«СТС» и «ВКонтакте» запустили вампирский спецпроект
Накануне телепремьеры сериала «Пищеблок» телеканал вместе с социальной сетью «ВКонтакте» запустил необычную диджитал-механику по поиску вампиров среди пользователей. Участники спецпроекта рассказали Sostav об идее и результатах кампании.
По сюжету оригинального проекта «КиноПоиск HD» летом 1980 года в пионерском лагере «Буревестник» дети загадочно исчезают по ночам и возвращаются совершенно другими. Пионер Валера подозревает, что среди детей и вожатых есть вампиры, и начинает собственное расследование.
Именно этот миф — что вампиры живут среди нас — канал решил обыграть вместе с «ВКонтакте». Пользователи социальной сети могли проверить, насколько их друзья соответствуют классическому представлению о вампирах, которые скрываются днем и активизируются только с наступлением сумерек.
В основу новой механики легло поведение пользователей: чем больше времени они проводят в соцсети ночью, тем больше в них от вампиров.
После сканирования профиля каждый пользователь получал постер с именами потенциальных вурдалаков, который можно было разместить в ленте, отметив «подозрительных» друзей.
За неделю работы приложения было найдено более 40 тыс. «вампиров», а общий охват компании составил 2 млн пользователей сети.
Еще одним спецпроектом «СТС » решил напомнить пользователям «ВКонтакте» классические детские страшилки, популярные в летних лагерях. Самые известные из них озвучил официальный голос канала — Сергей Чонишвили. Для получения аудиофайла от чат-бота пользователи публиковали хештег #пищеблокстс.
Алена Кокова, руководитель креативной группы диджитала «СТС»:
Благодаря партнерам из «ВКонтакте» нам удалось создать не стандартный тест-рандомайзер, а приложение, которое действительно анализирует привычки пользователей и помогает увидеть скрытую сторону их жизни. То же делает и главный герой сериала, пытаясь вычислить вампиров в своем окружении.
Телеканал ТНТ представил новый, самый сильный сезон
В четверг, 29 октября, телеканал ТНТ провел для рекламодателей традиционную презентацию нового сезона 2021 года, который обещает стать самым сильным.
Директор ТНТ Роман Петренко рассказал о том, с какими рейтингами телеканал провожает 2020 год, о планах и сюрпризах года грядущего, а также о том, как ТНТ вернуться на первое место на всем российском телевидении, которое канал занимал 7 лет подряд. Перед началом презентации канал представил гостям мероприятия нового диджитал-аватара ТНТ Аню, которая была создана внутри телеканала и станет его виртуальной звездой. Аня будет продвигать бренды в эфире ТНТ, а также присутствовать во всех соцсетях, и даже в одном из шоу канала – потому что в новой реальности всем нужен свой диджитал-аватар.
ТНТ – первый в прайм-тайм будней
По предварительным итогам 2020 года телеканал ТНТ занял первое место в прайм-тайм будних дней – доля канала составила 13.9%.* «Этой осенью мы начали мощное наступление, и все наши осенние премьеры сработали прекрасно» — рассказал Петренко.
На первом месте с гигантским отрывом от конкурентов оказалась «Ольга» с долей 19.7% (против 10.6 у СТС на втором месте).
Причем показатели «Ольги» — самые высокие не только в слоте, но и в целом среди всех сериалов России.
Вторым успешным ситкомом ТНТ стал «Гусар» с Гариком Харламовым – 18.4%* против 10.5% у СТС.
Запущенная в 2020 году линейка киносериалов в 22.00 также принесла телеканалу ТНТ признание аудитории. Лучшими в своих слотах стали сериалы «Игра на выживание» Карена Оганесяна (16.6%) и «Территория» компании GoodStoryMedia (13.2%)*. Среди развлекательных шоу первое место в своем слоте заняла викторина с Павлом Волей «Двое на миллион (15.6%)* и музыкальный проект «Пой без правил» (12.6%)*, а масштабное шоу «Золото» Геленджика» и разговорный проект комиков Talk стали первыми среди молодежи (13.4 и 17.3% соответственно)*.
2021 год будет еще мощнее! А ответ на вопрос, как вернуть каналу лидерство, Роман Петренко рассказал о стратегии в четырех пунктах: увеличить объём премьерного контента, делать ставку на проверенные хиты канала, удвоить объём производства собственных сериалов и увеличить маркетинговые бюджеты.
Продолжения национальных хитов ТНТ
В новом году ТНТ покажет вторые сезоны рейтинговых комедийных сериалов «Год культуры» с Федором Бондарчуком, «Полярный» с Михаилом Пореченковым, «Патриот» с Алексеем Базановым, «ЖУКИ» с Максимом Лагашкиным, «ТРИАДА» с Борисом Дергачевым, «Света с того света» с Марией Машковой, а также «Реальные пацаны», «Ольга» и «Физрук». Кроме того, канал готовит продолжение драматической истории «Мир! Дружба! Жвачка!» с повзрослевшими в девяностых героями.
Лучшие развлекательные шоу: новые сезоны и премьеры
В 2021 году телеканал обещает показать много новых развлекательных шоу.
Во-первых, ТНТ продолжит показ своих хитов: это знаменитый «Холостяк» (уже известно, что главным героем шоу, звездным холостяком станет Тимати), «ТАНЦЫ 2.0» — перезапуск любимого миллионами танцевального шоу с новыми правилами, и более романтичная «Битва экстрасенсов» с участием звезд. Кроме того, ТНТ запустит новое шоу «Ты – топ модель» с Александром Гудковым и Анастасией Решетовой, в котором девушки с самой разной, нестандартной внешностью попытаются пробиться на мировую фэшн-арену и заполучить контракт с известным международным брендом. Также Роман Петренко анонсировал запуск большого музыкального шоу – его название пока держится в строжайшем секрете, и еще нескольких премьер.
Новые комедийные сериалы
Сериалы ТНТ Роман Петренко называет противотанковым оружием канала. Например, в 2020 году каждый новый эпизод «Гусара» с Гариком Харламовым и «Ольги» с Яной Трояновой с большим отрывом побеждали любое другое предложения конкурентов, включая каждый зарубежный Кино-хит СТС*.
В новом году ТНТ обещает показать 7 новых комедийных сериалов собственного производства – актуальных, честных, развлекательных историй, близких современным зрителям:
«Девушки с Макаровым»
Сериал от создателей «Интернов» об эксцентричном начальнике уголовного розыска и молодых курсантках. В главной роли – Павел Майков.
«Яжотец»
Веб-сериал с Гошей Куценко о том, как мужчина средних лет развелся и решил вести блог про настоящую мужскую жизнь, которая на деле оказывается совсем не такой простой, как учат пацанские паблики.
«Исправление и наказание»
Первый тюремный ситком на российском телевидении с Анной Михалковой в роли надзирательницы, которая верит в добро и надеется перевоспитать одну ушлую семейку.
«Отпуск»
Сериал с Татьяной Догилевой и Демисом Карибидисом о семье из Норильска, которую ждут безумные каникулы в солнечном Геленджике – одном из самых популярных в 2020 году курорте среди россиян, лишенных зарубежного отдыха.
«Вика-ураган»
Трогательная и романтичная история о девушке с сильным и буйным характером, которая случайно попала в тюрьму, вернулась и обнаружила, что мир вокруг нее стал совсем другим. В главной роли – Аглая Тарасова.
«1703»
Сериал, который продолжит вечный спор между Москвой и Петербургом. Гоша Куценко и Кузьма Сапрыкин играют полицейских-напарников с разными взглядами на работу и жизнь.
«18+»
Актуальная и провокационная комедия о том, как семейная пара (Максим Лагашкин и Елена Лядова) подается в вебкам, чтобы расплатиться с долгами. Сериал сделан в совместном производстве с платформой PREMIER.
Киносериалы
В этом году ТНТ показал еще не все большие премьеры – в ноябре начнется показ сериала «Перевал Дятлова» с Петром Федоровым, который даст единственно верный ответ на главную загадку СССР. В новом сезоне канал продолжит знакомит аудиторию с драматическими, глубокими, экспериментальными историями в разных жанрах.
«Контакт»
Драма отцов и детей в новую эпоху социальных сетей. Отец-одиночка (Павел Майков) отчаянно пытается наладить отношения с дочкой, переживающей трудный подростковый возраст.
«Глитч»
Евгений Стычкин в роли трудного психического пациента, которого посещают галлюцинации. Пилот снял генеральный продюсер ТНТ Александр Дулерайн, жанр сериала Роман Петренко обозначил как «майндфак».
В финале презентации Роман Петренко поблагодарил конкурентов за то, что они дали ТНТ возможность разозлиться и тем самым обеспечили большой задел на будущее, чтобы окончательно вернуть себе первое место.
Директор ТНТ Роман Петренко: «Новая панель заставила нас пересмотреть нашу программную стратегию с учётом потребностей малых городов. Конкуренция — это хорошо. Мы стали агрессивнее. В новом году мы покажем еще больше премьер. Наша задача – каждый раз попадать в нерв народа».
* По данным Mediascope, TV Index, Россия 100+, Все 14-44, 20.00-24.00, 31.
08.20-28.09.20
* По данным Mediascope, TV Index, Россия 100+, Все 14-44, 20.00-20.50, 31.08.20-24.09.20, «Ольга»
* По данным Mediascope, TV Index, Россия 100+, Все 14-44, 20.00-20.50, 05.10.20, «Гусар»
* По данным Mediascope, TV Index, 22:00:00 — 23:00:00, 14-44 100+, 12.10.2020-15.10.2020, «Территория»
* По данным Mediascope, TV Index, 22:00:00 — 23:00:00, 14-44 100+, 17.09.2020-31.08.2020, «Игра на выживание»
* По данным Mediascope, TV Index, 21-22.00, 31.08–30.09.20, 14-44 100+, «Двое на миллион»
* По данным Mediascope, TV Index, 20 – 21.00, 20.09.20, 14-44 100+, «Пой без правил»
* По данным Mediascope, TV Index, 19-20.00, 13.09–27.09.20, 18-30 100+, «Золото Геленджика»
*ПоданнымMediascope, TV Index, 23-24.00, 18.10.20, 18-30 100+, Talk
*Сравнение: «Гусар» и «Кино на СТС»
Наша группа ВКонтакте: последние новости, конкурсы, живое общение.
Подписывайтесь!
