее удовольствие, поскольку я снова чувствовал ее приближающийся оргазм. Вытянувшись слишком далеко, мой член плюхнулся вдоль ее щели, ее рука мгновенно потянулась, чтобы направить мою скользкую змею обратно внутрь нее. В этом положении мои порно изнасилование толчки быстро доводили меня до конца. Когда я кончил с ворчанием, проникая в нее и пытаясь остаться там, ее рука проскользнула между нами, ее пальцы нашли ее клитор, и через несколько секунд она вырвалась из себя во второй раз. Пытаясь вырваться, это ощущение заставило меня снова толкнуть меня, и только после четвертого непроизвольного толчка обратно в нее я, наконец, смог вытащить. Я скатился с Мэри, тяжело голые дыша, на свою сторону кровати, Мэри последовала за мной, чтобы прижаться ко мне. Наши пульс и дыхание постепенно пришли в норму, и примерно через 10 минут Мэри отстранилась и встала, идя в ванну. Я снова подумал о тете Трейси, которая посмотрела на кровать и увидела ее на боку спиной к нам. Мэри вернулась, снова скользнула ко мне в постель и полностью натянула на нас простыню. Я почти спал !!! рот и сиськи руки снова начали ласкать меня. Ее поцелуи на моей шее переместились на мою грудь и соски, ее рука нашла и сжала мой член, который только медленно ответил. Но она ответила, мой член встал, особенно когда ее рот нашел его. Отодвинув простыню, когда она двигалась вниз по моему телу, мы снова были обнажены, но теперь полностью лежали на простыне. Все мысли о том, что мы должны хотя минет бы попытаться скрыть то, что мы делаем, от тети Трейси, были изгнаны из моих мыслей. Мэри не волновало, что мы обнажены и трахаемся перед ее матерью — во всяком случае, казалось очевидным, что она хотела, чтобы она увидела. «Я собирался проигнорировать вас двоих, но я забыл, как жарко, когда кто-то занимается сексом в одной комнате». Голос тети Трейси раздался из противоположного конца комнаты. «Не пизда мог дождаться, пока я засну, а?» Что прошло не менее 45 минут, и мы трахались дважды, Мэри встала и пошла в ванну, чтобы очистить свою киску, вернулась и сразу же начала меня снова любить, а тетя Трейси не заснула , подтвердила, что она обращала внимание, смотрела она прямо в нашу сторону или нет. Я перекатился в сторону Мэри, спиной к тете Трейси, а теперь я перевернулся на свою спину и посмотрел на нее. Теперь она была на порно ролики своей стороне и смотрела на нас, смотрела ли она на нас во второй раз, я не знал. Она хихикнула и сказала: «Кстати, симпатичная задница». «У него есть симпатичная задница, не так ли?» — сказала Мэри, перекатываясь ко мне и прижимаясь ко мне, проводя рукой по моей заднице. Я поднял руку, и она прижалась ко мне. Я чувствовал себя немного неловко, лежа полностью обнаженной на кровати с тетей Трейси, смотрящей порно инцест на нас, даже если это было почти в полной темноте. Даже тогда я понял, что мои глаза привыкли к темноте, что она не казалась такой затемненной, как когда мы впервые забрались в кровать. «У него есть и другие милые вещи, не так ли?» Она хихикнула, протянув руку и схватив мой член. Придя уже дважды, я не был готов к тому, чтобы она снова начала играть, и под наблюдением тети порно фильмы Трейси я был больше, чем просто немного застенчив. Подняв ноги, я просунул их под конец простыни, и когда Мэри сделала то же самое, я протянул руку и частично натянул ее на нас, покрывая нас, по крайней мере, ниже пояса. Повернув голову, я встретил лицо Мэри, и мы поцеловались, на этот раз поцелуем на ночь. Когда я п роснулась, было утро, солнечный свет за занавесками сильно расширил видимость в комнате. Я русское порно видео выскользнул из постели голый, так как не знал, что Мэри сделала с моими шортами, и зашагал в ванну, чтобы пописать. Мне пришлось включить свет, чтобы увидеть, что я там делаю, и, конечно же, это немедленно разрушило мое ночное зрение. Вернувшись в спальню, как только я выключил свет в ванной, я практически ослеп, даже не замечая, что тетя Трейси теперь сидела на краю кровати, а я обнаженный перед ней. «Моя порно бесплатно очередь», — тихо сказала она, заставив меня подпрыгнуть, ее рука скользнула мне по бедру, когда мы толкались друг с другом. Ее рука скользнула по моему бедру, слегка похлопав меня по обнаженной заднице. «Не устраивайся слишком удобно, нам пора вставать». Я проскользнул обратно в кровать с Мэри, которая, как мне казалось, все еще спала, лицом ко мне. Проведя мою руку вверх и порно онлайн вдоль ее руки, она потянулась и перекатилась на спину, ее глаза открылись и посмотрели на меня. Вытянув руки над головой, ее груди приподнялись, и моя рука скользнула по ее груди, когда ее плечо отодвинулось от меня. «Ммм, — проворковала она, когда моя рука ласкала ее живот и грудь, — я могла бы привыкнуть к этому. Приятно просыпаться с любовником в постели с тобой». Хотя я только что ласкал ее тело, явно не пытаясь ее возбудить, я чувствовал, как ее смотреть порно соски затвердевают от моих прикосновений. Я положил руку ей на грудь, и в этот момент дверь в ванную открылась, свет все еще горел, заливал комнату и падал на нас. Я переместил руку с ее груди на ее живот, так что ее сосок теперь стоял прямо и отчетливо виден на свету. «Ах, черт возьми, вы двое», — сказала Трейси, войдя в комнату. «Я забыла, насколько вы, дети, похожи анал на кроликов», — сказала она, подходя к комоду и выдвигая ящик. Я видел, как она достала бюстгальтер и блузку, открыла второй ящик, вытащила шорты и повернулась обратно. «Я собираюсь принять душ; вы, дети, занимайтесь любовью, пока я там, так что вы не сводите меня с ума». «Ты знаешь, что тебе это нравится, мама!» Мэри хихикнула, когда дверь в ванную закрылась, и она обернулась ко мне. Тетя Трейси провела в ванной инцест дольше, чем нужно. ~ «Как вы, дети, спали?» Тетя Трейси спросила за завтраком: «По крайней мере, когда ты наконец приедешь», — хихикнула она. Я огляделась, стол, за которым нас посадили, был немного отделен от других, давая нам некоторую уединенность, по крайней мере, на данный момент. «Мы хорошо провели время», — ответила Мэри. Не знаю, покраснел ли я внешне, но я чувствовал жар на лице. Несмотря на ххх то, что мама застала меня и Андреа, пока мы !! были оба обнажены, и мой член был вонзился в нее по самую рукоять и не взорвался; несмотря на это, я слышал, что мама и тетя Трейси были любовниками, и у них была история, ну, ну, у них были общие любовники; несмотря на то, что Мэри и тетя Трейси вместе признались, что Мэри поделилась тем, что мы любовники; и несмотря на то, что Мэри и я откровенно потрахались накануне порно вечером, когда ее мать была в соседней постели, все еще было немного неприятно говорить с тетей о сексе с ее дочерью. «Думаю, я как бы забыл, как жарко быть рядом, наблюдая, как другие занимаются любовью». Я уловил ее формулировку. «Ты смотрел?» — спросил я, не видя ничего, кроме нее прошлой ночью. Я смотрел, но было рано, когда мои глаза еще не привыкли к темноте, а porno xxx video потом я просто не обращал внимания. «Не в первый раз, но я был во второй». «Вы когда-нибудь делали это с кем-нибудь, кроме тети Мэри?» — спросила Мэри, имея в виду мою мать. «Нет, когда мы росли, мы делили мальчиков», — ответила она. «Твоя мать, в частности, очень любила, чтобы за ней наблюдали. Но все изменилось, когда она пошла в колледж. Она познакомилась с твоим отцом, я познакомился с твоим отцом, и ему это русское порно просто не нравилось». «Откуда вы знаете?» — спросила Мэри. «Думаю, я никогда не делила с тобой эту часть своей жизни, не так ли?» Она сказала, как раз когда официантка прибыла с нашими заказами. Она пожала плечами, когда мы начали есть. «Мы говорили об этом, о нашей истории, после того, как поженились. Я рассказала ему о Мэри и обо мне, о наших свиданиях на сеновале с нашими парнями. Ему просто было неинтересно; он дойки предпочел бы иметь роман с Рэйчел. Макгэвин «. «КАКИЕ?» Мэри выплюнула: «Рэйчел МакГэвин?» «О, конечно, вы уже знаете, не так ли?» — сказала тетя Трейси, немного удивившись. «Кто такая Рэйчел МакГэвин?» — тихо спросил я. «Прошлым летом, в тот первый день, когда вы туда приехали? Женщина, которая привела жеребца, чтобы спарить его с моей кобылой? Это Рэйчел МакГэвин. У него роман с порно 365 Рэйчел МакГэвин?» Я только смутно помнил ее, самое яркое воспоминание, когда видел Мэри, Андреа и ее сзади, вспоминая, как ее задница заполняла ее джинсы. «Да, уже несколько лет. Вы действительно не думали, что он остался, чтобы посмотреть, как растет кукуруза, не так ли?» — сказала Трейси. «Не спешите судить, это с моего разрешения». «У папы роман?» — громко произнесла Мэри с недоверием порно видео в голосе. «Но …» Она остановилась, явно желая узнать больше. Тетя Трейси пожала плечами. «Это просто произошло, и это ничем не отличается от всего, что я когда-либо делала, особенно с твоей матерью, — сказала она, взглянув на меня, — и это работает для нас. Каждый год он получает пропуск в холл на две недели с ее, а остальное время он мой «. «Но … ты знаешь об этом?» «Конечно. Они встречаются уже почти десять hd porno video online лет. Я уже давно знал, что у них были кокетливые отношения. Я просто спросил твоего отца, собирается ли он изменять, и он сказал мне, что нет, но признал, что у него очень сильное влечение к ней. Я просто сравнил это со мной и тетей Мэри, где мы все время делились парнями. Я подошел, поговорил с Рэйчел и сказал ей, что знаю ее и Роя. были на грани интрижки, и это вместо того, чтобы бороться с ней, и, вероятно watch porno anal hd, заставить их пойти за моей спиной, и, вероятно, вступить в ссору и развестись … «Она замолчала, оглядываясь назад и вперед на нас. «Это не для всех, но у них есть две недели, где они собираются вместе каждый год, без вопросов». «Они вместе, дома?» — спросила Мэри, все еще явно потрясенная этим откровением. «О, черт возьми, нет. Я думаю, в этом году они собирались во Флориду; он все мне расскажет, когда мы free porno film hd вернемся». «И я думал, что он всегда оставался из-за фермы». «Когда вы в последний раз видели, что ему нужно выполнить какую-либо работу летом? Раньше, когда мы выращивали люцерну для животных, это была постоянная стрижка, вырубка и штабелирование. Примерно в то время, когда вы закончили последний штабелирование, пришло время снова косить. Но теперь, когда мы просто выращиваем фуражную hd seks.film кукурузу, по сути, от посадки весной до сбора урожая осенью, все, что нужно сделать, это пойти в кафе Адрианы, выпить кофе, позавтракать и пережевать секс видео толстые с мальчиками. Мы всегда берем пару недель перед Рождеством и ходим куда-нибудь вместе, но не летом «. «Вы не ревнуете?» «Ну, сначала я подумал, что могу быть, но с другой стороны, мы как бы немного попали в колею вместе. Это на самом деле hd porno video вернуло искру в наши отношения. И это довольно забавно слышать о что они делали вместе. Примерно как когда мы с твоей мамой, «она снова взглянула на меня, подтверждая, о ком она говорила,» играли вместе. Как я уже сказал, она действительно сошла с ума от того, что за ней наблюдали, и мальчик, которым мы были с действительно любил иметь двоих из нас, чтобы играть ». ~ Universal Studios была такой, как порнуха и ожидалось: многолюдно, жарко и весело. Находясь там, когда они впервые открылись, мы смогли убрать основные достопримечательности с дороги как можно раньше.