«Яндекс» и СТС договорились о сотрудничестве
Фото: Shutterstock
Автор: Виктория Егорова «Яндекс» и канал СТС, входящий в одноименный медиахолдинг, который является частью «Национальной медиа группы», начинают сотрудничество по оригинальным проектам видеосервиса «Кинопоиск» (принадлежит «Яндексу», — прим. ред.). Об этом сообщили «Ведомостям» в компаниях.Стороны уже договорились о показе в эфире СТС всех эпизодов сериала «Пищеблок». Его телепремьера пройдет 30 августа. Компании не раскрыли сумму сделки, однако отметили, что они также ведут переговоры и по другим проектам.
«Пищеблок» — это сериал в жанре мистической фантастики. Он снят по одноименному роману Алексея Иванова. Его производитель — кинокомпания «Среда». В настоящий момент «Пищеблок» является самым популярным оригинальным сериалом «Кинопоиска», по словам представителя видеосервиса.
С момента премьеры в мае текущего года его посмотрело больше 1 млн смотрящих подписчиков «Яндекс.Плюс».
В эфире СТС и раньше выходили оригинальные сериалы онлайн-кинотеатров. Например, «Чики» от more.tv, «По колено» от IVI, «Нагиев на карантине» от Okko. Наибольшим успехом у зрителей этого вещателя пользовались «Чики». Соответствующая информация следует из данных исследовательской компании Mediascope.
Заместитель генерального директора по производству холдинга «СТС медиа» Максим Рыбаков заявил, что обогащать сетку СТС сериалами, которые стали громкими хитами в сети, вполне логично, так как это поможет привлечь новую аудиторию. «Платформы и телеканалы не конкурируют друг с другом, у них разные модели и паттерны смотрения, поэтому все находятся в ситуации win-win», — добавил он.
Благодаря эфиру федерального канала о «Пищеблоке» узнает еще больше зрителей, отметила директор по контенту медиасервисов «Яндекса» Ольга Филипук. Она выразила надежду на «дальнейшие партнерские инициативы с СТС».
До этого оригинальные проекты «Яндекса», а именно «Проект «Анна Николаевна», «Беспринципные», «Настя, соберись!», «Я не шучу!», выходили в эфире конкурента СТС — канала ТНТ, который входит в холдинг «Газпром-медиа».
«Мы продолжаем быть открытыми к новым партнерствам и с ТНТ», — рассказала Филипук, подчеркнув, что комедийные проекты «Кинопоиска», показанные в эфире этого канала, имели «довольно высокие рейтинги».
В данный момент оригинальные проекты платформ в большинстве случаев являются убыточными. Продажа прав партнерам позволяет компенсировать часть затрат на производство, сообщили топ-менеджеры крупных онлайн-кинотеатров.
Ранее сообщалось, что количество подписчиков «Яндекс Плюса» увеличилось с 4 млн во втором квартале 2020 года до 9 млн во втором квартале 2021-го — на 128%.
Светлаков рассказал, почему ушел с ТНТ
https://ria.ru/20210205/svetlakov-1596150095.html
Светлаков рассказал, почему ушел с ТНТ
Светлаков рассказал, почему ушел с ТНТ — РИА Новости, 05.
02.2021
Светлаков рассказал, почему ушел с ТНТ
Сергей Светлаков в проекте «Загугли звезду» издания Teleprogramma.pro ответил на самые популярные вопросы в Сети, которые интересуют его поклонников. В том… РИА Новости, 05.02.2021
2021-02-05T12:31
2021-02-05T12:31
2021-02-05T12:31
шоубиз
сергей светлаков
стс (телеканал)
звезды
знаменитости
шоу-бизнес
/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content
/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content
https://cdn25.img.ria.ru/images/100986/17/1009861769_0:0:2951:1660_1920x0_80_0_0_8a21a8ab14de5786d95471f5af692ea5.jpg
МОСКВА, 5 фев – РИА Новости. Сергей Светлаков в проекте «Загугли звезду» издания Teleprogramma.pro ответил на самые популярные вопросы в Сети, которые интересуют его поклонников. В том числе шоумена спросили, почему около двух лет назад он ушел с телеканала ТНТ и перешел на СТС.Телеведущий и актер ответил, что «не срасталось ничего общего», поскольку он хотел делать что-то сам, придумывать, продюсировать.
По его словам, на ТНТ такой возможности не было, а телеканал СТС ее предложил.В качестве примера он привел комедию «LOVE», которая на днях должна выйти в кино (Светлаков – один из ее создателей).»Так что это был не шаг назад или в неизвестность, это был шаг вперед, которому я очень благодарен», — признался Сергей Светлаков.Он также ответил и на другие вопросы поклонников. В частности, шоумена спросили, откуда у него шрам на шее. Актер рассказал, что это — напоминание о Свердловске (его родном городе) 90-х годов.По его словам, шрам на себе он уже не замечает, но иногда вспоминает, что у него был другой голос. «Если бы я заговорил сейчас им, вы бы меня не узнали», — признался артист.
https://ria.ru/20201117/svetlakov-1585093023.html
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
2021
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.
xn--p1ai/awards/
Новости
ru-RU
https://ria.ru/docs/about/copyright.html
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
https://cdn24.img.ria.ru/images/100986/17/1009861769_220:0:2951:2048_1920x0_80_0_0_5a4875623aeaafc3ba27c47c12bb177a.jpgРИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
РИА Новости
7 495 645-6601
ФГУП МИА «Россия сегодня»
https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/
сергей светлаков, стс (телеканал), звезды, знаменитости, шоу-бизнес
МОСКВА, 5 фев – РИА Новости. Сергей Светлаков в проекте «Загугли звезду» издания Teleprogramma.pro ответил на самые популярные вопросы в Сети, которые интересуют его поклонников.
В том числе шоумена спросили, почему около двух лет назад он ушел с телеканала ТНТ и перешел на СТС.Телеведущий и актер ответил, что «не срасталось ничего общего», поскольку он хотел делать что-то сам, придумывать, продюсировать. По его словам, на ТНТ такой возможности не было, а телеканал СТС ее предложил.
«Работать не только лицом, а мозгами, производить какие-то вещи, придумывать кино», — пояснил шоумен.
В качестве примера он привел комедию «LOVE», которая на днях должна выйти в кино (Светлаков – один из ее создателей).
«Так что это был не шаг назад или в неизвестность, это был шаг вперед, которому я очень благодарен», — признался Сергей Светлаков.
Он также ответил и на другие вопросы поклонников. В частности, шоумена спросили, откуда у него шрам на шее. Актер рассказал, что это — напоминание о Свердловске (его родном городе) 90-х годов.
«Все по классике: ночь, позднее возвращение с репетиции КВН и два силуэта с ножом, — вспоминает Светлаков. — Один держал, а второй раздевал.
Куртку сняли, а я брыкался. Классика жанра».
По его словам, шрам на себе он уже не замечает, но иногда вспоминает, что у него был другой голос. «Если бы я заговорил сейчас им, вы бы меня не узнали», — признался артист.
17 ноября 2020, 22:48КультураСергей Светлаков выписался из больницыРеклама на телевидении в Ишиме – Размещение рекламы на ТНТ и СТС – «Штурман-медиа»
ТРК «Штурман-медиа» предлагает эффективное продвижение вашего бренда, товаров и услуг на ишимском телевидении, а именно телеканалах «ТНТ» и «СТС».
Телевидение – самый популярный источник информации для большинства населения страны, что является главным преимуществом рекламы на ТВ. Высокий охват аудитории и скорость распространения информации позволяют рекламе на телевидении оставаться предпочитаемым методом продвижения в маркетинге. Телевидение по количеству и качеству аудитории активно конкурирует с интернетом, продолжая удерживать лидерство.
Региональное ТВ
У «ТНТ» и «СТС» высокие рейтинги, а также охват аудитории в Ишиме и Ишимском районе.
Реклама на телевидении в нашем регионе имеет самую высокую эффективность именно на этих телеканалах.
Телеканал «ТНТ» – лидер телевизионного рынка по аудитории от 14 до 44 лет, являющейся самой предпочтительной для рекламы на ТВ. Уникальный контент и огромная аудитория ставит его на первое место среди развлекательных каналов.
Телеканал «СТС» позиционирует себя, как канал для всей семьи. Лидер в России по охвату молодёжной и женской аудитории, по статистике, лучший телеканал для семейного просмотра.
На «ТНТ» и «СТС» представлены городские новости, новости Ишимского района, местные информационные программы. Что также существенно поднимает рейтинг этих телеканалов, увеличивает их охват среди местной аудитории.
Реклама в «Объективе»
Информационная программа «Объектив» представляет зрителям актуальные новости Ишима и Ишимского района. В передачу интегрируются эффективные партнерские и рекламные материалы, ориентированные преимущественно на местных жителей.
Кроме показов на телеканалах, каждый выпуск дублируется на сайте vishime.ru, видеохостинге «YouTube», социальных сетях «Вконтакте» и «Одноклассники». Количество просмотров в каждом из ресурсов имеют значительные показатели, которые постоянно растут. Возможна публикация видеороликов на сторонних площадках для достижения более широкого охвата.
Контакты
Рекламная служба: 8 (34551) 7-40-50, 5-15-90.
Редакция: 8 (34551) 5-15-91.
Колледж СТС — участники (актеры) проекта в 2021, трейлер и описание выпусков телешоу
Никита Шкоркин — участник проекта Колледж на канале СТС. Реалити о том, как российские школьники стараются изменить себя через обучение в школе советского образца, стартует в эфире 15 марта 2021 года.
Энрика Нирша — участница проекта Колледж на канале СТС. На момент участия в шоу девушке из Одинцово было 17 лет, но к выходу проекта Рика уже достигла совершеннолетия, она родилась 15 февраля 2003 года.
Антонио Манике — участник проекта Колледж на канале СТС. Антонио на момент участия в проекте исполнилось 15 лет, парень учится в школе, но не особо понимает, зачем ему образование и собственная работа, ведь родители могут во всем обеспечивать ребенка.
Мария Болотина — участница проекта Колледж на канале СТС. На момент участия в проекте Маше исполнилось 13 лет, она родилась 30 октября 2007 года, сейчас она живет и учится в Москве.
Анна Солодовник — участница телепроекта Колледж на канале СТС. Девушка родом из города Иркутск, она учится в школе.
Екатерина Кирия — участница телепроекта «Колледж» на канале СТС. Девушка родилась 24 мая 2006 года, на момент участия в шоу она живет и учится в городе Екатеринбурге.
Валерий Юрасов — участник телепроекта «Колледж» на канале СТС. Валера родился 31 декабря 2002, в данный момент он живет и учится в городе Сочи. Место его учебы — Финансово-юридический колледж (СФЮК).