пользовательского контента как развлечения или «бесплатный труд»? Случаи S.T.A.L.K.E.R. и Metro 2033 на JSTOR

Распространение новых медиа и появление Web 2.0 привели к резким изменениям в ролях потребителей, превратив их в «просьюмеров»: соучастников культурного производства. В этом эссе новая ситуация рассматривается через анализ трансмедийных явлений, порождаемых одновременно деятельностью компаний и потребителей. Анализ двух российских трансмедиальных проектов: С.T.A.L.K.E.R. и «Метро 2033» раскрывает парадокс этого феномена, свидетельствуя о массовом расширении и расцвете творческих практик (в значительной степени укоренившихся в советских культурных традициях) и об их тотальной коммодификации одновременно.

Решение редакции об изменении названия давно установившейся советской Исследования, впервые опубликованные в 1949 г., последовали за распадом Советского Союза. Союз в конце 1991 года. Он отражал убеждение, что в результате страны бывшего Советского Союза и Восточной Европы постепенно станет более тесным связаны как с Европой, так и с Азией, продолжая при этом представлять отличительные темы для исследования в результате их конкретного опыта.Советские исследования были главным академическим журналом в мире. посвящены политическим, экономическим и социальным вопросам того, что когда-то было Страны советского блока, в том числе их история в советский период. Европейско-азиатские исследования продолжают сосредотачиваться на этом корпусе исследований. темы. В то же время новое название призвано отразить то, как трансформация политической и экономической систем этих стран влияет на их отношения с остальной Европой и растущие связи между тем, что была Советская Средняя Азия и другие страны как в Европе, так и в Азии.

Основываясь на двухвековом опыте, Taylor & Francis быстро выросла за последние два десятилетия и стала ведущим международным академическим издателем. Группа издает более 800 журналов и более 1800 новых книг каждый год, охватывая широкий спектр предметных областей и включая журнал. отпечатки Routledge, Carfax, Spon Press, Psychology Press, Martin Dunitz и Taylor & Francis. Taylor & Francis полностью привержены публикации и распространению научной информации высочайшего качества, и сегодня это остается основной целью.

Приморская общинная церковь: Энсинитас, Калифорния> Персонал

Европа PMC

Аннотация

EndoG — это повсеместная нуклеаза, которая транслоцируется в ядро ​​во время апоптоза для участия в деградации ДНК. Фермент расщепляет двух- и одноцепочечные ДНК и РНК. Родственные нуклеазы обнаружены у эукариот и прокариот, у которых развились сложные механизмы защиты генома от активности самоантагонизирующей нуклеазы.Обычными механизмами ингибирования являются секреция, секвестрация в отдельный клеточный компартмент или связывание с ингибиторами белка. Хотя EndoG подавляется компартментализацией в митохондриальное межмембранное пространство, локализованный в ядре белковый ингибитор защищает клеточные полинуклеотиды от деградации бродячим EndoG в неапоптотических условиях у Drosophila . Здесь мы сообщаем о первой трехмерной структуре EndoG в комплексе с его ингибитором EndoGI. Хотя механизм ингибирования напоминает ингибиторы бактериальных белков, EndoGI развился независимо от общего модуля белок-белкового взаимодействия.EndoGI — это двухдоменный белок, который связывает активные сайты двух мономеров EndoG, причем EndoG находится между EndoGI. Поскольку аминокислотные последовательности эукариотических гомологов EndoG высококонсервативны, эта модель действительна для димерного EndoG эукариот в целом. Структура указывает на то, что два активных центра EndoG занимают наиболее удаленное возможное пространственное положение на молекулярной поверхности, и согласованная обработка субстрата маловероятна.

ВВЕДЕНИЕ

Эндонуклеаза G (EndoG) — это кодируемая ядром, неспецифическая по сахару нуклеаза, высококонсервативная среди эукариот (1–3).Бактериальные гомологи EndoG также были описаны, например, в Anabaena и Serratia marcescens (4,5). Бактериальные гомологи EndoG секретируются из клетки и, вероятно, выполняют функцию питания, предоставляя предшественники для биосинтеза нуклеиновых кислот, или действуют как бактерициды для подавления роста конкурирующих организмов. Родственные ферменты также служат факторами вирулентности при легочной инфекции (6,7). У эукариот EndoG выполняет другую функцию. Первоначально предполагалось, что этот фермент участвует в репликации митохондриальной ДНК (8) и может участвовать в инициации геномных инверсий у вируса Herpes Simplex типа 1 (9).EndoG нацелен на митохондриальное межмембранное пространство, и теперь считается, что он высвобождается из митохондрий при индукции апоптоза вместе с цитохромом c и другими проапоптотическими белками (1,3,10–12). После высвобождения EndoG перемещается в ядро ​​и помогает разрушать хромосомную ДНК (3,12). Роль EndoG в апоптозе по-прежнему неоднозначна, поскольку нокаут EndoG у мышей не выявил нарушения апоптотической деградации ДНК (13,14). Однако отсутствие апоптотической деградации ДНК также можно объяснить избыточностью дополнительных нуклеаз (15).Основным ферментом, ответственным за апоптотическую деградацию ДНК, является ДНКаза, активируемая каспазой (CAD), которая регулируется посредством ассоциации с ее ингибитором ICAD. ICAD выполняет двойную функцию: он играет роль компаньона, поскольку ни один функциональный CAD не создается без ICAD. Более того, ICAD действует как ингибитор CAD; он расщепляется каспазами при индукции апоптоза и тем самым высвобождает активированный CAD.

Бактерии развили сложные механизмы защиты от самоантагонизирующей активности EndoG-подобных нуклеаз.Активность нуклеазы Serratia зависит от образования цистиновых связей, которое происходит только во время секреции (16). Anabaena обладает белковым ингибитором (NuiA), который образует мостик для ионов металла с нуклеазой NucA (17). Точно так же были описаны цитоплазматические белковые ингибиторы других секретируемых нуклеаз, таких как панкреатическая РНКаза (18), барназа (19) или колицин E3 (20), что позволяет предположить, что бактерии, а также эукариоты имеют резервные системы для защиты клеточных нуклеиновых кислот от сбоев сортировки.

Ингибитор EndoG (EndoGI) кодируется в геномах различных видов Drosophila (21). Большая часть EndoGI находится в ядре, отделенном от митохондриального EndoG, и было предложено действовать как страхование жизни клетки от случайного EndoG, образующегося в результате отказа митохондриального импорта или утечки из органеллы. EndoGI связывается с EndoG с субпикомолярной аффинностью, и связывание зависит от архитектуры активного сайта нуклеазы. EndoGI состоит из двух очень похожих доменов, связанных в одну полипептидную цепь.Каждый домен способен самостоятельно ингибировать EndoG, и, соответственно, аналитическое ультрацентрифугирование показало, что одна молекула EndoGI связывает две молекулы EndoG (21). EndoG от Drosophila , а также другие варианты EndoG от разных эукариот существуют в виде гомодимеров (2,21,22), и каждый домен ингибитора EndoGI, скорее всего, связывается с активным сайтом одного мономера EndoG (21).

Активный сайт EndoG демонстрирует топологию пальца ββα-металла, неся консервативные остатки, участвующие в связывании ионов металла и нуклеазной активности (2,23).На основании сходства последовательностей с родственными бактериальными нуклеазами были предложены модели гомологии для EndoG. Однако были получены противоречивые результаты относительно архитектуры активного сайта, что потребовало структурных исследований EndoG.

Таким образом, мы кристаллизовали EndoG из Drosophila melanogaster в присутствии ингибитора EndoGI. Впервые мы сообщаем о трехмерной структуре эукариотического EndoG. Мы демонстрируем, что EndoGI ингибирует EndoG, блокируя активный сайт и бороздку связывания олигонуклеотидов.EndoGI структурно не связан с ранее описанными ингибиторами нуклеаз и, скорее всего, развился независимо от какого-либо древнего бактериального ингибитора.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспрессия и очистка белка

EndoGI полной длины (dEndoGI) и EndoG с укороченным N-концом (без последовательности митохондриальной локализации и короткого неструктурированного участка полипептида; далее обозначается как dEndoG), оба из D. melanogaster , коэкспрессировались из конструкции бицистронной экспрессии (21). Клетки Escherichia coli C43 (DE3) (Lucigen), трансформированные бицистронной экспрессирующей конструкцией, выращивали при 310 K в LB-среде, содержащей 100 мг / л ампициллина, до OD ₆₀₀ 0,6, охлаждали до 291 K и экспрессировали белки. индуцировали 0,5 мМ IPTG в течение 16 часов. Собранные клетки ресуспендировали в буфере А (50 мМ Трис-HCl pH 8,0, 250 мМ NaCl, 2 мМ MgSO ₄ и 10 мМ 2-меркаптоэтанол). Стенки клеток разрушали обработкой ультразвуком, и очищенный супернатант наносили на колонку HisTrap HP объемом 1 мл (GE Healthcare), уравновешенную буфером А.Белки элюировали в виде комплекса в градиенте буфера А, содержащего дополнительно 250 мМ имидазола. Комплекс dEndoG / dEndoGI дополнительно очищали эксклюзионной хроматографией на колонке Superdex ™ 75 (GE Healthcare), уравновешенной 50 мМ Hepes – NaOH pH 7,5, 200 мМ NaCl, 2 мМ MgSO ₄ и 2 мМ дитиоэритритолом. Для кристаллизации белковый комплекс концентрировали до 17 мг / мл, как определено с помощью анализа белка BioRad.

Для анализа нуклеазной активности комплекс dEndoG / dEndoGI инкубировали с 10 мМ EDTA и связывали с колонкой MonoQ (GE Healthcare), уравновешенной буфером B (50 мМ Tris – HCl pH 8.0 и 2 мМ дитиоэритритола) с дополнительными 10 мМ ЭДТА. В то время как dEndoGI связывался с колонкой, dEndoG был обнаружен в проходном потоке, который был загружен в 1 мл HiTrap Heparin (GE Healthcare), уравновешенный впоследствии буфером B. Чистый dEndoG элюировали в градиенте буфера В, содержащего дополнительно 1 М NaCl.

Анализ нуклеазной активности

В экспериментах с ограниченным перевариванием 7,5 фмоль dEndoG инкубировали с 80 нг плазмидной ДНК в 30 мкл реакционного буфера (10 мМ натрий-фосфатный буфер, pH 6.0,2 мМ MgSO ₄ и 2 мМ дитиоэритритола). Аликвоты отбирали через разные интервалы времени, и реакцию останавливали добавлением 10 мМ ЭДТА. Чтобы определить pH-зависимость активности dEndoG в реакционном буфере при различных pH, реакцию останавливали через 1 мин инкубации. Образцы разделяли электрофоретически на 0,5% (мас. / Об.) Агарозном геле и окрашивали нуклеиновой кислотой SYBR Gold (Invitrogen).

Кристаллизация, сбор кристаллов и сбор данных

Кристаллы росли при 277 К в установке для диффузии пара с применением резервуарного раствора, содержащего 20% (мас. / Об.) PEG 2000 MME.Кристаллы собирали в раствор криозащитного средства, содержащий 100 мМ Трис-HCl pH 8,5 и 32% (об. / Об.) PEG 400, а затем быстро охлаждали в жидком азоте. Дифракционные данные были собраны на канале X10SA в Swiss Light Source (Швейцария) при 100 К и обработаны с помощью XDS (24).