Виктор Черепанов — участник телепроекта «Колледж» на канале СТС. Молодому человеку на момент участия в шоу исполнилось 16 лет, он родом из поселка Шкотово, расположенного в Приморском крае.
Вероника Дмитриева — участница телепроекта «Колледж» на канале СТС. Нике всего 15 лет, она живет в Москве и учится в столичной школе. О ее судьбе до проекта ничего не известно, ранее девушка не вела блога и не была популярной.
Даниэлла Боронина — участница телешоу «Колледж» на канале СТС. О жизни девушки из города Александрова, расположенного во Владимирской области, до проекта ничего не известно, так как ранее она не была публичной личностью.
Информация по переходу на цифровое эфирное телевещание
Центр телефонных обращений по единому номеру 081 принимает обращения граждан по вопросам подключения приставки, настройки телевизора для приема цифрового эфирного телевидения, а также по вопросам бесплатного круглогодичного проезда в пригородных поездах для льготных категорий граждан по телефону региональной горячей линии 246-80-81 в соответствии со следующим графиком:
- Понедельник четверг: 9:00 — 18:00;
- Пятница: 9:00 17:00;
- Суббота и воскресенье: выходные дни.
Завершение работы аналогового эфирного телевизионного вещания
В рамках проводимой федеральной целевой программы «Развитие телерадиовещания в Российской Федерации на 2009-2018 годы» по переходу на цифровое эфирное телевещание и в связи с прекращением аналогового цифрового телевизионного вещания с 01.01.2019 в Санкт‑Петербурге, а также в связи с изменениями основого сата (СМОТРИЦИФРУ.РФ), содержащего всю необходимую телезрителям информацию, предлагаем Вашему вниманию следующие информационные материалы:
Видеоролики о ЦЭТВ
Схема подключения ЦЭТВ
Настройка приема ЦЭТВ
Как выбрать приемное оборудование
Установка и настройка приставки
Виды антенн
Установка антенны
Подключи бабушку
Обновление ПО и премного оборудования
Сравнение аналогового ТВ и ЦЭТВ
Особенности приема ЦЭТВ
Стандарт DVB-T2
Схема подключения (вариант 2)
Как подключиться к ЦЭТВ
Бесплатное цифровое эфирное телевидение доступно каждому
Цифровое эфирное телевидение – новый этап развития телевидения во всем мире, который приходит на смену аналоговому телевещанию.
Аналоговое телевидение значительно уступает цифровому в качестве «картинки» и звука, и при этом требует большого частотного ресурса.
Для перевода сетей телерадиовещания на цифровые технологии в России проводится федеральная целевая программа «Развитие телерадиовещания в Российской Федерации на 2009-2018 годы». Результатом этой программы станет возможность приема обязательных общедоступных телеканалов без абонентской платы во всех населенных пунктах России.
Сегодня жители Санкт‑Петербурга и Ленинградской области уже могут смотреть цифровое эфирное телевидение без абонентской платы. Петербуржцам, а также телезрителям из Выборга, Гатчины и Тихвина, доступны в отличном качестве 20 телеканалов двух мультиплексов цифрового телевидения (пакеты РТРС-1 и РТРС-2). В остальных городах Ленобласти пока доступны 10 телеканалов первого мультиплекса – возможность приема второго появится предположительно в конце 2018-начале 2019 года.
В состав РТРС-1 входят: «Первый канал», «Россия 1», «Матч ТВ», «НТВ», «Петербург-5 канал», «Россия К», «Россия 24», «Карусель», «Общественное телевидение России», «ТВ Центр», а также три радиоканала: «Вести ФМ», «Маяк» и «Радио России».
В состав пакета РТРС-2: «СТС», «ТНТ», «РенТВ», «Пятница», «Спас», «Домашний», «Звезда», «ТВ3», «Мир», «МузТВ».
Для приема бесплатного цифрового эфирного телевидения необходимо приобрести антенну дециметрового диапазона (коллективную или индивидуальную, наружную или комнатную), а также убедиться, что телеприемник «умеет» принимать и транслировать сигнал в стандарте вещания DVB-T2, в котором транслируются бесплатные мультиплексы.
Практически любой телевизор, выпущенный после 2012 года, поддерживает стандарт вещания DVB-T2. С помощью функции «автопоиск» можно найти 10 или 20 цифровых общероссийских телеканалов.
К телевизорам, не поддерживающим стандарт DVB-T2, можно купить и подключить цифровую приставку, работающую в этом стандарте. Настроить «цифру» можно самостоятельно.
Дополнительная информация:
– по бесплатному телефону горячей линии: 8-800-220-2002;
– на официальном сайте смотрицифру.рф в разделе «Телезрителям»;
– по электронной почте: ckp_spb@rtrn.
ru, Центр консультационной поддержки петербургского филиала РТРС.
Для социальных сетей (VK, FB, IG, YouTube)
Зачем переходить на цифровое эфирное телевидение?
Цифровое эфирное телевидение – новый этап развития телевидения во всем мире, который приходит на смену аналоговому телевещанию. Для перехода на цифровые технологии в России проводится федеральная целевая программа «Развитие телерадиовещания в Российской Федерации на 2009-2018 годы». Петербуржцам, а также телезрителям из Выборга, Гатчины и Тихвина, доступны без абонентской платы в отличном качестве 20 телеканалов двух мультиплексов цифрового телевидения (пакеты РТРС-1 и РТРС-2). В остальных городах Ленобласти пока доступны 10 телеканалов первого мультиплекса – возможность приема второго появится предположительно в конце 2018-начале 2019 года.
Какие каналы доступны в стандарте вещания DVB-T2?
В состав РТРС-1 входят: «Первый канал», «Россия 1», «Матч ТВ», «НТВ», «Петербург-5 канал», «Россия К», «Россия 24», «Карусель», «Общественное телевидение России», «ТВ Центр», а также три радиоканала: «Вести ФМ», «Маяк» и «Радио России».
В состав пакета РТРС-2: «СТС», «ТНТ», «РенТВ», «Пятница», «Спас», «Домашний», «Звезда», «ТВ3», «Мир», «МузТВ».
Как подключить цифровое эфирное телевидение?
Бесплатные мультиплексы (пакеты РТРС-1 и РТРС-2) транслируются в стандарте вещания DVB-T2. Оборудование DVB-T не поддерживает стандарт DVB-T2.
Для приема бесплатного цифрового эфирного телевидения необходимо приобрести антенну дециметрового диапазона (коллективную или индивидуальную, наружную или комнатную).
Практически любой телевизор, выпущенный после 2012 года, поддерживает стандарт вещания DVB-T2. С помощью функции «автопоиск» можно найти 10 или 20 цифровых общероссийских телеканалов.
К телевизорам, не поддерживающим стандарт DVB-T2 можно подключить цифровую приставку, работающую в этом стандарте. Настроить «цифру» можно самостоятельно.
Дополнительная информация:
– по бесплатному телефону горячей линии: 8-800-220-2002;
– на официальном сайте смотрицифру.рф в разделе «Телезрителям».
Информация для Twitter / 1 сообщение
Цифровое эфирное телевидение – новый этап развития телевидения во всем мире. Для перехода на «цифру» в России проводится федеральная целевая программа «Развитие телерадиовещания в Российской Федерации на 2009-2018 годы». Вся информация на официальном сайте смотрицифру.рф в разделе «Телезрителям».
Информация для Twitter / 2 сообщение
Какие каналы входят в состав РТРС-1? «1 канал», «Россия1», «МатчТВ», «НТВ», «5канал», «РоссияК», «Россия24», «Карусель», «ОТР», «ТВЦентр».
Какие каналы входят в состав РТРС-2? «СТС», «ТНТ», «РенТВ», «Пятница», «Спас», «Домашний», «Звезда», «ТВ3», «Мир», «МузТВ».
смотрицифру.рф
Информация для Twitter / 3 сообщение
Как подключить цифровое эфирное телевидение?
1. Приобрести антенну дециметрового диапазона
2. Настроить телевизор со встроенным DVB-T2 – тюнером.
2. К телевизорам, не поддерживающим стандарт DVB-T2, приобрести и подключить цифровую приставку. смотрицифру.рф
Информационные материалы
Реализация ФЦП в Санкт‑Петербурге и Ленинградской области
Часто задаваемые вопросы о ЦЭТВ
Поддержка телезрителей
Ссылки на видеоролики о ЦЭТВ
Инфографика подключение ЦЭТВ
Инфографика Настройка приема ЦЭТВ
Инфографика Установка антенны
Схема подключения
Инфографика Виды антенн
Яндекс и ВК привлекают большую аудиторию, чем российское телевидение
Мелисса МакдональдВ сочетании Яндекс, доминирующая поисковая система в России, и ВКонтакте (ВК), ведущая российская социальная сеть, обеспечивают более сильную московскую аудиторию, чем ведущие российские федеральные телеканалы. По данным российской исследовательской компании TNS Russia, «Ведомости» привлекают российскую молодежь, а «Яндекс» — людей старшего возраста.
TNS проанализировала данные за сентябрь, чтобы сравнить аудиторию федерального российского телевидения в Москве с количеством уникальных российских пользователей Интернета, которые пользуются компьютерами или мобильными устройствами не реже одного раза в день. TNS произвела два набора данных: один для пользователей в возрасте от 12 до 34 лет, а другой — для пользователей в возрасте от 12 до 64 лет.
При анализе более молодой аудитории аудитория ВКонтакте немного выше, чем у Яндекса: 2,18 и 2,108 млн пользователей в день соответственно. Для сравнения, у ведущего новостного и ток-шоу «Первого канала» всего 1.
06 миллионов зрителей в их ежедневной аудитории. СТС и ТНТ, популярные станции ситкомов, сериалов и реалити-шоу, собирают только 1,25 и 0,82 миллиона зрителей соответственно.
Короче говоря, ведущие веб-сайты в России значительно превосходят по мощности ведущие телеканалы. Во-первых, россияне обращаются к социальным сетям и «Яндексу» для социального взаимодействия, покупок в Интернете и повседневных нужд. Во-вторых, как ранее писал Русский поисковый маркетинг, потребление интернет-СМИ стало более доступным и популярным.
Директор Mail.ru, которому принадлежит 100% ВК, Дмитрий Сергеев сказал «Ведомостям», что он также связывает успех веб-сайта с увеличением использования мобильных устройств. Благодаря мобильной доступности россиянам намного проще выходить в Интернет в течение дня. Сергеев отмечает, что многое можно отнести к мобильным приложениям социальных сетей, потому что пользователи будут входить в систему, занимаясь другими вещами, например, смотря телевизор.