Фазирование и уточнение структуры

Начальные фазы были определены путем молекулярного замещения (25) с использованием структуры NucA (26). Построение модели выполнялось в циклах ручного построения с COOT (27) и автоматического уточнения с использованием протокола моделирования отжига из CNS (28) и REFMAC (29).На заключительных этапах доработки фазы были улучшены с помощью REFMAC с использованием уточнения TLS. Качество модели оценивали с помощью PROCHECK (30) и MolProbity (31). Доступные для растворителя площади поверхности рассчитывались с помощью AREAIMOL (29). Рисунки были приготовлены с помощью PYMOL (32), а электростатические поверхностные потенциалы были рассчитаны с помощью APBS (33). Выравнивание последовательностей было выполнено с помощью CLUSTALW (34) и проиллюстрировано с помощью ALSCRIPT (35).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Общая структура комплекса EndoG / EndoGI

Модель комплекса dEndoG / dEndoGI была уточнена по данным дифракции до 2.Разрешение 2 Å (данные и статистика уточнения приведены в). Хотя некоторые части модели отсутствовали (см. Дополнительную таблицу S1), модель могла быть уточнена до свободного R-фактора 22,3%. В целом модель имеет превосходную стереохимию с 91,5% остатков, лежащих в наиболее предпочтительных областях графика Рамачандрана, и 8% остатков в дополнительных разрешенных областях.

Таблица 1.

Статистика сбора и уточнения данных

В соответствии с предыдущими исследованиями (21) две молекулы dEndoG связаны одной молекулой dEndoGI в кристаллической структуре (). Две молекулы dEndoG образуют компактный димер и зажаты между двумя доменами dEndoGI (далее обозначаемые как Dom1 и Dom2). Однако линкер, соединяющий два домена ингибитора, не может быть смоделирован с учетом остаточной неоднозначной электронной плотности.Таким образом, физическое соединение двух доменов остается неуловимым (дополнительная таблица S1). Концы двух доменов, которые необходимо соединить, разделены расстоянием 65 Å, расстояние, которое легко может быть преодолено отсутствующими 44 остатками. Следовательно, одна молекула dEndoGI может ингибировать оба нуклеазных домена без стерического вмешательства в гомодимерное расположение dEndoG. Наконец, эксперименты MALDI-TOF, проведенные на растворенных кристаллах белка, показали, что полипептидная цепь EndoGI не повреждена.Следовательно, можно исключить протеолитическое расщепление dEndoGI на два отдельных домена.

Общая структура комплекса dEndoG / dEndoGI. Спирали dEndoG показаны фиолетовыми лентами, а нити центрального β-листа — голубым. Небольшой двухцепочечный β-лист (β-цепи D и E), участвующий в связывании ионов металла, выделен желтым цветом, а связанный ион металла показан оранжевой сферой. Два крыла, образующие межмолекулярный β-лист, показаны красным (β-тяжи G и H). Dom1 и Dom2 Endo GI, которые окружают димер dEndoG, показаны коричневыми лентами.Отсутствующий линкер между двумя доменами должен начинаться с Arg174 в Dom1 и связывать полипептидную цепь с Leu219 в Dom2.

Архитектура гомодимерного EndoG

Поиск Dali (36) показал, что смешанная αβ-складка dEndoG очень похожа на NucA из нуклеазы Anabaena (26) и Serratia (37). Подобно родственным бактериальным эндонуклеазам, dEndoG содержит центральный скрученный антипараллельный β-лист, состоящий из шести β-цепей, фланкированных спиралями, и второй короткий β-лист, образованный цепями βD и βE.В отличие от бактериальных нуклеаз, цепи βG и βH dEndoG образуют третий небольшой двухцепочечный антипараллельный β-лист (крыло), который выступает из глобулярного домена (и A). Интересно, что крылья обоих мономеров димеризуются и образуют межмолекулярный β-лист. Дополнительные остатки в соседних участках петли вносят вклад в образование димера (A и дополнительная таблица S2), и общая скрытая площадь поверхности, участвующая в образовании димера, составляет 1600 Å ² , 7,5% от общей доступной для растворителя поверхности.Доменная граница в основном гидрофильна, и две полости, заполненные молекулами воды, скрыты внутри доменной границы. Суперпозиция двух молекул dEndoG не выявила значительных различий, и было вычислено среднеквадратичное отклонение (r.m.s.d.) 0,39 Å для всех атомов основной цепи, когда были исключены первые шесть аминоконцевых остатков.

Консервация последовательности EndoG. ( A ) Выравнивание последовательностей гомологов EndoG для D. melanogaster (NP_610737), Homo sapiens (NP_004426), Caenorhabditis elegans cps – 6 (NP_4

) и S.cerevisiae Nuc1p (NP_012327). Идентичные остатки окрашены в темно-зеленый цвет и по мере уменьшения сходства от светло-зеленого через оранжевый к желтому. Элементы вторичной конструкции окрашены в соответствии с. Спирали изображены как цилиндры, а пряди — как стрелки. Остатки, которые участвуют в образовании интерфейса гомодимера dEndoG, помечены серыми кружками, а остатки, непосредственно участвующие в катализе, отмечены черными треугольниками. ( B ) Консервативные пятна на молекулярной поверхности dEndoG.Слева: изображение поверхности одного мономера dEndoG окрашено в соответствии с выравниванием аминокислотной последовательности в (A), а вторая молекула изображена в виде ленточной модели аналогично. Справа: гомодимер dEndoG повернут на 180 °, показывая консервативный участок вокруг активного сайта dEndoG. ( C ) Активный сайт dEndoG. Остатки, участвующие в координации и / или каталитической функции иона металла, показаны как модели стержней, центральный ион Mg ²⁺ — оранжевой сферой, а молекулы воды из гидратной оболочки иона металла и молекулы воды растворителя показаны красными сферами.Карта электронной плотности с контуром 3,0 σ для пропущенных иона металла и молекул воды показана в виде зеленой сетки.

Остатки, образующие интерфейс димера dEndoG, сохраняются от дрожжей до человека (A и B). Таким образом, димер, наблюдаемый для dEndoG, является действительной моделью для эукариотического EndoG в целом. Это согласуется с предыдущими сообщениями, показывающими, что EndoG из разных организмов существует в виде гомодимеров in vitro (2,21,22). На основании гомологии последовательности нуклеазы Serratia был предложен другой способ образования димера (2).Однако β-крыло, образующее межмолекулярный β-лист, не присутствует в родственных бактериальных эндонуклеазах, и, таким образом, образование димера бактериальной нуклеазы Serratia отличается. Крыло, вероятно, было вставлено позже в процессе эволюции; он консервативен во всех эукариотических вариантах EndoG (A).

Активный сайт EndoG высококонсервативен

Дополнительный консервативный участок расположен на поверхности dEndoG, напротив границы раздела димера, где связан гидратированный ион магния (B и C).Мутационные исследования показали, что высококонсервативный мотив DRGH, расположенный в этом консервативном участке (охватывающий от Asp152 до His155 в dEndoG), участвует как в связывании ионов металла, так и в связывании олигонуклеотидов и, таким образом, является ключевым мотивом для катализа (2,23). Остаток гистидина был предложен для активации водного разрыва фосфодиэфирной связи. Действительно, в кристаллической структуре Nε His155 образует водородную связь с молекулой воды 2, принадлежащей первой гидратной оболочке иона магния (C). Четыре дополнительных молекулы воды участвуют в координации каталитического иона металла: молекула воды 3 образует водородную связь с карбонильной функцией боковой цепи Gln181, и обе молекулы воды 4 и 5 удерживаются на месте карбоксилатной группой Glu195.Только молекула воды 6 не контактирует с белковым фрагментом и подвергается воздействию растворителя. Одинарная связь между белком и ионом металла образована карбонильной функцией боковой цепи Asn187 (C).

В дополнение к остаткам, участвующим в связывании ионов металлов и активации молекулы воды, было предложено, что Arg57 нуклеазы Serratia необходим для катализа путем нейтрализации дополнительного отрицательного заряда на фосфатной группе в переходном состоянии (38). Однако остаток цистеина находится в эквивалентном положении в последовательностях dEndoG и его гомологов у млекопитающих.Мутация этого остатка цистеина в бычьем EndoG не привела к инактивации нуклеазы (2), что позволяет предположить, что этот остаток не участвует в переходном состоянии. Область петли, несущая эти остатки, существенно различается в структурах нуклеаз dEndoG и Serratia . Консервативный остаток аргинина (Arg124 в dEndoG) расположен дальше вниз по течению в последовательностях различных гомологов EndoG и помещен в активный сайт dEndoG в том же положении, что и для Arg57, нуклеазы Serratia (C и дополнительный рисунок S1).Мутация этого остатка аргинина в EndoG человека нарушает нуклеазную активность (23), и, таким образом, Arg124, вероятно, участвует в формировании переходного состояния в dEndoG.

Интересно, что активный сайт dEndoG содержит несколько дополнительных молекул воды (C), которые также обнаруживаются в нуклеазе Serratia и NucA в эквивалентных положениях (дополнительный рисунок S1). Возникает соблазн предположить, что эти молекулы воды занимают положения, в которых связывается фосфатный остов субстрата, и что гомологи эукариот и бактерий разделяют не только высококонсервативный каталитический механизм, но также и консервативный способ связывания олигонуклеотидов.

Кроме того, остатки, участвующие в формировании общей архитектуры активного сайта, консервативны в эндонуклеазах эукариот и бактерий. Наиболее заметным является Asp152 в dEndoG, расположенный в мотиве DRGH. Один атом кислорода карбоксилатной группы является акцептором водородной связи от амида боковой цепи Asn187, который связывается с ионом металла (C). Мутация этого остатка аспартата в аланин в бычьем EndoG нарушала нуклеазную активность (2). Гомолог EXOG человека содержит остаток серина в эквивалентном положении в аминокислотной последовательности, и замена аспаратом, по-видимому, не влияет на активность (39). In silico Мутация Asp152 в серин в dEndoG показала, что эта мутация может устанавливать сходный паттерн водородных связей, и, таким образом, конфигурация активного сайта, вероятно, сохраняется.

Противоречивые предложения относительно остатков, которые связывают ионы металлов, были сделаны ранее, и было предложено, что остаток, эквивалентный Glu286 в dEndoG, участвует в координации второго сайта связывания металла в гомологе человека (23). Однако Glu286 образует солевой мостик на границе гомодимера, и никакой дополнительный ион металла не может быть идентифицирован, хотя 2 мМ Mg ²⁺ присутствовал в установке для кристаллизации.Таким образом, Glu286, скорее всего, является структурным остатком и не принимает непосредственного участия в связывании и катализе кофактора ионов металлов.

Сайт связывания олигонуклеотидов EndoG

Консервативные остатки, экспонируемые на поверхности, образуют кластер и выстилают положительно заряженную бороздку вокруг сайта связывания иона металла (B и 3). Суперпозиция dEndoG с связанной с ДНК связанной с ДНК ββα-металлической пальцевой нуклеазой (40) показывает, что остатки, выстилающие эту положительно заряженную бороздку, вероятно, участвуют в связывании олигонуклеотидов.Большинство из них представляют собой остатки аргинина (Arg124, Arg153 мотива DRGH, Arg163 и Arg199) с их гуанидиниевыми группами, выстилающими центральную часть положительно заряженной бороздки. Дополнительные положительно заряженные остатки, более удаленные от активного сайта, удлиняют этот предполагаемый сайт связывания олигонуклеотидов до 30 Å в его самом длинном измерении.