Поэтому, если россияне не смотрят телевизор строго в Интернете, они часто заходят в свои социальные сети, пока смотрят телевизор дома.
Второй набор данных, который касается ежедневных пользователей россиян в возрасте от 12 до 64 лет, существенно меняет динамику. Яндекс ежедневно посещают 4,3 миллиона человек, что делает его самым популярным средством массовой информации в России, за ним следует «Первый канал», у которого 3,9 миллиона зрителей. Затем «Россия 1» заняла третье место с 3,4 млн зрителей, за ней следуют Google.ru (3,2 млн пользователей) и ВКонтакте (3,12 млн пользователей). Пожилое население меньше интересуется социальными аспектами и уделяет больше внимания решению своих повседневных потребностей и отслеживанию новостей.
Представитель «Яндекса» Ася Мелкумова пояснила, что у нас никогда не было цели обогнать телевидение и стать крупнейшим медиаканалом, скорее, это произошло естественным образом. Частично такая популярность объясняется стремлением Яндекса развивать сервисы Яндекса для бытовых, профессиональных и личных нужд пользователей.
Яндекс не является прямым конкурентом телеканалов, поскольку специализируется на контекстной рекламе, а не на видеорекламе. Хотя к настоящему моменту большинство рекламодателей знают, что с 2011 года Comscore оценивает Россию как страну номер один в Европе с наибольшим количеством пользователей Интернета, что делает ее желанным каналом для охвата целевой аудитории бизнеса.
Об авторе
Мелисса Макдональд
Мелисса в настоящее время работает менеджером по международному маркетингу в Яндекс. Она получила степень магистра в области русских и восточноевропейских исследований и имеет профессиональный опыт работы в России и Республике Молдова.
«СТС МЕДИА» ВЫКУПАЕТ КОНТЕНТ ЖЕЛТОГО, ЧЕРНО-БЕЛОГО У «ГАЗПРОМ-МЕДИА»
Холдинг «СТС Медиа» выкупает основную часть библиотеки Yellow, Black & White Studio у компании Solaris Promo Production Александра Карманова, сообщает «Коммерсантъ» по данным источников, близких к холдингу.
Solaris ранее закупал контент YBW в интересах компании «Газпром-медиа развлекательное телевидение» (RTV GPM), которая с января готовится к запуску канала Super.
Эта библиотека должна была стать основой его трансляции. Однако «СТС Медиа» хочет вернуть некоторые телевизионные франшизы, которые еще могут быть сырыми, такие как «Крыша мира» (Крыша Мира), «Светофор» (Светофор), «Дайош Молодёж» и другие.
Генеральный директор «Газпром-медиа» Дмитрий Чернышенко не возражает против такой продажи.По его словам, основное решение принято, сделка проводится, но за меньшие деньги, чем заплатил Solaris.
Производители называют эту сделку беспрецедентной для рынка. На протяжении многих лет YBW создавал контент для СТС, создавая ряд успешных ситкомов и шоу. СТС не забрал у них все права, а купил определенное количество показов. YBW была заинтересована в продаже «СТС Медиа» и годами ждала предложения. В конце концов, YBW получила лучшие предложения от GPM RTV и Solaris.
Несмотря на то, что «СТС Медиа» удалось вернуть библиотеку YBW, студия все же планирует продолжить работу с GPM RTV. Заканчивает сериал «Ивановы-Ивановы» для СТС, а затем снимает «Супер» и снимает премьеры к нему.
Источник, близкий к «СТС Медиа», сообщил, что библиотеку YBW еще можно монетизировать на разных каналах холдинга.
Источник, близкий к «Газпром-медиа», говорит, что изначально холдинг не планировал строить канал на библиотеке YBW, «Супер» создается как отдельный канал вещания.К запуску трансляции будут зарубежные проекты, фильмы и анимация — все это YBW, если покупать сейчас, плюс еще несколько проектов, права на которые по-прежнему принадлежат Студии. Кроме того, в «Супер» будет перенесена часть библиотеки ТНТ, в том числе несколько премьер, о которых сегодня канал планирует объявить рекламодателям. Сейчас YBW запускает 4 серии для «Супер», на 2018 год запланировано 10-12 премьер.
ИСТОЧНИК: SOSTAV
SEC.gov | Превышен порог скорости запросов
Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов.Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.
Укажите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, включив в него информацию о компании.
Чтобы узнать о передовых методах эффективной загрузки информации с SEC.gov, в том числе о последних документах EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, в том числе о передовых методах, которые делают загрузку данных более эффективной, и о SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу [email protected].
Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.
Код ссылки: 0.67fd733e.1632614598.6cfa752c
Дополнительная информация
Политика безопасности в Интернете
Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности.
В целях безопасности и обеспечения того, чтобы общедоступная услуга оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.
Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 U.S.C. §§ 1001 и 1030).
Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других лиц к контенту SEC.gov. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерные запросы.
Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.
Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период.Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.gov. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC.gov.
Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.
Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.
TEDxEkaterininskyGardenЖенщины | TED
Александра Глазкова
Кандидат экономических наук, заместитель генерального директора по организационному развитию ОАО «ОХК УРАЛХИМ».
Кандидат экономических наук, заместитель генерального директора по организационному развитию ОАО «ОХК УРАЛХИМ».
Член Общественного совета при Министерстве здравоохранения Российской Федерации и Координационного совета по делам молодежи в научной и образовательной сферах при Президенте Российской Федерации.Бывший вице-президент по персоналу и корпоративному маркетингу BIOCAD. Александра также является руководителем проекта «Женщины-новаторы». О ее трудовых победах красноречиво говорят многочисленные заслуги министерств за многолетний добросовестный труд и значительный вклад в развитие отрасли. Кроме того, в 2016, 2017 и 2018 годах входила в рейтинг «Топ-1000 менеджеров России» Ассоциации менеджеров и ИД «Коммерсантъ». Александра — победитель в номинации «HR-эксперт» независимой премии делового журнала «Эксперт Северо-Запад» «Эксперт года 2017».»Алина Герман
Дизайнер из Санкт-Петербурга, дизайнер по костюмам, арт-директор, основатель бренда ALINAGERMAN.
Алина — любимая артистка среди звезд шоу-бизнеса. Дизайнер из Санкт-Петербурга, дизайнер по костюмам, арт-директор, основатель бренда ALINAGERMAN. Алина — любимая артистка среди звезд шоу-бизнеса. Даже Леди Гага и Лана Дель Рей носили ее наряды. Кроме того, Алина разработала огромное количество образов для телешоу и театральных постановок, среди которых «Последний герой», «Танцы на ТНТ», «Холостяк» и многие другие шоу.Тем не менее, таланты Алины не ограничиваются дизайном: у нее есть собственное производство в Калифорнии, она проводит курсы, марафоны и благотворительные проекты. Среди импакт-проектов Алина занимается профориентацией трудных подростков и пошивом бюстгальтеров для женщин, перенесших ампутацию после рака груди.Анастасия Калинина
Соучредитель и исполнительный директор Re-State Foundation, который исследует и разрабатывает модели государственного управления. А за плечами у нее невероятный опыт работы в международных организациях.
Соучредитель и исполнительный директор Re-State Foundation, который исследует и разрабатывает модели государственного управления.
А за плечами у нее невероятный опыт работы в международных организациях. Долгое время Анастасия возглавляла Всемирный экономический форум по Евразии, где курировала региональную повестку. Ее карьера на ВЭФ началась с сообщества Global Shapes, одним из основателей которого стала Анастасия. Но еще до начала сотрудничества с ВЭФ Анастасия руководила многочисленными запусками международных социальных проектов, среди которых — платформа Women HIV, Coaching for Development в Непале, Palomar5 в Германии, многочисленные инициативы по поддержке молодых бизнесменов и проект в Санкт-Петербурге.Санкт-Петербург направлен на помощь женщинам и детям, оказавшимся в трудных жизненных ситуациях.Анастасия Трещевская
Психиатр, психотерапевт, врач-инфекционист в больнице COVID.
Психиатр, психотерапевт, врач-инфекционист в больнице COVID. Анастасия занимается лечением депрессий, панических атак, травматических стрессовых расстройств, а также реабилитацией пациентов после тяжелых кризисных ситуаций в их жизни.
И все это неразрывно связано с человеческими страхами.Но за последний год она стала настолько востребованной как специалист по лечению инфекционных заболеваний, что ей пришлось оставить свой бизнес, чтобы помогать близким к смерти людям в красной зоне. Каждый раз, когда она попадает в больницу, она сталкивается с реальным риском смерти, но она преодолевает этот страх во имя помощи другим. За свою работу Анастасия была награждена Почетной грамотой Президента за самоотверженность и высокий профессионализм при исполнении своих медицинских обязанностей.Ирина Чеснокова
Продюсер, актриса и ведущая YouTube-шоу «Бар в городе», владелица бара MEOW.
Продюсер, актриса и ведущая YouTube-шоу «Бар в городе», владелица бара MEOW. Бросив работу на канале ТНТ, Ирина сначала уехала на Кубу, в абсолютный карьерный мрак.Но проекты стали появляться сами по себе, один за другим. И неудивительно, что ее опыт говорит сам за себя. Помимо шоу «Бар в городе» Ирина ведет программу на Comedy Radio.
Кроме того, она работала главным редактором и креативным продюсером Comedy Battle на ТНТ, снялась в скетче «# Студенты» на СТС и шоу «Однажды в России». Короткометражный фильм «Портфолио» с Ириной в главной роли получил приз Гильдии кинокритиков фестиваля «Кинотавр» и главный приз III Российского фестиваля короткометражного кино «Короче».«Фильм также был показан на Каннском фестивале.Ирина Сосновая
Продюсер и шоураннер СТАРТА. Ее проект «Kept Women» — первое российское телешоу, полностью окупившееся благодаря выходу на онлайн-платформы.
Продюсер и шоураннер СТАРТА. Ее проект «Kept Women» — первое российское телешоу, которое полностью окупилось, будучи выпущенным на онлайн-платформах. В своих работах Ирина не боится затрагивать даже самые сложные социальные проблемы. Арт-сериалы «Хороший человек» и «Хватит!» рассказать о насилии в отношении женщин в нашем обществе.Работая над этими проектами, Ирина лично пообщалась с серийным маньяком, погрузившись в тему страха.Катя Пуданова
Менеджер по графическому дизайну, Wrike.
Менеджер по графическому дизайну, Wrike. Управление маркетинговыми стратегиями и ответственность за визуальные эффекты и дизайн бренда. Преподаватель графического дизайна Санкт-Петербургских академических школ фотографии. Арт-директор TEDxSaintPetersbur, TEDxДворцовая площадь, TEDxEkaterininskyGarden.Людмила Иванова
Создатель кафе Dreamers в Санкт-Петербурге.Санкт-Петербург, сомелье, создатель Школы вкусной жизни и курса «Как вырастить маленького гурмана» (единственный в России курс о том, как удовлетворить потребности ребенка в питании с учетом психологии, иммунологии и широкого взгляда на будущее). еда).
Создатель кафе «Мечтатели» в Санкт-Петербурге, сомелье, создатель Школы вкусной жизни и курса «Как вырастить маленького гурмана» (единственный в России курс о том, как удовлетворить потребности ребенка в питании с учетом психологии, иммунологии. и широкий взгляд на будущее в отношении продуктов питания).Начав свой путь с любимой Coffee Station на улице Некрасова, Людмила показала, что она не только сильный предприниматель, но и человек, который знает, как сделать больше, чем просто вести бизнес. Ей удалось создать сообщество поклонников, которые стали источником вдохновения для ее нового проекта — Dreamers. На своем пути Людмила пережила немало взлетов и падений. Но она смогла найти в себе качества, которые помогут ей встать и двигаться дальше, несмотря ни на что.Мария Грудина
Идеолог и основатель инновационного профилактического курорта «Первая линия.Санаторий »в Санкт-Петербурге.
Идеолог и основатель инновационного профилактического центра «Первая линия. Санаторий» в Санкт-Петербурге. Проект Марии получил премию «Женщина, которая имеет значение» в категории «Здоровье и медицина» (2020). Кроме того, Мария стала лауреатом престижной бизнес-премии РБК Санкт-Петербург в номинации «Предприниматель года», получила награду «Влиятельные женщины Санкт-Петербурга», Мария вошла в ТОП-50 известных людей Санкт-Петербурга. Петербург по Собаке.ru журнал. Мария ежегодно принимает участие в крупных форумах и конференциях, рассказывая об инновациях в сфере здорового образа жизни.Надежда Артес
Директор по развитию бизнеса международного сервиса онлайн-образования Яндекс.Практикум
Директор по развитию бизнеса международного сервиса онлайн-образования Яндекс.Практикум Однако она пришла в профессию, кардинально изменив свою жизнь. Весь 2019 год занималась консалтингом в развитии малых городов и сел, рассчитывала экономику регионов, разрабатывала стратегии их развития и искала драйверы туризма, успешно привлекая огромные средства на свои проекты.Саша Горбатенко
Руководитель проекта Veeam Software. Лидер глобальной программы «Женщины в зеленом», фасилитатор программы Google «Я замечательная».
Руководитель проекта Veeam Software. Лидер глобальной программы «Женщины в зеленом», фасилитатор программы Google «Я замечательная». Она работает над сложными ИТ-задачами с коллегами по всему миру уже 10 лет. Кроме того, она является ключевым лицом, помогающим любой международной знаменитости, прибывающей в Санкт-Петербург.Несмотря на такой загруженный график, Саша активно участвует в работе, посвященной правам женщин в сфере технологий. Среди прочего, она взяла на себя руководство глобальной организацией «Женщины в зеленом», где помогает женщинам в компании обрести уверенность в себе и развить свою карьеру. Кроме того, Саша является фасилитатором программы Google «Я замечательный». На этих семинарах она учит без колебаний признавать свои достижения и открыто говорить об успехах.Стася Галгашова
Главный операционный директор проекта Legionfarm.Руководитель стартап-сообществ Y Combinator в России и Кремниевой правде.
Главный операционный директор проекта Legionfarm. Руководитель стартап-сообществ Y Combinator в России и Кремниевой правде. В прошлом Стася была региональным менеджером Фонда развития интернет-инициатив (ФРИИ) и организатором стартап-конференций. Два года назад Стася шагнула в бесстрашие. Вместе с командой Legionfarm она отправилась в Долину на конференцию TechCrunch Disrupt, чтобы провести переговоры с издателями игр.В то время они случайно присоединились к Y Combinator. Несмотря на то, что сроки были пропущены, их заявление было принято. За короткий период времени команда Legionfarm стала инсайдерами отрасли с новой знакомой сетью.Юлия Максимович
маркетолог в сфере гостеприимства, директор по маркетингу в САФМАР Плаза
маркетолог в сфере гостеприимства, директор по маркетингу в САФМАР Плаза Юлия с детства была отличницей, поэтому следовать привычному плану стабильности и вдумчивости — ее кредо.Юлия следовала плану, начиная со школы. Она получила три высших образования в Российском экономическом университете им. Г.В. Плеханова (РЭУ), Высшей школе экономики (ВШЭ) и Британской школе дизайна, а также стала маркетологом в индустрии гостеприимства, заняв позицию директора по маркетингу в САФМАР Плаза. Ее день расписан по минутам: Юля бегает марафоны, ходит в театры, изучает индуизм и постоянно повышает квалификацию. Все по плану. Но неожиданно Юля увлеклась созданием спектаклей-экскурсий с элементами иммерсивного шоу «Затерянные».Это проект, который не входил в план, который казался иррациональным, но тот, к которому она была привлечена.Зарина Галич
Зарина Галич — жена офицера и мать двоих успешных людей.
Сын Зарины уже является подполковником в возрасте 35 лет, а ее дочь Ида Галич — известный блогер, телеведущая, фигурирующая в рейтинге Forbes «40 самых успешных российских знаменитостей до 40 лет». До недавнего времени Зарина работала старшей медсестрой в одном из московских медицинских учреждений.И она последовала за своим мужем в 18 ходов благодаря его работе.| Саркоплазматические белки | Креатинкиназа | СК | 43 059 | DL, LA, PD, VE, VQ, VS, YV | AQK, GHP, HKT, SVF | (Мора и др.2009a) |
| DR, EN, HP, PL, IM, IQ, VF | АЛН, ДПН, ГХП, ХГГ, КЛР, ВГС | (Мора и др., 2016) | ||||
| Энолаза | ENO | 47 100 | VY | LYK, RDG | (Мора и др.2011a) | |
| ИЛ, НП | ВНП | (Мора и др., 2015b) | ||||
| Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа | GAPDH | 37 624 | ВКонтакте | CLA | (Мора и др.2011a) | |
| AQ, II, RG | IIP, RGA | (Мора и др., 2015b) | ||||
| Лактатдегидрогеназа | LDH | 36 596 | LL | (Мора и др.2011a) | ||
| Фосфоглицерат мутаза | PGAM | 28 667 | ВРК | (Мора и др., 2011a) | ||
| Убиквитин-60S | UBQ | 14 728 | ДК, ИФ, КА, РТ, СД, ВК | DKE, GRT, IFA, KIQ, SDY, VKT | (Мора и др.2015c) | |
| Миоглобин | MYG | 17085 | FK, KH | ОСАГО | (Мора и Толдра, 2012 г.) | |
| DE, EA, GK, HK, QL, SE, SK | DAQ, VLN, YLE | (Мора и др.2016) | ||||
| Миофибриллярные белки | Привязка домена LIM 3 | LDB3 | 35 589 | AL, AQ, AY, GD, IS, LS, LT, MP, PA, QG, QL, QP, RL, SA, SQ, VV | APA, AQS, EAQ, GKD, NMP, SQG, SQL, STY, SVT, WGF | (Gallego et al.2014b) |
| Тяжелая цепь миозина | MHC | 223 150 | AD, AK, DQ, EQ, GK, KS, KT, IP, LQ | VNT | (Мора и др.2016) | |
| АН, АТ, ФД, QT, ТЛ, ТС, ВК | GKM, KIE, NAS, SRE, TVQ | (Мора и др., 2019) | ||||
| Легкая цепь миозина | MLC | 20 918 | AA, PA, AP | PAP | (Мора и др.2009b) | |
| AD, AL, EK, FK, IE, IK, IN, KV, LG, LR, NP, PE, RD, TN, VF, VK | APA, EEM, EKL, LKG, NAE, RVF, SGP, TNP, VLD | (Мора и др., 2011b) | ||||
| AI, SN | ELR | (Мора и др.2016) | ||||
| Миозенин | MYOZ | 31 667 | AG, SG, SQ | GAG, GPG | (Мора и др., 2015b) | |
| Титин (фрагменты) | TTN | 381 603 | КВ | (Мора и др.2009b) | ||
| AK, DE, EA, EE, EI, EP, GP, KA, KP, PA, PE, PK, PP, SV, VE, VK | AKK, APF, DAV, DEI, EAK, EPE, IEA, IKG, KAV, KDE, KER, MLK, PKE, PPI, PSP, PTP, RKK, STS, SVL, TPK, VKF | (Галлего и др., 2015 г.) | ||||
| Тропонин Т | TNT | 32 176 | АП, ИП, НК | (Мора и др.2010) | ||
| EI, IQ, VH | (Мора и др., 2016) |
Введение
ВведениеВ течение последнего десятилетия ряд исследований изменили классический взгляд на сердце как на постмитотический орган. Было продемонстрировано, что кардиомиоциты млекопитающих сохраняют способность к делению клеток на протяжении всей своей жизни [1,2], а эндогенные сердечные клетки-предшественники были идентифицированы во взрослом сердце [3,4,5].Стволовые клетки, экспрессирующие рецептор фактора роста c-Kit [3] и фактор транскрипции гомеодомена LIM Islet-1 [4,6], были предложены в качестве основных популяций сердечных предшественников в сердце. Вопрос о том, играют ли эти клетки роль в физиологическом обновлении кардиомиоцитов и вызванном стрессом восстановлении сердца, остается в значительной степени спорным, даже если экспериментальные исследования предполагают их активацию в результате ишемии-реперфузии, инфаркта миокарда, беременности, хронической сердечной недостаточности и диффузного острого повреждения миокарда [5,7, 8,9].Механизм, с помощью которого повреждение сердца модулирует активацию сердечных стволовых клеток, все еще плохо изучен, при этом несколько исследований предполагают роль высвобождаемых паракринных факторов кардиомиоцитами, изменения в метаболической среде, передачу сигналов экзосом, провоспалительные цитокины, а также рекрутирование костной ткани. -мезенхимальные стволовые клетки костного мозга [10]. Тем не менее, остается нерешенным вопрос, могут ли различные типы повреждений с различными эффектами на сердце все сойтись в общий ответ сердечных клеток-предшественников, опосредованный посредством общего активируемого стрессом сигнального пути [11,12].