Две олигонуклеотид-связывающие бороздки EndoG находятся на противоположных сторонах гомодимера и не образуют протяженного межмолекулярного сайта связывания олигонуклеотидов ().Это соответствует расположению активного сайта в нуклеазе Serratia , хотя механизм димеризации отличается. Учитывая расстояние и ориентацию двух активных сайтов, они не могут связываться и обрабатывать двухцепочечные олигонуклеотиды одновременно без резкого изгиба двойной цепи. Более вероятно, что два активных центра обрабатывают субстраты независимо друг от друга. Такой независимый механизм дополнительно подтверждается нашим наблюдением, что в кристаллической структуре два мономера идентичны, и совместное действие отдельных активных центров кажется маловероятным.Наконец, ограниченное переваривание суперспиральной (sc) плазмидной ДНК с помощью dEndoG в первую очередь продуцировало открытые закрытые (oc) промежуточные соединения (). Денатурация этих образцов показала, что обе нити накопили большое количество разрезов; Нити ДНК единичной длины не были видны. Это несовместимо с двумя активными центрами, делающими два согласованных, близко расположенных разреза в обеих цепях, так как это привело бы к линеаризации ДНК без промежуточных продуктов oc. Таким образом, кажется, что фермент стохастически разрезается внутри двух цепей, и линеаризация не происходит до тех пор, пока независимые разрезы в комплементарных цепях не будут достаточно близко друг к другу, чтобы спаривание оснований больше не могло поддерживать двухцепочечную структуру.Подобно бычьему EndoG (2), dEndoG имеет оптимальную активность около pH 6,0 (C). Примечательно, что при pH 7,0 или выше количество коротких промежуточных соединений снижается, и накапливаются как oc, так и линеаризованная форма. Таким образом, dEndoG, по-видимому, функционирует иначе, чем родственная бактериальная нуклеаза Serratia , которая не продуцирует oc-форму плазмидной ДНК (41). Поскольку конечные олигонуклеотидные продукты dEndoG накапливаются только при более длительной инкубации, их также получают в результате случайного разрезания, т.е. два активных центра в одном гомодимере не разрезаются одновременно в пределах одной стойки и не действуют как молекулярные линейки.

Анализ нуклеазной активности dEndoG. ( A ) Ограниченное переваривание плазмидной ДНК. ( B ) Тот же образец, что и в (A), после плавления. ( C ) pH-профиль активности нуклеазы dEndoG. Реакцию останавливали через 1 мин инкубации.

Общая структура dEndoGI

Каждый домен dEndoGI состоит из пучков α-спиралей, образующих гидрофобное ядро, которое запечатано N-концевой спиралью крышки и С-концевым удлинением, в котором почти полностью отсутствуют элементы вторичной структуры (и дополнительный рисунок S2).Эти два домена гомологичны друг другу и также являются высококонсервативными среди различных видов Drosophila (дополнительный рисунок S2). Напротив, гибкий линкер, соединяющий два домена, менее хорошо консервативен. Сгиб соленоида каждого домена напоминает складку HEAT-повторов. Dom1 и Dom2 структурно очень похожи: суперпозиция выявила среднеквадратичное значение. всего 1.0 Å для всех атомов основной цепи, не считая участка петли, удаленного от сайта связывания нуклеазы (остатки 78–81 в Dom1 и 264–266 в Dom2).Этот участок петли отличается по длине и геометрии полипептидной цепи.

DALI-поиск Dom1 и Dom2 (36) показал, что наиболее близким по структуре доменом является C-концевой домен АТФ-зависимой геликазы Ku80 (42). На основании своей соленоидной складки предполагается, что этот домен участвует во взаимодействиях белок-белок. Хотя нет очевидных причин подозревать функциональную связь dEndoGI и Ku80, мы отмечаем, что Ku80 также был идентифицирован при поиске аминокислотной последовательности, когда последовательность Dom1 использовалась в качестве запроса.Другими структурно родственными белками являются субъединица VPS35 комплекса распознавания груза (43), дрожжевой импортин β (44).

Ингибитор бактериального гомолога EndoG NucA, NuiA, имеет совершенно иную складку, содержащую центральный β-лист, фланкированный спиралями (17,45). Таким образом, dEndoGI, вероятно, произошел из модуля белок-белкового взаимодействия независимо от NuiA. Хотя ингибитор панкреатической РНКазы структурно не связан с dEndoGI, он также состоит из тандемных повторов. В случае ингибитора РНКазы богатые лейцином повторы образуют подковообразную архитектуру (18).По-видимому, dEndoG и ингибитор панкреатической РНКазы произошли из разных модулей белок-белкового взаимодействия, которые адаптировались, чтобы стать прочно связующими и, в конечном итоге, ингибиторами.

Ингибирование dEndoG с помощью dEndoGI

Один из гребней, образованных участками петли, соединяющими повторы α-спирали dEndoGI, богат кислотными остатками, которые образуют сильно отрицательно заряженный участок на молекулярной поверхности Dom1 и Dom2 (). Эти отрицательно заряженные участки поверхности закрывают предполагаемую олигонуклеотид-связывающую бороздку каждого мономера dEndoG за счет электростатических взаимодействий.Каждый домен покрывает примерно 6% всей поверхности димера dEndoG. Множество солевых мостиков образуется между карбоксилатными группами от гребня dEndoGI до гуанидиниевых групп dEndoG (дополнительная таблица S3). Таким образом, dEndoGI не только образует простой антипол, который связывает положительно заряженные олигонуклеотид-связывающие бороздки; скорее отрицательно заряженные боковые цепи могут имитировать фосфатные группы олигонуклеотидного субстрата. Действительно, суперпозиция dEndoG с нуклеазой Vvn, связанной с ДНК (40), показала, что положение проксимальных карбоксилатных групп активного сайта двух доменов dEndoGI совпадает с фосфатными группами ДНК в структуре Vvn (дополнительный рисунок S3).Это наблюдение не только может служить руководством для стыковки олигонуклеотидного субстрата с EndoG, но также и структура комплекса dEndoG / dEndoGI может служить отправной точкой для дизайна de novo ингибиторов для этого типа нуклеаз, аналогично недавно предложен для комплекса Anabaena NucA / NuiA (17).

Книжное обозрение комплекса EndoG / EndoGI. Для простоты только один мономер dEndoG (слева) и соответствующий Dom1 dEndoGI (справа) показаны как поверхностные представления.Окрашивание соответствует электростатическому потенциалу поверхности в диапазоне ± 9 кТл / э (синий / красный).

Другой общей чертой ингибирующего действия dEndoGI и NuiA является то, что оба ингибитора участвуют в координации ионов металлов. В то время как dEndoGI блокирует доступ к активному центру, связываясь с молекулой воды гидратной оболочки иона металла (), С-концевой остаток NuiA вытесняет молекулу воды из гидратной оболочки иона металла и устанавливает прямой мостик иона металла ( 17).Связывание с двумя активными сайтами, вероятно, является ключевым фактором сродства dEndoGI к dEndoG, поскольку хелатирование кофактора иона металла приводит к разборке в остальном стабильного комплекса dEndoGI / dEndoG (см. Раздел «Материалы и методы»). Дальнейшее подтверждение этому исходит из предыдущих мутационных исследований, показывающих, что мутация иона металла, координирующего Asn187 в dEndoG (), нарушает связывание dEndoGI (21). Наконец, в последнем отчете описывается, что мутация мотива DRGH в DAGA полностью устраняет связывание dEndoG с dEndoGI, подтверждая, что дополнительные солевые мостики образуются между карбоксилатными группами dEndoGI (Asp145 в Dom1 и Asp330 в Dom2) и Arg153 каждого dEndoG (). способствовать близости.Дополнительные солевые мостики образуются между карбоксилатной группой Asp151 в Dom1 и Asp336 в Dom2 с гуанидиниевой группой Arg124 в dEndoG, которая предположительно участвует в формировании переходного состояния.

Ингибирование активного сайта dEndoG с помощью dEndoGI. Интерфейс между Dom1 dEndoGI (коричневый) и активным центром одного мономера dEndoG (фиолетовый) показан на ( A ), а эквивалентный интерфейс между Dom2 и второй молекулой dEndoG в ( B ).Остатки, участвующие в связывании, показаны в виде палочек, и для простоты представлены только солевые мостики важных остатков аргинина (пунктирные черные линии) и водородные связи с молекулами воды (пунктирные черные линии).

При сравнении Dom1 и Dom2 наблюдаются разительные различия в связывании с гидратированным ионом металла (). В Dom1 молекула воды в растворителе зажата между карбоксилатной группой Asp148 и открытой для растворителя молекулой воды из гидратной оболочки иона металла. Эта молекула воды раздвоенным образом связывает вторую, дополнительную молекулу воды растворителя, которая, в свою очередь, образует водородную связь с карбонильной группой Phe147 (A).Напротив, в Dom2 боковая цепь Asp333 образует прямую водородную связь с соответствующей молекулой воды, координирующей ион металла (B). Эти различия могут вносить вклад в наблюдаемые различия в сообщаемом сродстве разделенных доменов к dEndoG, где Dom2 связывается с dEndoG с большей аффинностью, чем Dom1 (21).

Дополнительным различием между dEndoG, связывающим Dom1 и Dom2, является гидрофобное взаимодействие между Leu146 Dom1, соответственно Tyr331 в Dom2 и Phe129 dEndoG.В то время как система ароматических колец в Dom2 (Tyr331) осуществляет гидрофобное стэкинг-взаимодействие с боковой цепью Phe129, боковая цепь Leu129 в Dom1 обнаруживает альтернативные конформации и очевидно является гибкой. Это, по-видимому, является общим отличием EndoGI от разных видов, поскольку Leu129 строго консервативен в Dom1 и в положении, эквивалентном Tyr331, характер ароматической боковой цепи сохраняется в Dom2 (дополнительный рисунок S1). Дополнительные незначительные различия в связывании Dom1 или Dom2 из dEndoGI с dEndoG наблюдались и перечислены в дополнительной таблице S3.

ВЫВОДЫ

Эукариотическая апоптотическая эндонуклеаза G и родственные бактериальные эндонуклеазы имеют общий консервативный активный сайт и олигонуклеотид-связывающую бороздку. Подобно родственной бактериальной нуклеазе Serratia , EndoG является гомодимерным белком, хотя способ димеризации отличается. Ингибитор Drosophila EndoGI состоит из двух высококонсервативных доменов, которые связаны гибким и неконсервативным участком полипептида (дополнительный рисунок S1).Кристаллическая структура показала, что каждый домен блокирует активный сайт одной субъединицы в димере dEndoG и закрывает бороздку для связывания олигонуклеотидов. Однако структурные различия обнаруживаются между двумя доменами, и Dom1 менее прочно связывается с одним мономером dEndoG. Интересно, что этот домен показывает более высокую степень сохранения аминокислотной последовательности по сравнению с Dom2 (дополнительный рисунок S1). Кажется правдоподобным, что Dom1 из EndoGI может выполнять дополнительные функции, которые приводят к наблюдаемой консервации последовательности.Другое возможное объяснение может заключаться в том, что вариация аминокислотной последовательности Dom2 между разными гомологами Drosophila служит видоспецифичной адаптации и представляет собой модуляцию прочного связывания, поскольку Dom2 связывается с dEndoG с более высоким сродством, чем Dom1 (21).

Каждый домен dEndoGI состоит из HEAT-повторов; dEndoGI, по-видимому, возник из модуля белок-белкового взаимодействия, который в конечном итоге превратился в ингибитор. Многие транспортные белки состоят из повторов HEAT, причем некоторые из наиболее близких структурных гомологов доменов dEndoGI участвуют в этих процессах.Примечательно, что импортин β, который, как было показано, участвует в транслокации EndoG в Saccharomyces cerevisiae (3), структурно родственен dEndoGI. До сих пор гомологи EndoGI были идентифицированы только у различных видов Drosophila (21). Еще неизвестно, существуют ли ингибиторы EndoG также у других эукариот. Общие биоинформатические инструменты могут не идентифицировать гомологи EndoGI исключительно на основе выравнивания аминокислотных последовательностей, поскольку белки с повторами HEAT демонстрируют слабую консервативность последовательности, а большинство консервативных остатков приводят к общему гидрофобному ядру (46).Таким образом, представленная структура служит отправной точкой для основанного на структуре поиска гомологов EndoGI в других эукариотических организмах.