Каспазы, семейство цистеинил-аспартат-специфичных протеаз, являются главными регуляторами апоптоза, и их активация считается обязательной для инициации и выполнения запрограммированной гибели клеток [13,14]. Однако недавние открытия предполагают ряд неапоптотических ролей каспаз, таких как самообновление и дифференцировка эмбриональных стволовых клеток [15], гемопоэтических стволовых клеток [16], а также дифференцировка скелетных мышц и нейронов [17,18]. Экспериментальная активация этих протеаз может быть использована для выяснения решений о судьбе клеток, помимо запрограммированной гибели клеток.
Мы описываем, что сублетальные апоптотические стимулы модулируют дифференцировку эмбриональных стволовых клеток (ESC) в кардиомиоциты посредством механизма, зависимого от каспазы. Наши результаты предполагают, что активация каспазы способствует дифференцировке кардиомиоцитов за счет активации c-Kit + / α-актинин low кардиальных клеток-предшественников. Это указывает на прямую связь между активацией каспазы и запуском кардиогенных программ в недифференцированных клетках, вызывая образование сердечных предшественников и кардиомиоцитов.
Материалы и методы Культура эмбриональных стволовых клеток и дифференциацияМышиные эмбриональные стволовые клетки (линия mESC CGR8) были любезно предоставлены профессором Ричардом Ли из Гарвардской медицинской школы [19]. MESC были стабильно трансфицированы кардиоспецифическим промотором тяжелой цепи α-миозина (α-MHC), меченным зеленым флуоресцентным белком (GFP), и, таким образом, дифференцировку кардиомиоцитов можно было легко оценить с помощью наблюдения за GFP [19]. Клетки размножали в минимальной необходимой среде Глазго (GMEM) (Invitrogen) с добавлением 1000 ед. / Мл фактора ингибирования лейкемии (LIF, ESGRO, Millipore), 1 мМ пирувата натрия, 1x заменитель незаменимой аминокислоты, 15% заменителя нокаутной сыворотки (Invitrogen ), 10 -4 M β-меркаптоэтанол и 1 x пенициллин-стрептомицин.Клетки содержали в чашках Петри, покрытых 0,1% желатином. Дифференцировку проводили в виде висящих капель в среде для дифференцировки (10% FBS без LIF), в которой эмбриоидные тельца (ЭТ) формировались за 2 дня (D0–2). Затем EB инкубировали в течение 2 дней (D2–4) в суспензии, а затем 17 дней (D5–21) на покрытых желатином покровных стеклах в 24-луночных культуральных планшетах.
Индукция апоптоза и ингибирование каспазыEB инкубировали с 1 нМ-10 мкМ стауроспорином (STS, Sigma, каталожный № S6942, восстановленный в ДМСО) или с ДМСО в качестве отрицательного контроля, добавленным в среду за 5 ч до измерения активации каспазы.Сублетальная доза STS, используемая во всех экспериментах, составляла 100 нМ. Для изучения эффектов ингибирования каспаз EB инкубировали с 10 мкМ ингибитора панкаспаз Q-VD-OPhydrate (Sigma, номер по каталогу SML0063). Все эксперименты проводили в трех повторностях.
Экстракция РНК и количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени (ОТ-ПЦР).Полную РНК экстрагировали с использованием набора для выделения РНК PicoPure, кат. № 12204–01 (Arcturus, Applied Biosystems). Концентрации и чистота РНК (A260 / 280) измеряли на спектрофотометре NanoDrop (ND-1000) (Nanodrop technologies, Wilmington, DE, USA).
Два микрограмма общей РНК подвергали обратной транскрипции с помощью High Capacity cDNA Reverse Transcription cat # 4368814 (Applied Biosystems) в общем объеме 20 мкл.
После обратной транскрипции 20 нг кДНК использовали для количественной ПЦР в реальном времени, выполняемой с помощью системы ПЦР в реальном времени 7500 Fast (Applied Biosystems Inc., Фостер-Сити, Калифорния, США) с использованием следующих анализов экспрессии генов TaqMan (Applied Biosystems). ) Isl1 мм 00517585_m1, комплект мм 004452212_m1, Myh6 мм00440359_m1, GATA4 Mm00484689_m1, Nkx 2.5 Mm00657783_ m1, Tnnt2 Mm012
реакций ПЦР проводили в 96-луночных планшетах MicroAmp Fast Optical, кат. № 4346906 (Applied Biosystems). Реагенты для амплификации (20 мкл) содержали 4 мкл образца в TaqMan Universal PCR Mastermix. Относительные уровни мРНК выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего кратного изменения относительно контроля. Данные представляют из трех независимых экспериментов.
Иммунофлуоресцентное окрашивание.Эмбриоидные тельца выращивали на покровных стеклах в 24-луночных планшетах (1 ЭБ на покровное стекло). Покровные стекла фиксировали в ледяном метаноле в течение 10 минут, блокировали 5% соответствующей сыворотки в течение одного часа с последующей инкубацией в течение ночи с первичными антителами: α-актинином (мышиные mAb, Sigma), c-kit (D13A2 Rabbit mAb, Cell Signaling), активная каспаза 3 (Rabbit pAb, Cell Signaling) и активная каспаза 9 (Rabbit pAb, Cell Signaling). Затем покровные стекла инкубировали с козьими антимышиными антителами, меченными Alexa Fluor 488, и вторичными козьими антителами против кроликов, меченными Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA).БЭ визуализировали в инвертированном конфокальном микроскопе (Olympus Optical Co. Ltd., Токио, Япония). Представлены данные трех независимых экспериментов. Глобальный анализ колокализации был выполнен путем расчета коэффициента перекрытия с использованием программного обеспечения ImageJ Colocalization Finder. Для количественного определения колокализующих пикселей мы рассчитали эффективные коэффициенты колокализации на основе локальных коэффициентов Мандерса M1 и M2, как описано ранее [20].
Непрерывная визуализация живых клетокПроспективная визуализация уровней экспрессии GFP была выполнена с использованием платформы системы непрерывной визуализации и анализа живых клеток CELL-IQ SLF (CM Technologies, Тампере, Финляндия).EB, растущие в 24-луночных чашках, стимулировали, как указано, и затем помещали в систему визуализации CELL-IQ. В течение периода визуализации условия поддерживались при 37 ° C, 5% CO 2 . Конфокальный z-стек флуоресценции всей лунки, состоящий из изображений 6×6, снимали для каждой лунки каждые 60 минут в течение общего времени записи 72 часа. Питательную среду меняли через день. Анализ отслеживания отдельных клеток выполняли в автономном режиме с использованием программного обеспечения CELL-IQ.
Обработка и окрашивание EdUClick-iT EdU Использовался набор для проточной цитометрии Alexa Fluor 647 (молекулярные зонды) № по кат. A10202 Life.После указанных обработок на EB воздействовали в течение 30 минут 10 мкМ EdU, промывали 3 раза ледяным PBS и затем фиксировали метанолом. Окрашивание EdU проводили в соответствии с инструкциями производителя.
Анализ расщепления каспазы in vitroНабор Caspase-Glo 3/7 (Promega, номер в каталоге G8090), Caspase-Glo 9 (Promega, номер в каталоге G8210), Caspase-Glo 8 (Promega, номер в каталоге G8200), флуорометрический анализ Caspase 10 (Abcam, каталожный номер ab65662), флуорометрический анализ каспазы 12 (Abcam, каталожный номер ab65664) использовали в соответствии с протоколами производителей для прямого измерения соответствующей активности каспазы.Рекомбинантная каспаза-3 (BD Bioscience, номер по каталогу 556471) была использована для измерения вариабельности этих анализов. Сигнал измеряли с помощью FLUOstar OPTIMA (BMG LABTECH GmbH, Германия).
Вестерн-блот. Общий белок экстрагировали с использованием буфера RIPA (Sigma, каталожный № R0278), содержащего коктейль ингибиторов протеаз (Complete Mini, Roche, каталожный № 04693124001). Равные количества белков денатурировали в загрузочном буфере, разделяли на полиакриламидных гелях Mini-PROTEAN TGX (Bio-Rad, каталожный № 456–9034) и электропереносили на PVDF-мембраны Immune-Blot (Bio-Rad, каталожный № 162–0177).Мембраны блокировали блокирующим раствором (Invitrogen, каталожный номер 000105) и инкубировали с первичными антителами против c-Kit (кроличьи моноклональные; Cell Signaling: 1: 1000, каталожный номер 3074S), а затем с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой (антикроличьи антитела). IgG; сигма: 1: 10000, кат. № A6667 или антимышиный IgG; сигма: 1: 1000, кат. № A4416, соответственно). Использовали реагент для определения вестерн-блоттинга Amersham ECL prime (GE Healthcare, номер по каталогу RPN2236), и хемилюминесцентный сигнал детектировали с помощью Bio-rad ChemiDoc XRS + (Bio-rad).Данные представляют из трех независимых экспериментов.
Потенциал митохондрийЭмбриоидные тельца предварительно загружали 1 мкМ тетраметилродаминэтила (TMRE, Molecular Probes) в течение 15 минут при 37 ° C, и изображения получали с помощью микроскопа, расположенного вверху справа (возбуждение 543 нм; эмиссия 500-600 нм). Измерения выражаются в процентах интенсивности флуоресценции по отношению к базовой флуоресценции. Максимальная деполяризация митохондрий была получена при использовании протонофора FCCP (карбонилцианид-п-трифторметоксифенилгидразон).
СтатистикаВсе данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. Независимый двухсторонний t-критерий использовался для расчета статистической значимости между двумя независимыми группами. p <0,05 и p <0,001 считались статистически значимыми и высокозначимыми соответственно. Статистический анализ проводился с помощью программного обеспечения SPSS версии 21.0.