Границы | Важность воздействия природы и физической активности для психологического здоровья и восприятия стресса: данные первого периода изоляции во время пандемии коронавируса 2020 года во Франции и Германии

Введение

Глобальное распространение коронавирусной болезни 2019 г. (COVID-19), потенциально ведущей к острому респираторному дистресс-синдрому (ARDS; Li et al., 2020), подтолкнули правительства всего мира к принятию исключительных решений по ограничению воздействия этой пандемии и насыщения мировых систем здравоохранения. Чтобы ограничить распространение инфекции, некоторые европейские страны ввели строгие правила карантина изоляции для своих граждан. В зависимости от государственной политики, уровней инфицирования и насыщенности систем здравоохранения меры, принимаемые странами, различались (World Medical Association, 2020). В период с 17 марта по 11 мая французское правительство ввело полную изоляцию для своих граждан.Это требовало, чтобы население оставалось дома, второстепенные магазины были закрыты, и людям приходилось заполнять очень ограничительный пренебрежительный проездной сертификат, чтобы выехать за пределы своего места жительства (Ministère de l’intérieur français, 2020). В этих условиях физическая активность вне дома должна быть индивидуальной, не более 1 часа в день и в радиусе 1 км от места жительства (Ministère de l’intérieur français, 2020). Напротив, правительство Германии было менее жестким. Действительно, людям, которые жили в Германии в этот период, разрешалось покидать свои дома, чтобы заниматься спортом или просто подышать свежим воздухом, но только в одиночку или с одним другим человеком.

Физическая активность и физические упражнения десятилетиями использовались для улучшения настроения и регуляции хронического стресса у людей всех возрастов, полов, национальностей и культур (Gladwell et al., 2013; Sjøgaard et al., 2016; Saraulli et al., 2017; Laird et al., 2018). Было продемонстрировано, что острая физическая активность и упражнения улучшают настроение и вызывают адаптивную устойчивость к стрессу за счет увеличения нейроактивных молекул, таких как серотонин, адреналин, нейротрофический фактор головного мозга и окситоцин (Strüder and Weicker, 2001; Lafenetre et al., 2011). Хроническая физическая активность, в частности физические упражнения, приводит к метаболической адаптации, такой как снижение уровня кортизола (Huang et al., 2013), уменьшение воспаления (Koliamitra et al., 2019; Małkiewicz et al., 2019), снижение активности центрального кинуренинового пути. (Agudelo et al., 2014; Metcalfe et al., 2018), улучшение иммунной функции (Phillips and Fahimi, 2018; Rumpf et al., 2021) и снижение проницаемости гематоэнцефалического барьера (Małkiewicz et al., 2019 ). Кроме того, эти метаболические изменения, вызванные физической активностью и физическими упражнениями, обладают некоторыми преимуществами для психического здоровья как для клинических, так и для доклинических групп населения (Laporte et al., 1985; Deslandes et al., 2009; Javelle et al., 2020; Оберсте и др., 2020).

Воздействие на окружающую среду — еще один параметр, предлагаемый для улучшения настроения и снижения стресса (теория снижения стресса и теория восстановления внимания) (Ulrich, 1981; Kaplan, 1995). Несколько исследований функциональной магнитно-резонансной томографии предполагают, что эти восстановительные эффекты могут быть связаны с повышенной активацией клинка, предклинья и задней поясной коры (Tang et al., 2017; Chang et al., 2021).Эти области мозга играют ключевую роль в дозозависимых стрессовых реакциях, потенциально благодаря обширным связям с префронтальной и гиппокампальной областями, которые, в свою очередь, проецируются на нейроэндокринную систему (Chang et al., 2021). Претти и его коллеги заметили, что природные преимущества для здоровья могут быть усилены, если они связаны с физическими упражнениями (Pretty et al., 2003, 2005; Barton, Pretty, 2010; Rogerson et al., 2016). Термин «зеленые упражнения» был одобрен Pretty et al.в 2003 году. В более позднем анализе нескольких исследований было продемонстрировано, что зеленые упражнения умеренно повышают настроение ( d = 0,54) и самооценку ( d = 0,46) (Barton and Pretty, 2010). Кроме того, Gladwell et al. (2013) сообщили в своем обзоре литературы, что зеленые упражнения приводят к снижению воспринимаемого напряжения, изменению физиологического функционирования, включая снижение стресса, восстановление умственной усталости и улучшение настроения, самооценки и воспринимаемого здоровья.

На этом фоне данное анкетное исследование направлено на сравнение уровней физической активности и воздействия окружающей среды между людьми, живущими во Франции и Германии во время изоляции.Была выдвинута гипотеза, что немцы будут больше заниматься физическими упражнениями и находиться на природе, чем французы. Следовательно, у немцев будет более сильное психологическое здоровье и более низкий уровень стресса, чем у французов. Кроме того, это исследование направлено на количественную оценку связи между физической активностью, воздействием природы и восприятием стресса, а также психологическим здоровьем в Германии и Франции в период изоляции 2020 года (апрель – май 2020 года) при контроле широкого диапазона ковариат.

Материалы и методы

Все процедуры соответствовали Хельсинкской декларации и были одобрены Наблюдательным советом университетских учреждений до сбора данных. Автор-корреспондент может предоставить полный набор данных.

Опытный образец

участников были набраны с помощью онлайн-рекламы на веб-сайте Немецкого спортивного университета, в социальных сетях (например, Facebook и Twitter), а также по электронной почте во Франции и Германии с использованием личных и профессиональных сетей.Никаких наград участникам не предоставлялось. Перед тем, как приступить к процедурам исследования, участники подписали онлайн-информированное согласие.

Шкала воспринимаемого стресса (PSS) -10 (Cohen, 1988), Качество жизни Всемирной организации здравоохранения (WHOQoL) -BREF (Harper et al., 1998), Индекс физической активности в свободное время Година-Шепарда (Godin, 2011), модифицированная шкала воздействия на природу (Wood et al., 2019) и дополнительные вопросы, связанные с периодом блокировки, задавались через онлайн-платформу Qualtrics с 19 апреля по 11 мая 2020 года.Опрос был доступен на немецком и французском языках. Критериями включения было проживание во Франции (и свободное владение французским языком) или проживание в Германии (и свободное владение немецким языком) на момент опроса. Чтобы иметь возможность правильно оценить ситуацию во время блокировки без большой разницы между неделями, участникам было предложено учитывать последние 3 недели при заполнении всех шкал, и впоследствии им не нужно было учитывать до или самые первые дни блокировки в своих ответах. .Другие контрольные переменные (например, изменение привычек), записанные для исследовательских целей, не представлены в этом документе из-за недостатка места и фокуса, но их можно найти в дополнительном материале A.

Образец

Размер выборки

Априори расчета размера выборки были оценены с использованием программного обеспечения G ^* Power (версия 3.1.9.2). Исходя из различий в правительственных постановлениях во время пандемии 2020 г., по крайней мере, разница в группах от небольшой до умеренной (η p ² = 0.045) при контроле двух ковариат в ANCOVA ожидалось для основных результатов (уровни физической активности и воздействие на окружающую среду между Францией и Германией). Для достижения этой цели требовалась полная выборка из 369 участников. Априорный расчет для линейной множественной регрессии, двусторонний, с пятью предикторами (страна, индекс Година, общий балл по шкале воздействия природы, возраст и пол), объясняющий 10% общей дисперсии ( r ² = 0,100 ) потребовалось 184 участника.

Наш набор персонала соответствовал требованиям к мощности: в анализ было включено 419 участников.

Характеристики образца

Из 434 участников девять, которые ответили на один или оба вопроса неправильно, и шесть, которые проявили недостаточную внимательность к своим ответам ( Задания для улова и раздел «Неосторожные ответы»), были исключены из анализа. Показатель пропуска был ниже 3,5% по всем вопросам в немецких и французских опросах. Из 419 участников, включенных в окончательный анализ, 13 (10 из Германии и три из Франции) не были носителями языка, но свободно владели используемым языком и поэтому были включены в анализ.Судя по указанным почтовым индексам, большинство участников проживали в Рона-Альпы и Северный Рейн-Вестфалия по сравнению со всеми другими регионами во Франции и Германии (дополнительный материал A).

Описательные характеристики участников по странам представлены в таблице 1. Для анализа были доступны данные 145 французских и 274 немецких участников, заполнивших батарею вопросников. Немецкая выборка включала 33,6% мужчин [vs. 48,7% населения мира в 2019 г. (Statista, 2020a)].Французская выборка включала 39,3% мужчин [vs. 48,3% мирового населения в 2019 г. (INSEE, 2020c)]. Один немецкий участник сообщил, что он разнообразен, и был исключен из гендерного сравнения как единственный в своей категории. Французская выборка включала меньше студентов и более активных людей, чем немецкая выборка (20–70,3 против 40,9–54%; Таблица 1, дополнительных вопросов, раздел ). Франция сообщила о большем количестве участников, проживающих в деревне, чем Германия (48,3% против 17,2%, дополнительных вопросов, раздел , таблица 1).Средний возраст составил 40,7 года во французской выборке [41,3 года среди населения мира в 2017 году (INSEE, 2020a)] и 32,5 года в немецкой выборке [44,5 года среди населения мира в 2019 году (Statista, 2020b)]. Возраст значительно отличался между французскими и немецкими ответами ( p <0,010, таблица 1).

Таблица 1 . Описательная характеристика французского и немецкого образцов.

Шкала воспринимаемого напряжения-10 (Коэн, 1988)

PSS — наиболее широко используемый психологический инструмент для измерения восприятия стресса (Cohen et al., 1983). Это показатель степени, в которой ситуации в жизни оцениваются как стрессовые. Пункты были разработаны, чтобы выявить, насколько непредсказуемыми, неконтролируемыми и перегруженными респонденты находят свою жизнь (Cohen et al., 1983). PSS-10 был предпочтительнее PSS-14 из-за большей надежности, плохой загрузки четырех дополнительных элементов (5, 6, 12 и 13), имеющихся в PSS-14, и эквивалентной достоверности (Cohen, 1988; Lee, 2012 ). Участников попросили ответить на все вопросы по шкале Лайкерта (от 1 «никогда» до 5 «очень часто»).Были использованы утвержденные французская и немецкая версии (Rolland, 1991; Klein et al., 2016). Общая альфа Кронбаха составила 858 (французская версия — 840; немецкая версия — 867).

Качество жизни Всемирной организации здравоохранения — BREF (Harper et al., 1998)

Инструмент WHOQoL – BREF — это действующая и надежная сокращенная версия WHOQoL-100, которая более удобна для использования в крупных исследовательских исследованиях. Он состоит из 26 пунктов, которые измеряют следующие широкие области: физическое здоровье, психологическое здоровье, социальные отношения и окружающая среда (Harper et al., 1998). Были использованы утвержденные французская и немецкая версии (Baumann et al., 2010; Burfeind, 2011). Ответы на каждый элемент кодируются от 1 до 5 и усредняются по домену. Общая альфа Кронбаха составила 847 (французская версия — 798; немецкая версия — 823).

Индекс физической активности в свободное время Година-Шепарда (Годин, 2011) и вопросы, связанные с физической активностью

Участников попросили оценить их среднюю частоту физической активности в неделю и время на сеанс в течение 3 недель до заполнения анкеты (т.е., в период блокировки).

Индекс физической активности в свободное время Година-Шепарда рассчитывается по следующей формуле: (частота умеренных физических упражнений в неделю × 3) + (частота умеренных физических упражнений в неделю × 5) + (частота интенсивных физических упражнений в неделю × 9) (Годин, 2011). Предполагаемые пороговые значения для классификации основаны на нормативах по физической активности в области общественного здравоохранения Северной Америки, которые определены следующим образом: лица, сообщающие об индексе досуга от умеренной до тяжелой степени ≥ 24, классифицируются как активные, тогда как лица, сообщающие об умеренной физической активности. Индекс досуга до напряженного состояния ≤ 23 классифицируется как недостаточно активный (расчетный расход энергии <14 ккал / кг / неделя) (Годин, 2011).

Модифицированная шкала воздействия на природу (Wood et al., 2019)

Модифицированная шкала воздействия на природу — это шкала из пяти пунктов, предназначенная для оценки прямого физического и / или сенсорного контакта с природной средой (Wood et al., 2019). Эта версия была предпочтительнее шкалы с четырьмя пунктами, созданной Фрэнсисом (не опубликовано), по причине ее лучшего соответствия модели. Один пункт предназначен для оценки воздействия природы в повседневной жизни, два пункта — для оценки воздействия за пределами повседневной среды, а два пункта — для оценки воздействия природы во время физических упражнений.Каждый вопрос шкалы оценивается по 5-балльной шкале Лайкерта (от 1 «высокий / очень хорошо» до 5 «низкий / не очень»), причем более высокие баллы отражают большее воздействие на природу. Общий балл рассчитывался как среднее значение по пяти пунктам.