Результаты: проапоптотические стимулы срублетала индуцируют активацию каспаз без значительного повреждения митохондрий или клеточных мембран в дифференцирующихся эмбриоидных телах EB).Стауроспорин (STS), ингибитор АТФ-конкурентной киназы, применялся в течение 5 часов в зависимости от дозы с последующим анализом активации каспаз и гибели клеток. При микромолярных концентрациях STS в живых культурах наблюдалась массивная проницаемость плазматической мембраны, согласно оценке с помощью ядерного контрастного окрашивания пропидиумом иодидом (PI) / Hoechst (> 40% PI-положительных клеток при 1 мкМ STS и> 65% PI-положительных клеток при 10 мкМ STS). (S1A Рис.). Напротив, воздействие 100 нМ STS привело к образованию менее 7% PI-положительных клеток (S1A, рис.), при этом все еще вызывая значительную активацию каспаз 3 и 9 (фиг. 1A, 1C, 1D и 1E). Активация каспазы 3 была дозозависимой, и 100 нМ STS индуцировали значительное 1,8-кратное увеличение по сравнению с контролем (S1B и S1C, фиг.). Каспаза 9 продемонстрировала аналогичный ответ (рис. 1С). Дальнейшую оптимизацию апоптотического стимула проводили анализом тетраметилродаминэтила (TMRE). TMRE представляет собой зонд, чувствительный к митохондриальному мембранному потенциалу (MMP), который накапливается в поляризованных интактных митохондриях [21].Таким образом, потеря сигнала TMRE является косвенным показателем проницаемости и деполяризации митохондриальной мембраны, что, в свою очередь, является признаком апоптотических клеток. Наши анализы продемонстрировали значительное снижение MMP при обработке клеток мкМ по сравнению с концентрациями нМ STS (рис. 1B). На основании этих данных в качестве целевой сублетальной концентрации было выбрано 100 нМ STS, поскольку он активировал каспазо-опосредованные пути и в то же время ограничивал количество апоптотических клеток. Также была активирована каспаза 8 (S1D рис.). Эта активация, скорее всего, опосредована STS-индуцированным рекрутированием Fas-ассоциированного белка с доменом смерти (FADD) [22]. Однако 100 нМ STS не активировали каспазу 10, которая, в свою очередь, процессируется каспазой 8, что приводит к расщеплению и активации каспазы 3. С другой стороны, концентрация STS в 1 мкМ, наиболее часто используемая для индукции апоптоза, приводит к значительной концентрации каспазы 10. активация (S1E рис.). Каспаза 12, которая, как известно, обрабатывает воспалительные цитокины, не активируется после обработки 100 нМ STS (данные не показаны).Ингибитор панкаспаз Q-VD (OMe) -OPH реверсировал STS-индуцированные активности каспаз 3, 8 и 9 до уровней ниже необработанного контроля (рис. 1A, 1C, S1C и S1D), что указывает на то, что каспазы являются естественно активируется и участвует в дифференцировке EB. 10.1371 / journal.pone.0120176.g001 Рис.(A и C) Ферментативная активность каспаз 3 и 9 в ответ на стимуляцию 1 мкМ STS, 100 нМ STS +/- Q-VD-OPH и 10 мкМ Q-VD-OPH в течение 5 часов.(B) Динамические изменения митохондриального потенциала, обнаруженные в EB, как оценивается по потере TMRE. (D и E) Активация каспазы 3 (активная иммунофлуоресценция каспазы 3) и каспазы 9 (активная иммунофлуоресценция каспазы 9) в ответ на 1 мкМ и 100 нМ STS. Полосы представляют собой 100 мкм.
Чтобы проверить влияние активации сублетальной каспазы на сердечную дифференцировку, мы использовали ЭСК мыши, которые были стабильно трансфицированы репортером GFP под контролем тяжелой цепи α-миозина (α -MHC) промотор.После дифференцировки в кардиомиоциты эти клетки экспрессируют GFP, который можно количественно определять и контролировать в фиксированных клетках, а также в живых культурах. EB культивировали в среде для дифференцировки в течение трех недель, затем инкубировали в течение 5 часов со 100 нМ STS, после чего следовали период восстановления от 24 часов до 7 дней. После 96-часового периода восстановления мы наблюдали увеличение доли клеток GFP + в обработанных STS EB (фиг. 2A). Обработка STS генерировала клетки GFP + вместе с бьющимися кластерами клеток, демонстрирующих низкую экспрессию GFP (рис.2Б). Предварительная инкубация EB с Q-VD-OPH предотвращала эффекты, вызванные STS (фиг. 2A и 2B). Эти результаты предполагают, что активация сублетальной каспазы способствует дифференцировке сердца. Чтобы дополнительно проверить эту гипотезу, мы непрерывно отслеживали уровни GFP в течение 3 дней после лечения STS, используя долгосрочную визуализацию живых клеток. В контрольных клетках уровни GFP оставались неизменными, тогда как обработка STS значительно повышала уровни GFP (фиг. 2C и 2D). Примечательно, что предварительная инкубация с Q-VD-OPH ингибировала этот эффект (рис.2C и 2D), предполагая, что STS способствует дифференцировке сердца каспазозависимым образом. Этот вывод был дополнительно подтвержден анализом экспрессии генов маркеров сердечной дифференцировки в ответ на лечение STS. Уровни экспрессии мРНК TroponinT (фиг. 2E), α-MHC (фиг. 2F) и Nkx 2.5 (фиг. 2G) значительно повышались в обработанных STS клетках через 3 и 7 дней, тогда как экспрессия Oct-4 (Рис. 2H), что является признаком плюрипотентности, было понижено. Примечательно, что все эти эффекты снова подавлялись предварительной обработкой Q-VD-OPH.В целом эти результаты показывают, что активация сублетальной каспазы способствует дифференцировке мЭСК в кардиомиоциты.
10.1371 / journal.pone.0120176.g002 Рис.(A) Уровни экспрессии GFP в EB, подвергнутых воздействию носителя или 100 нМ STS +/- Q-VD-OPH (верхние панели), а затем культивированы в течение дополнительных 96 часов (нижние панели). Сердечный промотор α-MHC управлял экспрессией GFP, и на дифференцировку указывало увеличение флуоресценции GFP по сравнению с контролем.(B) В GFP-отрицательных зонах EB после обработки STS наблюдались новые GFP-положительные клетки. (C) Перспективная долгосрочная визуализация экспрессии GFP в EB, подвергнутых воздействию контрольного носителя, 100 нМ STS или 100 нМ STS + Q-VD-OPH в течение 5 часов и экспрессия GFP отслеживалась в течение следующих 72 часов. (D) Уровень экспрессии GFP выражается как соотношение между уровнями GFP через 72 часа и уровнями GFP через 5 часов, как это отслеживается в отдельных, одиночных клетках. Относительные уровни экспрессии мРНК TnT (E), α-MHC (F), Nkx 2,5 (G) и Oct-4 (H) в EB, подвергнутых воздействию STS +/- Q-VD-OPH и собранных для анализа через 3 и 7 часов. дней.Стрелка указывает на отдельную отдельную клетку после 5-часового воздействия STS, за которым затем следят в течение 72 часов, * p <0,05 по сравнению с контролем, *** p <0,001 по сравнению с контролем, ### p <0,001 по сравнению с STS.
Другие и мы сообщали, что популяция сердечных клеток-предшественников, экспрессирующих c-Kit, реагирует на различные стрессовые стимулы, такие как ишемия-реперфузия, инфаркт миокарда и т. Д. острое диффузное поражение миокарда [5,8,23].Чтобы обратиться к этим результатам в контексте нашего исследования, EB в начале их дифференцировки обрабатывали в течение 5 часов 100 нМ STS, а затем культивировали в течение трех недель. Мы наблюдали значительное увеличение уровня c-Kit, предполагая, что активация сублетальной каспазы в mESC в недифференцированных условиях повышает экспрессию c-Kit (S2A фиг.).
Однако различия в уровнях α-актинина и тропонина Т не были значительными (данные не показаны), что позволяет предположить, что апоптотические стимулы могут предпочтительно способствовать дифференцировке сердечных предшественников и ранних кардиомиоцитов.
Когда EB через три недели после дифференцировки обрабатывали STS, положительные предшественники c-Kit не только пролиферировали, они также дифференцировались в клетки, экспрессирующие α-актинин (рис. 3). Интересно, что окрашивание c-Kit не локализовалось совместно со зрелыми сильно α-актинин-положительными клетками, что является аргументом против повторной экспрессии c-Kit в терминально дифференцированных кардиомиоцитах (рис. 3). Действительно, наблюдались две популяции α-актинин-положительных клеток: первая; клетки, которые сильно окрашены на α-актинин с удлиненной морфологией, напоминающие более дифференцированные кардиомиоциты (клетки α-актинина с высоким содержанием ) и, во-вторых,; более незрелые клетки с круглой морфологией и слабым окрашиванием α-актинином (α-актинин , низкий уровень клеток).Примечательно, что мы наблюдали, что вторая популяция с незрелыми клетками α-актинина low совместно локализовалась с клетками, экспрессирующими c-Kit, образуя кластеры рядом с более дифференцированными клетками α-actinin high (рис. 3). Это наблюдение подтверждает гипотезу о том, что кардиомиоциты были созданы de novo из ранее существовавших сердечных клеток-предшественников каспазозависимым образом. Гипотеза была дополнительно подтверждена тем фактом, что обработка STS увеличивала включение нуклеотидного аналога 5-этинил-2´-дезоксиуридина (EdU) в c-Kit + / α-actinin low клеток, не влияя на популяцию зрелых, α-актинин high клеток (рис.3 и S2B).
10.1371 / journal.pone.0120176.g003 Рис.Контрастное окрашивание для α-актинина и c-Kit в EB, подвергнутых воздействию 100 нМ STS в течение 5 часов и затем культивированных в течение дополнительных 7 дней. Область, обозначенная прямоугольником, указывает на кластеры c-Kit / α-актинин низко клеток, а стрелка указывает на α-актинин высокий кардиомиоцитов. Через 7 дней после указанного лечения на EB воздействовали в течение 30 минут с помощью EdU, а затем окрашивали на α-актинин (зеленый), c-Kit (красный) и EdU (синий).Голубые ядра указывают на пролиферирующие клетки. Полосы представляют собой 100 мкм.
Для дальнейшей идентификации клеточной популяции, которая отвечает на лечение STS, дифференцированные EB подвергали сублетальному протоколу стимуляции и окрашивали на α-актинин и активную каспазу 3 (рис. 4). В EB, подвергнутых контрольной обработке, малая доля клеток была положительно окрашена на активную каспазу 3. Как и ожидалось, обработка STS существенно увеличивала общее количество активных положительных клеток по каспазе 3, что в основном выявлялось в отрицательных по α-актинину клетках.Более зрелые кардиомиоциты с α-актинином с высоким содержанием редко окрашиваются одновременно на активную каспазу 3. Важно отметить, что клетки α-актинина с низким содержанием также были положительными по отношению к активной каспазе 3 (стрелки на рис. клетки-предшественники, но не в зрелых кардиомиоцитах. Мы также оценили экспрессию сердечных маркеров и маркеров плюрипотентности непосредственно после обработки STS и обнаружили, что уровни экспрессии тропонина T, α-MHC, Nkx 2.5 и Oct-4 существенно не изменились (данные не показаны), что доказывает возможность того, что определенная популяция клеток увеличилась из-за положительного селективного давления.Кроме того, гипертрофия ранее существовавших кардиомиоцитов вряд ли могла объяснить наблюдаемые эффекты, вызванные STS, поскольку лечение STS не влияло на специфические маркеры гипертрофии, β-MHC и предсердный натрийуретический пептид (ANP) (S3, рис.).