французской и немецкой версий были переведены авторами и оценены с помощью подтверждающего факторного анализа (CFA) перед использованием их результатов (немецкая и французская версии и краткое изложение CFA доступны в дополнительных материалах B, C, соответственно).И немецкая, и французская версии получили приемлемую посадку (однофакторная структура), но должны быть протестированы повторно независимо от периода блокировки. Общая альфа Кронбаха составила 811 (французская версия — 847; немецкая версия — 811).

Дополнительные вопросы

К ранее упомянутым анкетам было добавлено несколько вопросов, касающихся текущей пандемии и оценки потенциальных ковариат стресса и психологического здоровья, которые могут повлиять на наши результаты.

Участников спросили об их возрасте, поле [i.д., мужчины, женщины и другие) и статус (т.е. студент, пенсионер, активный и неактивный — на основе определений Французского национального института статистики и экономики (INSEE, 2020b)]. Их спросили сообщить, есть ли у них дома другие лица (например, дети и старики), под их ответственность; изменились ли их рабочие привычки; жили ли они в деревне, маленьком городе или большом городе; а также почтовый индекс их вид на жительство в период изоляции.

Участников попросили сообщить, страдают ли они какими-либо хроническими заболеваниями, и если да, то какого конкретного типа.Эти неограниченные ответы затем были классифицированы экспериментаторами как психологические или физические расстройства. Участники должны были сообщить, есть ли у них подозрение и / или диагноз COVID-19. Этих участников оставили в анализе, но эта переменная рассматривалась как потенциальная ковариата. Эта переменная считалась бинарной (подозреваемый или диагностированный против здорового) и на трех уровнях (подозреваемый против диагностированного против здорового).

Наконец, был записан день заполнения анкеты, чтобы контролировать продолжительность периода блокировки в течение трех недель, когда наша анкета предлагалась онлайн.

Поймать предметы и неосторожные ответы

Две позиции улова были стратегически размещены вдоль анкеты. Эти контрольные вопросы (пожалуйста, выберите «Я согласен») были представлены как контрольные вопросы («Проверка случайных ответов»), чтобы внимательные респонденты не рассматривали эти вопросы как ошибки или как часть психологической оценки. Позже они использовались для выявления и исключения случайных ответов. Методы, описанные Мидом и его коллегами для уменьшения, выявления и устранения неосторожного ответа, также были применены к этому опроснику (Meade and Craig, 2012).Для взаимодействия с участниками использовались имена, аббревиатуры или псевдонимы (по выбору участников). В конце анкеты участники должны были оценить уровень помощи, которую они предоставили в ответ на свои ответы, по шкале от 1 (почти полное отсутствие помощи) до 5 (полное лечение). Участники, сообщившие об уровне помощи ниже 3 (модерируемая помощь), были исключены из анализа. Участников также спросили, считают ли они качество своих ответов достаточным для включения в наш анализ. Участники, ответившие «нет», были исключены из анализа.

Статистика

Генералы

Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения SPSS, версия 23.0 (IBM, Армонк, Нью-Йорк) и R, версия 1.2.1335. Сначала данные были оценены на уровне 1% и 99% (± 2,58 стандартного отклонения) для обеих стран независимо. На основании центральной предельной теоремы, примененной к большим числам, распределение выборки в наших выборках было нормальным. Тем не менее, все переменные были проверены на линейность ( с помощью графика квантиль – квантиль и гистограмма стандартизированных остатков), асимметрии и эксцесса.Если эти предположения не выполнялись, данные корректировались с помощью соответствующего преобразования. Таким образом, время тренировок до и во время периода блокировки было скорректировано на извлечение квадратного корня и затем соответствовало предположениям о линейности. Описательные характеристики сравнивались между странами с использованием тестов t . Результаты анкетирования с учетом потенциальных ковариат сравнивались между странами с использованием анализа ковариации ANCOVA. «Профессиональный статус», «возраст» и «место проживания» были самыми разными переменными, распределенными между нашими выборками.Распределения «репетиторство» и «рабочие привычки» также умеренно различались между нашими выборками. Это очень вероятно из-за большого совпадения с ранее упомянутыми переменными. Впоследствии «профессиональный статус», «возраст» и «место проживания» рассматривались как ковариаты в одномерном анализе. Взаимосвязи между переменными полного набора данных были оценены с помощью двумерных корреляций и регрессионных моделей (раздел Модели множественной линейной регрессии, ). Альфа-коррекция Бонферонни применялась на уровне семьи для сравнительного и корреляционного анализа.Таким образом, показатели физической нагрузки (время тренировки и индекс Година) считались значимыми при p <0,025.

Модели множественной линейной регрессии

Корреляционная таблица и категориальный анализ были построены для выявления потенциальных связей между зависимыми переменными и ковариатами. Только выявленные значимые ковариаты затем использовались для построения моделей множественной регрессии (дополнительный материал A).

Значения результатов из множественных регрессионных моделей всегда были непрерывными (уровни психологического здоровья PSS-10 и WHOQoL-BREF), а основной предиктор для каждой модели был либо бинарным, либо непрерывным (Field, 2013).Все предикторы были протестированы на мультиколлинеарность (коэффициент увеличения дисперсии и значения допуска — принятые значения были соответственно <2 и> 0,2), независимость (тест Дарбина Ватсона — принятые результаты были между 1 и 3) и линейность (графически через квантиль – график квантилей, график рассеяния и гистограмма стьюдентизированных остатков) (Bowerman and O’Connell, 1990). Предикторы и модели соответствовали всем ранее упомянутым предположениям.

Модель 1 . Различия в воспринимаемых уровнях стресса между Францией и Германией вызвали наибольший интерес, поэтому в качестве основного предиктора была выбрана переменная «страна».Другие независимые предикторы были выбраны на основе литературы, а затем на основе результатов одномерного анализа. Предполагается, что показатели индекса Година являются лучшими показателями физической подготовки, чем продолжительность простых упражнений, и поэтому были выбраны в качестве предиктора упражнений. Общий балл по шкале воздействия на природу, возраст, пол и профессиональный статус также были включены в модель, чтобы учесть различия в распределении выборки из каждого опроса.

Модель 2 . Была создана более полная модель, применяемая ко всем участникам, чтобы лучше понять уровни стресса участников независимо от страны происхождения.В модель были добавлены дополнительные переменные, потенциально влияющие на уровни стресса, а переменная «страна» была удалена. Все предикторы по-прежнему были независимыми (например, хроническое заболевание не могло быть включено в качестве предиктора, потому что оно уже было представлено континуумом оценок, существующих в области физического здоровья). Все области из WHOQoL-BREF (кроме психологического здоровья), профессиональный статус, возраст, пол, индекс Година и общий балл по шкале воздействия на природную среду рассматривались как потенциальные коварианты.

Модель 3 . Вторым интересом были различия в уровнях психологического здоровья между Францией и Германией, поэтому в качестве основного предиктора для исходной модели была выбрана переменная «страна». Другими предикторами были индекс Година, общий балл за воздействие природы, профессиональный статус и пол.

Модель 4 . Была создана более полная модель, чтобы лучше понять уровни психологического здоровья участников независимо от страны происхождения. В модель были добавлены дополнительные переменные, потенциально влияющие на психологическое здоровье, а переменная «страна» была удалена.Все предсказатели оставались независимыми. Все остальные области из WHOQoL-BREF, профессиональный статус, пол, индекс Година и общий балл по шкале воздействия на природную среду рассматривались как потенциальные коварианты.

Результаты

При учете влияния возраста, профессионального статуса и места проживания участники из Германии сообщили, что во время изоляции выполняли больше физических упражнений (η p ² = 0,014, p <0,05), чем участники, проживающие во Франции.Показатели индекса Година в разных странах не различались (η p ² = 0,002, p = 0,335). Средние значения индекса Година для обеих стран были значительно выше порогового значения 24, чтобы считаться активными (40,0 против 42,7).

Результат анкеты

Различия между группами из каждого вопросника представлены в таблице 2. При контроле по возрасту, профессиональному статусу и месту проживания участники из Германии имели значительно более высокие уровни восприятия стресса (η p ² = 0.014, р <0,050). Область психологического здоровья WHOQoL-BREF была значительно выше для участников из Германии (η p ² = 0,041, p <0,001). Общий балл «Воздействие природы» был выше для участников из Германии, когда он контролировался по месту проживания участников (η p ² = 0,034, p <0,001).

Таблица 2 . Сравнение результатов анкетирования между Францией и Германией с учетом влияния возраста, профессионального статуса и места проживания.

Время упражнений во время пандемии и показатели индекса Година обратно коррелировали с уровнями PSS-10 ( r ‘s> — 0,136, p ‘ s <0,01), что свидетельствует об отрицательной связи между физической активностью и воспринимаемым уровнем стресса (таблица 3). Более того, оценка воздействия на окружающую среду также отрицательно коррелировала с уровнями стресса ( r = -0,128, p <0,010). Положительная корреляция наблюдалась между показателями психологического здоровья и физической активности, а также оценкой воздействия на окружающую среду ( r ‘s> 0.180, p <0,001).

Таблица 3 . Таблица корреляций между индексами физической активности, общими баллами по шкале воздействия на окружающую среду и результатами анкетирования.

Дата завершения была обратно коррелирована со временем тренировки во время блокировки и индексом Година ( r ‘s> — 0,113, p ‘ s <0,050) и положительно коррелировала с возрастом ( r = 0,220, p <0,001), но не выявили никакой связи с воспринимаемым стрессом и психологическим здоровьем.

Одномерный анализ влияния каждой категориальной переменной PSS-10 и уровней психологического здоровья был также хорошо реализован (дополнительный материал A). Только пол и профессиональный статус достигли значения (дополнительный материал A).

Модели множественной линейной регрессии

Результаты моделей множественной линейной регрессии представлены в таблице 4.

Таблица 4 . Таблица результатов модели множественной линейной регрессии.

PSS-10 — воспринимаемые уровни стресса

Модель 1 .Из шести предикторов: общий балл по шкале воздействия природы ( β = -0,041, p = 0,245), профессиональный статус ( β = -0,033, p = 0,163) и пол (женщины по сравнению с мужчинами). , β = -0,029, p = 0,659) не были значимыми. Модель объяснила 9,9% ( p <0,001) общей дисперсии, где страна (Германия по сравнению с Францией, β = — 0,187, p <0,010), индекс Година ( β = — 0.005, p <0,001) и возраст ( β = — 0,008, p <0,010) - все они отрицательно связаны с уровнями стресса.

Модель 2 . Модель регрессии, примененная к полной выборке, объяснила 30,7% ( p <0,001) общей дисперсии. Тем не менее, профессиональный статус ( β = — 0,024, p = 0,264), пол (женщины по сравнению с мужчинами, β = 0,055, p = 0,330) и общий балл по шкале воздействия природы ( β = 0.010, p = 0,740) не были значимыми предикторами. Физическое здоровье (DOM1, β = — 0,106, p <0,001), социальные отношения (DOM3, β = — 0,038, p <0,001), окружающая среда (DOM4, β = –0,056, p <0,010), индекс Година ( β = — 0,003, p <0,050) и возраст ( β = — 0,007, p <0,010) были связаны с уровнями стресса. Связь между восприятием стресса, воздействием природы и индексом Година проиллюстрирована на рисунке 1.

Рисунок 1 . Иллюстрация множественной регрессии по шкале воспринимаемого стресса 10 (PSS-10) только с двумя предикторами: индекс Година и общая оценка воздействия природы (NAS). Отсутствующие значения в NAS отображаются серым цветом. Линия регрессии (синяя) представлена ​​с 95% доверительным интервалом (серая область).

Качество жизни Всемирной организации здравоохранения — BREF — Психологическое здоровье

Модель 3 . Из пяти предикторов только пол (женщины по сравнению с мужчинами, β = −0.482, p = 0,051) не было значимым. Эта модель объяснила 10,1% ( p <0,001) общей дисперсии, где страна (Германия по сравнению с Францией, β = -1,005, p <0,001), индекс Година ( β = 0,018, p <0,001), воздействие природы ( β = 0,409, p <0,010) и профессиональный статус ( β = 0,170, p <0,050) - все они были положительно связаны с психологическим здоровьем.

Модель 4 . Полученная модель объяснила 42,1% ( p <0,001) общей дисперсии. Тем не менее, профессиональный статус ( β = 0,023, p = 0,730) и пол (женщины по сравнению с мужчинами, β = — 0,164, p = 0,395) не были значимыми предикторами. Физическое здоровье ( β = 0,504, p <0,001), социальные отношения ( β = 0,196, p <0,001), окружающая среда ( β = 0.232, p <0,001), индекс Година ( β = 0,009, p <0,050) и общий балл по шкале воздействия природы ( β = 0,197, p <0,050) были положительно связаны с психологическим здоровьем. . Связь между психологическим здоровьем, воздействием природы и индексом Година проиллюстрирована на Рисунке 2.

Рисунок 2 . Иллюстрация множественной регрессии психологического здоровья только с двумя предикторами: индекс Година и общий балл воздействия на природную среду (NAS).Отсутствующие значения в NAS отображаются серым цветом. Линия регрессии (синяя) представлена ​​с 95% доверительным интервалом (серая область).

Обсуждение

Это исследование на основе вопросника было направлено на сравнение физической активности и уровней воздействия окружающей среды, а также восприятия стресса и психологического здоровья в немецких и французских выборках в период изоляции (апрель – май 2020 г.). Кроме того, связь физической активности и воздействия окружающей среды с восприятием стресса и психологическим здоровьем оценивалась с помощью нескольких моделей линейной регрессии.

Участники из Германии сообщили о значительно большей физической активности в период изоляции, чем участники из Франции (Таблица 1), и, следовательно, имели более высокий показатель индекса Година, который, тем не менее, был незначительным после учета влияния возраста, профессионального статуса и уровня жизни. место нахождения. Эффект от полного запрета Франции на мероприятия на свежем воздухе проявился еще более отчетливо, если принять во внимание общие баллы по шкале естественного воздействия. Даже после учета местоположения проживания общие баллы по шкале воздействия на природу были выше у немецких участников (размер эффекта от малого до умеренного; Таблица 2).Эти результаты подтвердили нашу гипотезу. Во время изоляции немецкий образец был больше на улице и выполнял больше физических нагрузок, чем французский образец. Принимая во внимание сокращенное количество времени, разрешенное на улице (например, 1 час в день), дополнительные усилия по выходу на улицу для выполнения некоторых действий (например, всегда иметь пренебрежительный проездной сертификат) по сравнению с отсутствием ограничения времени, кроме сопровождения в Германии, эти результаты оказались логичными. Кроме того, были обнаружены различия в уровнях психологического здоровья в пользу участников из Германии (величина эффекта от малого до умеренного).Тем не менее, немецкие участники также сообщили о более высоком воспринимаемом стрессе, чем французские участники (небольшая величина эффекта).

Продолжая наш анализ, мы проверили обнаруженные различия в регрессионных моделях. Вместе с переменной «страна» физическая активность и воздействие окружающей среды были значимыми предикторами уровней психологического здоровья и ответственны за небольшую или умеренную часть общей дисперсии (10%). Положительная взаимосвязь, отображаемая в регрессионной модели (и в таблице корреляций) между психологическим здоровьем, физической активностью и воздействием окружающей среды, согласуется с научной литературой, уже имеющей убедительные доказательства из многочисленных исследований (Plante and Rodin, 1990; Atlantis et al., 2004). Взаимодействие между физическими упражнениями и психическим здоровьем является результатом множества факторов (Plante and Rodin, 1990). Например, было показано, что повышенная нейротрансмиссия норадреналина, серотонина и дофамина после упражнений улучшает настроение, мышечный потенциал и снятие напряжения, а также дает чувство контроля над мастерством и самодостаточности (Plante and Rodin, 1990). Кроме того, было показано, что хронические упражнения улучшают иммунные функции, а также регуляцию кинурениновых путей, которые являются косвенными регуляторами настроения и психологического здоровья (Won and Kim, 2016; Metcalfe et al., 2018; Малкевич и др., 2019). При рассмотрении воздействия на природу (физический и / или сенсорный контакт с природной средой) предыдущие исследования показали, что последняя может улучшить психическое благополучие, внимание и настроение. Действительно, природные преимущества для здоровья были признаны очень давно (Hartig and Marcus, 2006). При включении значимых ковариат и применении к полной выборке (без сравнения стран) регрессионная модель, созданная для психологического здоровья, объяснила более 40% общей дисперсии.Общий балл по шкале воздействия природы и индекс Година были определены как важные предикторы психологического здоровья, наряду с физическим здоровьем (DOM1), окружающей средой (DOM3) и социальными отношениями (DOM4). На протяжении десятилетий научное сообщество признавало связь между физическим и психологическим здоровьем (Plante and Rodin, 1990). Тем не менее, наши результаты также являются одними из первых, которые показывают, что природный дефицит в основном существует у неактивных людей и у психологического здоровья (рис. 2; индекс Година <25 - DOM2 ≤ 14).

При рассмотрении восприятия стресса регрессионная модель также объяснила небольшую или умеренную часть общей дисперсии (10%). Тем не менее, только страна происхождения, индекс Година и возраст были значимыми предикторами. После включения ковариат и применения к полной выборке (без сравнения стран) регрессионная модель объяснила 30% общей дисперсии. В соответствии с литературой, физическое здоровье (DOM1), окружающая среда (DOM3), социальные отношения (DOM4), индекс Година и возраст были определены как важные предикторы.Эти результаты не только подтверждают уже признанные связи (Plante and Rodin, 1990; Talley et al., 2012; Campos et al., 2014), но также показывают, что физическая активность является прямым предиктором воспринимаемого уровня стресса (Рисунок 1). Действительно, ряд рандомизированных контролируемых исследований показал, что тренировки с упражнениями являются эффективным методом улучшения симптомов стресса и улучшения качества жизни (Weyerer, Kupfer, 1994; Atlantis et al., 2004; Imayama et al., 2011). Физические упражнения блокируют влияние психологического стресса на сердечную реактивность (Hamer et al., 2006) и подавляет вызванное стрессом повышение уровня гормонов стресса (Stults-Kolehmainen and Sinha, 2014). Несмотря на то, что он отрицательно коррелировал с восприятием стресса, общий балл по шкале воздействия на природную среду не являлся значимым предиктором баллов по шкале PSS-10. Наши результаты показывают, что воздействие природы является более надежным предиктором психологического здоровья, чем восприятия стресса.

Несмотря на новизну и сильные стороны, существует несколько ограничений. Во-первых, первоначальное различие, предполагающее, что немецкие участники, возможно, испытывали больший стресс, чем французы (небольшой размер эффекта), было неожиданным.Это особенно удивительно, учитывая более высокие уровни физической активности и воздействия на окружающую среду в немецком опросе. Тем не менее, одномерный анализ контролировался для переменных, которые по-разному распределялись между нашими выборками (например, возраст, место проживания и профессиональный статус). Возможно, на наши результаты повлияли и другие параметры. Объяснение этой разницы может быть дано неконтролируемыми ковариатами, такими как доминирующие черты личности [например, невротизм связан со стрессовой реактивностью (Lahey, 2009)], которые не оценивались из-за компромисса между длиной анкеты и размером выборки.Во-вторых, набор персонала в Германии частично проводился в кампусе Немецкого спортивного университета, где принимали участие многие студенты-спортсмены, тогда как во Франции не использовалась сеть профессиональных спортивных наук. Это могло повлиять на общие показатели физической активности в немецкой выборке и могло быть еще одним объяснением разницы во времени физических упражнений в период изоляции между немецкой и французской выборками. В-третьих, небольшая величина эффекта приводит к недостаточной мощности одномерного анализа (т.е. восприятие стресса и время физической активности во время блокировки) (46%, апостериорный анализ чувствительности для ANCOVA с тремя ковариатами и η p ² = 0 .014). Мощность могла быть еще более уменьшена из-за несбалансированности немецких и французских образцов, что привело к неравным отклонениям. Тем не менее, тесты Левена не обнаружили этого. В-четвертых, даже несмотря на то, что использовались лучшие методы для извлечения данных репрезентативных значений, домашние анкеты все же менее точны, чем интервью или более прямые измерения физических упражнений (например, устройство слежения и актиграфия). Наконец, в этом контексте важно учитывать при интерпретации настоящего исследования, что не все физические нагрузки (например,g., работа по дому) коррелируют с хорошим здоровьем (Lawlor et al., 2002). Тем не менее, эти действия могут выполняться в оздоровительной манере, например, физические упражнения, если задействованы соответствующие группы мышц, с достаточной интенсивностью и надлежащим восстановлением.

Выводы

В заключение, результаты этого исследования отражают влияние решений о запрете на физическую активность, воздействие природы и, следовательно, на психологическое здоровье и воспринимаемый уровень стресса. Регрессионные модели показали, что воздействие природы и физическая активность являются прогностическими факторами психологического здоровья.Физическая активность также была предиктором воспринимаемого уровня стресса. Наши результаты показывают, что физическая активность и воздействие на окружающую среду стали ключевыми факторами в период изоляции во Франции и Германии. Принимая во внимание предыдущую литературу и эти новые данные, воздействие на окружающую среду и физическая активность следует рассматривать более систематически как факторы, влияющие на психологическое здоровье, и потенциально как дополнение или альтернативу фармакологическому лечению расстройств и синдромов, связанных с настроением.

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Это исследование с участием людей было рассмотрено и одобрено Наблюдательным советом Немецкого спортивного университета. Участники предоставили онлайн-информированное согласие на участие в этом исследовании.

Взносы авторов

FJ, TH, SL и PZ сделали концептуальную концепцию исследования.FJ занимался администрированием проекта. FJ курировал данные. FJ провел анализ данных. FJ, TH, AM, SL и PZ написали, просмотрели и отредактировали рукопись. AM вычитала рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Управляющий редактор заявил о прошлом соавторстве с одним из авторов SL.

Благодарности

Авторы хотят поблагодарить группу NoSTRESS и команду CENIg, а также Дидье Джавель, Натали Джавель и Фанни Джавель за участие в пилотном проекте и за их предложения, которые помогли разработать лучшую версию анкеты.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyg.2021.623946/full#supplementary-material

Список литературы

Агудело, Л.Z., Femenía, T., Orhan, F., Porsmyr-Palmertz, M., Goiny, M., Martinez-Redondo, V., et al. (2014). Скелетная мышца PGC-1α1 модулирует метаболизм кинуренина и обеспечивает устойчивость к депрессии, вызванной стрессом. Cell 159, 33–45. DOI: 10.1016 / j.cell.2014.07.051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Атлантис, Э., Чоу, К. М., Кирби, А., и Фиатароне Сингх, М. (2004). Эффективное вмешательство, основанное на физических упражнениях, для улучшения психического здоровья и качества жизни: рандомизированное контролируемое исследование. Предотвратить. Med. 39, 424–434. DOI: 10.1016 / j.ypmed.2004.02.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бартон Дж. И Претти Дж. (2010). Какая лучшая доза природы и зеленых упражнений для улучшения психического здоровья — анализ нескольких исследований. Environ. Sci. Technol. 44, 3947–3955. DOI: 10.1021 / es3r

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бауманн, К., Эрпельдинг, М. Л., Рега, С., Коллин, Дж.Ф. и Бриансон С. (2010). Анкета WHOQOL-BREF: нормы французского взрослого населения в отношении физического здоровья, психологического здоровья и социальных отношений. Revue d’Epidemiologie et de Sante Publique 58, 33–39. DOI: 10.1016 / j.respe.2009.10.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бауэрман, Б. Л., и О’Коннелл, Р. Т. (1990). Линейные статистические модели: прикладной подход . Бельмонд, Калифорния: Даксбери.