10.1371 / journal.pone.0120176.g004 Рис.(A) Контрастное окрашивание α-актинина (зеленый), активной каспазы 3 (красный) и ядер (Dapi, синий) в EB, подвергнутых воздействию контрольного носителя или 100 нМ STS +/- Q-VD-OPH в течение 5 часов, как указано.Стрелки указывают на α-актинин низкий уровень клеток, положительных по активной каспазе 3.
В целом, эти результаты согласуются с активацией каспазы как критическим стимулом для активации, пролиферации и дифференцировки сердечных клеток-предшественников.
Ингибирование каспаз подавляет дифференцировку сердцаДля дальнейшего исследования роли активации каспаз в образовании кардиомиоцитов из EB к дифференцирующимся культурам EB добавляли Q-VD-OPH. Культуры обрабатывали в течение 5, 24 или 48 часов, а уровни экспрессии маркеров предшественников и кардиомиоцитов определяли через 7 дней.Мы обнаружили, что уровни α-MHC (рис. 5A) и Nkx 2,5 (рис. 5B) были значительно снижены при остром лечении Q-VD-OPH (5 часов), в то время как постоянное лечение (24 часа и 48 часов) влияло только на α-MHC. выражение. Напротив, экспрессия Islet-1 (фиг. 5C) сильно повышалась при лечении острого Q-VD. Это согласуется с предыдущими сообщениями, показывающими, что ингибирование каспаз ведет к накоплению β-catenin, который в свою очередь, как было показано, регулирует эту популяцию клеток [24,25]. На экспрессию Islet1 не влияло хроническое лечение STS.С другой стороны, экспрессия c-Kit (фиг. 5D) оставалась неизменной после лечения острым Q-VD-OPH и имела тенденцию к снижению после продолжительного лечения. Маркер плюрипотентности Oct-4 также значительно увеличивался в присутствии ингибитора каспаз (рис. 5E), что согласуется с мощным снижением STS-индуцированной активности каспазы, посредством чего Q-VD (OMe) -OPH обращает STS- индуцировала активность каспазы до уровней ниже необработанного контроля (S1C рис.), предполагая роль каспазы в дифференцировке EB.Эти результаты предполагают, что активация каспазы действует на популяцию сердечных клеток-предшественников.
10.1371 / journal.pone.0120176.g005 Рис.Относительные уровни мРНК α-MHC (A), Nkx 2.5 (B), Isl1 (C), c-Kit (D) и Oct-4 (E) в EB, подвергнутых воздействию контрольного носителя или 10 мкМ Q-VD-OPH в течение указанного времени, а затем культивировали еще 7 дней. * p <0,05 по сравнению с контролем, ** p <0,01 по сравнению с контролем.
В этом исследовании мы описываем, что сублетальные проапоптотические стимулы, ведущие к активации каспаз, играют важную роль в дифференцировке эмбриональных стволовых клеток в направлении кардиомиоцитов. Наши данные показывают, что активация каспаз в основном влияет на судьбу сердечных клеток-предшественников, стимулируя самообновление и дифференцировку в кардиомиоциты, что схематично показано на рис. 6.
10.1371 / journal.pone.0120176.g006 Рис.Воздействие на клетки-предшественники сублетального апоптотического стресса приводит к активации каспазы ниже порога, необходимого для того, чтобы вызвать апоптотическую гибель клеток.Активация каспаз приводит к ответу сердечных клеток-предшественников, характеризующемуся размножением существующих клеток-предшественников и стимулированием кардиогенной дифференцировки.
Активность каспазы обычно связана с гибелью клеток. Однако появляется все больше доказательств того, что это семейство протеаз также опосредует решения о судьбе клеток, отличные от выживания или смерти клеток [11,12]. Напр., Дифференцировка сперматид Drosophila [26] жестко регулируется посредством убиквитин-опосредованной деградации белков, ингибирующих каспазу [27], гарантируя, что активность каспазы направляет дифференцировку, а не запускает программу апоптоза.В других системах временная активация каспазы 3 необходима для дифференцировки различных типов клеток, включая нервные клетки-предшественники, гематопоэтические клетки и скелетные миобласты [12,16,17,18,28]. В клетках mESC ингибирование каспаз 3 и 8 нарушает дифференцировку кардиомиоцитов [29,30], тогда как опосредованная доксициклином активация каспазы 3 стимулирует дифференцировку и в то же время снижает уровни экспрессии Nanog и Oct-4 [15]. Недавний отчет Акбари-Биргани и др. предполагает, что задержка высвобождения цитохрома с, образование апоптосом и активация каспазы 3 отличает апоптоз от дифференцировки в mESCs [31].Однако из этих исследований неизвестно, на какую популяцию клеток влияет активация или ингибирование каспаз.
Наши результаты предполагают, что активация каспаз специфически влияет на популяцию клеток c-Kit + / α-actinin low , стимулируя их пролиферацию и дифференцировку в кардиомиоциты. Согласно нашим данным, сублетальные стимулы STS приводят к увеличению активности каспазы 9 и исполнительной каспазы 3, не вызывая значительного снижения потенциала митохондриальной мембраны.Это согласуется с данными Мюррея и др. и их выводы относительно неапоптотической роли каспазы 9 в дифференцировке мышц [32]. Сублетальные стимулы апоптоза в основном воздействовали на популяцию более незрелых клеток, которые слабо окрашивались на α-актинин и имели круглую морфологию, локализованную вместе с экспрессией c-Kit (клетки c-Kit + / α-актинин low ). Эти клетки образовывали кластеры в непосредственной близости от клеток, которые сильно окрашивались на α-актинин и имели более зрелый фенотип (клетки α-актинина с высоким содержанием ).Сублетальные стимулы апоптоза также увеличивали включение EdU в клетки c-Kit + / α-actinin low , не влияя на популяцию зрелых клеток α-актинина high . Кроме того, после лечения STS мы также обнаружили значительное увеличение экспрессии GFP в отдельных клетках, которая находится под контролем промотора тяжелой цепи α-миозина (α-MHC), что предполагает повышенную дифференцировку ранних кардиомиоцитов. Бьющиеся кластеры клеток с низкой экспрессией GFP также наблюдались после воздействия STS, но не в необработанных контрольных клетках.Добавление ингибитора каспаз Q-VD-OPH блокировало эти эффекты.
Эти находки могут частично объяснить активацию эндогенных c-Kit + кардиальных клеток-предшественников и их дифференцировку в кардиомиоциты после диффузного острого повреждения миокарда, ранее описанного Ellison et al. [8]. В их исследовании c-Kit + кардиальные клетки-предшественники вступили в клеточный цикл с последующей фиксацией миоцитов, что дополнительно подтверждалось их совместной экспрессией Nkx 2.5 и α-актинин. Образовавшиеся кардиомиоциты экспрессировали саркомерные сократительные белки и в то же время поддерживали экспрессию генов, типичную для незрелых, еще не окончательно дифференцированных кардиомиоцитов. В других сообщениях популяция клеток c-Kit + временно повышалась после ишемического реперфузионного повреждения и инфаркта миокарда [5,23,33]. В другом исследовании Senyo et al. [2] авторы продемонстрировали репликацию ДНК в клетках, находящихся в пограничной зоне инфаркта. Поскольку эти клетки демонстрировали активированную тяжелую цепь миозина, репликация ДНК была интерпретирована как деление уже существующих постмитотических миоцитов.Однако в свете настоящего исследования это открытие может вместо этого отражать пролиферацию коммитированных клеток-предшественников. В целом это означает, что наши результаты соответствуют ранее представленным, и, кроме того, мы подчеркиваем возможные механизмы, с помощью которых стволовые клетки с потенциалом сердечной дифференцировки могут активироваться после травмы.
Наше наблюдение, что ингибирование каспаз предотвращает активацию кардиоспецифических маркеров, дополнительно подтверждает роль каспаз в дифференцировке сердца, подобно тому, что было описано для дифференцировки скелетных мышц [18].Также было высказано предположение, что апоптоз и дифференцировка мышц вызывают сходные цитоскелетные и фенотипические изменения и, таким образом, совместно активируют сходные молекулярные пути [18,32]. Механизм действия, с помощью которого активная каспаза 3 индуцирует сердечную дифференцировку, может быть через расщепление и активацию продифференцированных сигнальных каскадов митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) (MST1 / MKK6 / p38) [18]. Нижестоящие компоненты этих каскадов активируют факторы MEF2A и C, которые, как известно, важны для дифференцировки кардиомиоцитов [34].В работе Abdul-Ghani et al. [29], авт. Демонстрируют, что каспазы играют роль в сердечной дифференцировке, опосредованной их протеолитическим расщеплением β-catenin, что ведет к потере канонической активности передачи сигналов Wnt [25]. Более того, разборка и реорганизация актиновых волокон являются консервативными особенностями как апоптоза, так и дифференцировки миобластов. Наблюдение, что использование репрессора апоптоза снижает дифференцировку миобластов H9c2 [30], согласуется с нашим наблюдением, что ингибитор каспаз снижает дифференцировку кардиомиоцитов.Caspase 3-зависимая передача сигналов, участвующая в сердечной дифференцировке, также может быть инициирована активацией пути caspase 8. В нашем исследовании также была активирована каспаза 8, и эта активация, скорее всего, опосредована посредством STS-индуцированного рекрутирования FADD [22]. Однако 100 нМ STS не активировали каспазу 10, которая, в свою очередь, процессируется каспазой 8, что приводит к расщеплению и активации каспазы 3.
Система лигандов FAS / FAS активирует апоптоз во многих типах клеток, хотя Badorff et al.[35] показали, что специфическая для кардиомиоцитов передача сигналов рецептора FAS приводит к выживанию и гипертрофии вместо апоптотической гибели клеток [35]. В их исследовании лиганд FAS увеличивал синтез белка, размер клеток и саркомерную организацию в кардиомиоцитах новорожденных и приводил к усилению регуляции предсердного натрийуретического фактора (ANF), признака сердечной гипертрофии [35]. Мы не нашли никаких доказательств повышенной гипертрофии у БТ, леченных STS, и это могло быть отражением более мягких проапоптотических стимулов, используемых в нашем исследовании.
.