Бурфейнд, А.(2011). Lebensqualität und Pflegeerfahrungen bei Angehörigen von Patienten mit psychotischen Störungen . Universität zu Lübeck, Германия.

Google Scholar

Кампос Б., Ульман Дж. Б., Агилера А. и Дункель Шеттер К. (2014). Семейство и психологическое здоровье: промежуточная роль близости и социальной поддержки. Культ. Дайверы. Этнический несовершеннолетний. Psychol. 20, 191–201. DOI: 10.1037 / a0034094

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чанг, Д.Х. Ф., Цзян Б., Вонг, Н. Х. Л., Вонг, Дж. Дж., Вебстер, К., и Ли, Т. М. С. (2021). Задняя часть поясной извилины человека и влияние на стресс-реакцию просмотра зеленых городских ландшафтов. NeuroImage 226: 117555. DOI: 10.1016 / j.neuroimage.2020.117555

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коэн, С. (1988). «Воспринимаемый стресс в вероятностной выборке США», в Социальная психология здоровья , ред. С. Спакапан и С. Оскэмп (Ньюбери-Парк, Калифорния: Sage Publications), 31–67.Доступно в Интернете по адресу: https://psycnet.apa.org/record/1988-98838-002 (по состоянию на 10 июня 2020 г.).

Google Scholar

Коэн, С., Камарк, Т., и Мермельштейн, Р. (1983). Глобальный показатель воспринимаемого стресса. J. Health Soc. Behav. 24, 385–396. DOI: 10.2307 / 2136404

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Deslandes, A., Moraes, H., Ferreira, C., Veiga, H., Silveira, H., Mouta, R., et al. (2009). Физические упражнения и психическое здоровье: множество причин переехать. Нейропсихобиология 59, 191–198. DOI: 10.1159 / 000223730

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Филд, А. М. (2013). Обнаружение статистики с помощью IBM SPSS Statistics . Таузенд-Оукс, Калифорния: Sage Publications.

Google Scholar

Гладуэлл В. Ф., Браун Д. К., Вуд К., Сандеркок Г. Р. и Бартон Дж. Л. (2013). Природа на свежем воздухе: как зеленая среда для тренировок может принести пользу всем. Extr. Physiol.Med. 2: 3. DOI: 10.1186 / 2046-7648-2-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Годин. (2011). Анкета Година-Шепарда по физической активности в свободное время. Здоровье и Фитнесс. J. Can. 4, 18–22. DOI: 10.14288 / hfjc.v4i1.82

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хамер М., Тейлор А. и Степто А. (2006). Влияние острых аэробных упражнений на реакции артериального давления, связанные со стрессом: систематический обзор и метаанализ. Biol. Psychol. 71, 183–190. DOI: 10.1016 / j.biopsycho.2005.04.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Харпер А., Пауэр М., Орлей Дж., Херрман Х., Скофилд Х., Мерфи Б. и др. (1998). Разработка Всемирной организации здравоохранения WHOQOL-BREF для оценки качества жизни. Psychol. Med. 28, 551–558. DOI: 10.1017 / S00332006667

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст

Хартиг, Т., и Маркус, К.С. (2006). Очерк: лечебные сады-места для природы в здравоохранении. Ланцет 308, S36 – S37. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (06) 69920-0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг, К. Дж., Уэбб, Х. Э., Зурдос, М. К., и Асеведо, Э. О. (2013). Сердечно-сосудистая реактивность, стресс и физическая активность. Фронт. Physiol. 4, 1–13. DOI: 10.3389 / fphys.2013.00314

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст

Имаяма И., Альфано К. М., Конг А., Фостер-Шуберт, К. Э., Бэйн, К. Э., Сяо, Л. и др. (2011). Влияние диетической потери веса и физических упражнений на качество жизни женщин в постменопаузе с избыточным весом / ожирением: рандомизированное контролируемое исследование. Внутр. J. Behav. Nutr. Phys. Действовать. 8: 118. DOI: 10.1186 / 1479-5868-8-118

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джавель Ф., Виганд М., Джорманн Дж., Тимпано К. Р., Циммер П. и Джонсон С. Л. (2020). Немецкий трехфакторный индекс импульсивности: подтверждающий факторный анализ и связь с демографическими переменными и переменными, связанными со здоровьем. чел. Ind. Diff . 171: 110470. DOI: 10.1016 / j.paid.2020.110470

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Каплан, С. (1995). Восстановительные преимущества природы: к интегративной структуре, J. Environ. Psychol. 15, 169–182. DOI: 10.1016 / 0272-4944 (95)-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кляйн Э. М., Брэлер Э., Драйер М., Райнеке Л., Мюллер К. В., Шмутцер Г. и др. (2016). Немецкая версия шкалы воспринимаемого стресса — психометрические характеристики в репрезентативной выборке немецкого сообщества. BMC Psychiatry 16: 159. DOI: 10.1186 / s12888-016-0875-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Колиамитра К., Джавел Ф., Йойстен Н., Шимабукуро-ворнхаген А., Блох В., Шенк А. и др. (2019). Индуцируют ли острая вызванная физической нагрузкой активация кинуренинового пути регуляторные Т-клетки в долгосрочной перспективе? Теоретическая основа, подтвержденная экспериментальными данными. J. Sports Sci. Мед . 18, 669–673.

Google Scholar

Лафенетр, П., Леске, О., Уол, П., и Хойманн, Р. (2011). Благоприятное влияние физической активности на нарушенный нейрогенез и когнитивные способности взрослых. Фронт. Neurol. 5, 1–8. DOI: 10.3389 / fnins.2011.00051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лэрд, К. Т., Пахолпак, П., Роман, М., Рахи, Б., и Лаврецкий, Х. (2018). Психо-телесная терапия для психического и когнитивного здоровья в пожилом возрасте. Curr. Psychiatry Rep. 20: 2. DOI: 10.1007 / s11920-018-0864-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ляпорт, Р.E., Montoye, H.J. и Caspersen, C.J. (1985). Оценка физической активности в эпидемиологических исследованиях: проблемы и перспективы. Представитель общественного здравоохранения , 100, 361–362.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Лоулор, Д. А., Тейлор, М., Бедфорд, К., и Эбрахим, С. (2002). Полезна ли работа по дому для здоровья? Уровни физической активности и факторы, связанные с активностью у пожилых женщин. Результаты исследования сердца и здоровья британских женщин. J. Epidemiol. Commun.Здоровье 56, 473–478. DOI: 10.1136 / jech.56.6.473

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Г., Фань, Ю., Лай, Ю., Хань, Т., Ли, З., Чжоу, П. и др. (2020). Коронавирусные инфекции и иммунные реакции. J. Med. Virol. 92, 424–432. DOI: 10.1002 / jmv.25685

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Малкевич, М. А., Шармах, А., Сабиш, А., Кубала, В. Дж., Шуровска, Э., Винклевски, П. Дж. (2019). Проницаемость гематоэнцефалического барьера и физические нагрузки. J. Нейровоспаление 16, 1–16. DOI: 10.1186 / s12974-019-1403-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Меткалф А., Колиамитра К., Джавель Ф., Блох В. и Циммер П. (2018). Острые и хронические эффекты физических упражнений на кинурениновый путь у людей — краткий обзор и перспективы на будущее. Physiol. Behav. 194, 583–587. DOI: 10.1016 / j.physbeh.2018.07.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Оберсте, М., Medele, M., Javelle, F., Joisten, N., Walzik, D., Bloch, W., et al. (2020). Физическая активность при подростковой депрессии: систематический обзор и метаанализ. Фронт. Physiol . 11: 185. DOI: 10.3389 / fphys.2020.00185

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Филлипс К. и Фахими А. (2018). Иммунные и нейропротекторные эффекты физических нагрузок на мозг при депрессии. Фронт. Neurosci. 12, 1–22. DOI: 10.3389 / fnins.2018.00498

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст

Планте Т. Г. и Родин Дж. (1990). Физическая подготовка и улучшение психологического здоровья. Curr. Psychol. 9, 3–24. DOI: 10.1007 / BF02686764

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Претти, Дж., Гриффин, М., Селленс, М., и Претти, К. (2003). Зеленые упражнения: взаимодополняющая роль природы, упражнений и диеты в физическом и эмоциональном благополучии и значение для политики общественного здравоохранения .Случайные статьи, Центр окружающей среды и общества, Университет Эссекса.

Google Scholar

Претти, Дж., Пикок, Дж. О., Селленс, М., и Гриффин, М. (2005). Результаты зеленых упражнений на психическое и физическое здоровье Результаты зеленых упражнений на психическое и физическое здоровье. Внутр. J. Environ. Health Res. 15, 319–337. DOI: 10.1080 / 09603120500155963

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Роджерсон М., Браун Д. К., Сандеркок, Г., Вуллер, Дж. Дж., И Бартон, Дж. (2016). Сравнение четырех типичных зеленых условий для упражнений и прогноз результатов психологического здоровья. Персп. Общественное здравоохранение 136, 171–180 DOI: 10.1177 / 1757

5589845

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Румпф К., Прошингер С., Шенк А., Блох В., Лампит А., Джавель Ф. и др. (2021 г.). Влияние острых физических упражнений на цитолитическую активность NK-клеток: систематический обзор и метаанализ. Sports Med. 1–12. DOI: 10.1007 / s40279-020-01402-9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сараулли, Д., Костанци, М., Мастрорилли, В., и Фариоли-Веккиоли, С. (2017). Долгосрочная перспектива: нейрозащитные эффекты физических упражнений на нейрогенез взрослых от юности до старости. Curr. Neuropharmacol. 15, 519–533. DOI: 10.2174 / 1570159X14666160412150223

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сьёгаард, Г., Christensen, J. R., Justesen, J. B., Murray, M., Dalager, T., Fredslund, G.H., et al. (2016). Физические упражнения — это больше, чем лекарство: благополучие и продуктивность населения трудоспособного возраста. J. Sport Health Sci. 5, 159–165. DOI: 10.1016 / j.jshs.2016.04.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Strüder, H. K., and Weicker, H. (2001). Физиология и патофизиология серотонинергической системы и ее влияние на умственную и физическую работоспособность.Часть I. Int. J. Sports Med. 22. DOI: 10.1055 / с-2001-176065

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стултс-Колехмайнен, М.А., и Синха, Р. (2014). Влияние стресса на физическую активность и упражнения. Sports Med. 44, 81–121. DOI: 10.1007 / s40279-013-0090-5

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Талли, А. Э., Кодум, Л., Шлегель, Р. Дж., Моликс, Л., и Беттанкур, Б. А. (2012). Социальные роли, удовлетворение основных потребностей и психологическое здоровье: центральная роль компетенции. чел. Soc. Psychol. Бык. 38, 155–173. DOI: 10.1177 / 0146167211432762

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Tang, I.C., Tsai, Y.P, Lin, Y.J., Chen, J.H., Hsieh, C.H., Hung, S.H., et al. (2017). Использование функциональной магнитно-резонансной томографии (фМРТ) для анализа активности областей мозга при просмотре пейзажей. Landsc. Городской план. 162, 137–144. DOI: 10.1016 / j.landurbplan.2017.02.007

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ульрих, Р.(1981). Природные и городские сцены: некоторые психофизиологические эффекты. Environ. Behav. 13, 523–556. DOI: 10.1177 / 00131135001

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вейерер, С., Купфер, Б. (1994). Физические упражнения и психологическое здоровье. Sports Med. 17, 108–116. DOI: 10.2165 / 00007256-199417020-00003

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вон, Э., и Ким, Ю.-К. (2016). Стресс, вегетативная нервная система и иммунно-кинурениновый путь в этиологии депрессии. Curr. Neuropharmacol. 14, 665–673. DOI: 10.2174 / 1570159X14666151208113006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вуд К., Бэррон Д. и Смит Н. (2019). Текущие и ретроспективные шкалы преднамеренного воздействия на природу: развитие и факторная достоверность. Внутр. J. Environ. Res. Общественное здравоохранение 16: 4443. DOI: 10.3390 / ijerph26224443

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar