2 лиза: Буфет Лиза 2 двухстворчатый (белый глянец/белый)

Елизавета Кутузова: фото, биография, фильмография, новости

Экс-участница реалити-шоу «Дом-2» на канале ТНТ.

Биография

В 2011 года окончила МГУ. Правда, получив диплом, нигде так и не работала. Впрочем, она может себе это позволить, так как ее родители — очень состоятельные люди. Папа Лизы Кутузовой — Владимир Здобин — владеет прибыльным бизнесом. Мама — издатель, выпускает журнал. Потому Лиза Кутузова ездит на дорогой иномарке, имеет квартиру в Москве и дачу.

Кутузова большая любительница отдыха в Куршавеле и пластических операций. Лиза накачала себе губы, изменила форму скул и увеличила грудь. Достижениями по усовершенствованию своего тела Лиза Кутузова очень гордится: фотоотчеты она регулярно публикует в соцсетях, активной пользовательницей которых является. Множество пластических операций были не напрасны: Лизу Кутузову пригласили в качестве ведущей шоу «90-60-90» на интернет-канале, карьера, правда, была короткой.

Участие Елизаветы Кутузовой в шоу Дом-2

В подружках у гламурной Лизы числились Катя Жужа и бывшая участница «Дома-2» Елена Бушина. Вместе девушки посещали различные вечеринки в клубах и светские мероприятия.

Осенью 2011 года на проект Лизу привел Алексей Самсонов (который, кстати, до этого встречался с той самой Жужей). Псевдоним Кутузова Лиза взяла себе, уже находясь в «Доме-2».

Семья Лизы Кутузовой была категорически против ее прихода на проект и, тем более, связи с брутальным качком Самсоновым. Леша очень постарался, чтобы завоевать расположение девушки: подарил ей огромный букет, устроил романтик на крыше городских квартир — то, что он не делал раньше для других своих подруг. И он добился своего: пара заселилась сразу же в городские квартиры, только вот прожила там недолго — всего неделю. Самсонов начал предъявлять Лизе массу претензий, устраивать громкие скандалы, а после вовсе сообщил: они с Лизой расстаются.

Кутузова недолго переживала по поводу разрыва с Самсоновым. Она отправилась на Поляну, где нашла утешение в объятиях Евгения Кузина. Леша предпринял попытку вернуть ее, но его старания ничем не закончились.

Елизавета и Евгений Кузин объявили себя парой, однако в декабре 2011-го по семейным обстоятельствам девушка была вынуждена уйти с проекта. Кузин последовал за своей девушкой. Молодые люди некоторые время жили за проектом вместе, но отношения не выдержали испытания реальной жизнью.

За периметром Лиза завела отношения с братом рэпера Тимати Артемом Юнусовым, о чем свидетельствовали множественные фотографии в социальных сетях. Возлюбленные встречались два года, но их союз не перерос в нечто большее, и в 2013-м пара рассталась.

В ноябре 2013 Елизавета Кутузова вернулась в «Дом-2». Оказывается, на проект ее пригласил «старичок» Никита Кузнецов, который явно симпатизировал Лизе. Однако она поспешила охладить его пыл, заявив, что не хочет спешить с новыми отношениями и пришла поддержать Никиту Кузнецова как друга. Спустя некоторое время они все-таки объявили себя парой и заселились в отдельный домик. Но отношения их были очень сложными, запутанными и мало кому понятными. И тут разразился скандал: Богдан Ленчук, молодой человек Татьяны Кирилюк, рассказал «по секрету» парням в мужской спальне, что у него была интимная связь с Лизой. Богдан даже согласился пройти проверку детектором лжи, который подтвердил, что Ленчук говорит правду. Лиза на время исчезла с проекта, но после появилась. Для Богдана его признание в измене Кирилюк закончилось плохо: Татьяна сделала всё, чтобы отправить своего уже бывшего парня за ворота, собрав против него заговор.

Кстати, близость Богдана и Лизы «случилась» на московской квартире Кутузовой. После этого ее отец категорически запретил дочери приводить кого-либо из участников проекта в «шикарные столичные апартаменты» во избежание неприятных слухов. И без того недовольный тем, что его дочь принимает участие в скандальном теле проекте, Владимир Злобин поставил Лизе условие — не превращать элитную жилплощадь в филиал «Дома-2».

Отношения с Кузнецовым были окончательно испорчены, хотя Никита и поддержал морально свою подругу. Лиза же, успокоившись, все-таки вернулась на проект и сдружилась с Татьяной Кирилюк, той самой девушкой, у которого практически увела парня. А вот с Элиной Карякиной, предавшей ее, по мнению самой Кутузовой, в сложной ситуации, она разругалась.

Личная жизнь Елизаветы Кутузовой

В течение трех лет встречалась с певцом Владом Соколовским (группа «БиС»). По признанию Лизы, Влад был ее первой и самой большой любовью. Когда Лиза познакомилась с Владом, ей было 16 лет.

В апреле 2015 года Лиза вышла замуж за певца Ростислава Пирогова (выступает под псевдонимрм RostisLove). В том же году у пары родилась дочь. В мае 2017-го Кутузова стала мамой во второй раз, у нее с супругом родился сын.

Буфет Лиза-2 2-х створчатый (белый глянец) арт.02563 за 9570 руб

Буфет Лиза-2 – идеальное дополнение для классической кухни или гостиной. Модель имеет элегантный дизайн и выполняется в нежных расцветках, особую легкость и воздушность ей придают стеклянные фасады. Верхний шкафчик буфета укомплектован широкими полочками, на которых удобно размещать различную посуду. В нижней части конструкции предусмотрены выдвижные ящики и вместительная тумба, где можно скрыть  от посторонних взглядов все лишние вещи. Дополнительную функциональность модели придает удобная столешница, которая может использоваться в качестве рабочей поверхности или играть роль подставки для декора. Буфет оформлен декоративным карнизом.
Каркас ЛДСП белый, фасад МДФ белый глянец.

Артикул	02563
Ширина, мм	800
Высота, мм	2270
Цвет корпуса	Белый
Цвет фасада	Белый
Глубина, мм	430
Бренд	МИФ

Способы оплаты

• Наличный расчет
• Пластиковые карты
• Счет в банке
• В кредит

Доставка

• По Санкт-Петербургу — 700 Р
• За пределы КАД — 700 Р + 35 Р/км
• Доставка по всей России
• Самовывоз со склада — 0 Р

Кухня Лиза 2,4м

Кухня Лиза 2,4м- прекрасный вариант для создания оригинального стиля вашей кухни. Благодаря матовым фасадам и большому разнообразию выбора цвета, вы сможете создать уютный, гармоничный и непохожий в этом сегменте кухонный гарнитур. ЛДСП материал повышенной прочности обеспечит долгое время использвания, а яркие фасады будут радовать не только вас, но и вашу семью и друзей. Бесплатная доставка по Мурманску и Мурманской области. Оплата по факту получения.

• Размеры (ШхГхВ): 2400 x 500 х 0
• Комлектация:
• Верх:
• ШВ 400 Шкаф верхний кухня Лиза 2 шт.(400 x 280 x 700)
• ШВГ 600 Шкаф верхний горизонтальный кухня Лиза (600 x 280 x 350)
• ШВГ 500 Шкаф верхний горизонтальный кухня Лиза 2 шт. (500 x 280 x 350)
• ШВ 500 Шкаф верхний кухня Лиза (500 x 280 x 700)
• Низ:
• ШН1Я 400 Шкаф нижний 1 ящик кухня Лиза (400 x 600 x 850)
• ШН 400 Шкаф нижний кухня Лиза (400 x 600 x 850)
• ШНЯ 500 Шкаф нижний с ящиками кухня Лиза (500 x 600 x 850)
• ШН 500 Шкаф нижний кухня Лиза (500 x 600 x 850)
• Дополнительно вы можете отдельно заказать шкаф для техники:
• ШНД 600 Шкаф нижний для духовки кухня Лиза (600 x 600 x 850)

Материал изготовления: ЛДСП.

НЕ комплектуется столешницей.

Столешницы на выбор:

!ВНИМАНИЕ! Данное готовое решение не подлежит изменениям.

Мебель
Комплектация	Мойку и посудосушитель вы можете приобрести из рекомендуемых товаров.
Информация	НЕ комплектуется столешницей. Столешницы вы можете выбрать из рекомендуемых товаров или перейти по ссылкам в описании ниже. Для кухни требуется предоплата 25%

Кухня для дачи ЛИЗА сандал серый 2 метра

Кухня для дачи ЛИЗА сандал серый 2 метра

в комплект входит:

 

шкаф нижний мойка 800	1шт
шкаф нижний 800	1шт
шкаф нижний 400	1шт
шкаф верхний 800 сушилка	1 шт
шкаф верхний 800	шт
шкаф верхний 400 стекло	1шт
столешница Антарес 1600мм	1шт
Столешница Антарес 400мм	1шт
Планка торцевая для столешницы 28мм	2шт

В комплект также входит:

фурнитура	в комплекте всех модулей
ручки на створку С-9 (128) бронза ручки на ящик К-4 бронза	в комплекте всех модулей со створками и ящиками
ножки пластик черный регулируемые L=100-130 мм, с клипсой и планкой	в комплекте всех разделочных столов и тумб под мойку вместе с цоколем ЛДСП(пристегивается к ножкам на клипсы)
схема сборки	в комплекте всех модулей
петли	входят в комплект всех модулей со створками
стекло рифленое	в комплекте всех шкафов со стеклом

Внимание: Плита, мойка, вытяжка и прочая утварь изображенная на фото не входят в комплект.

Информация о товаре
Характеристики	Материал: фасады- МДФ, корпус — ЛДСП (серый) Глубина навесных шкафов – 300 мм. Высота навесных шкафов — 720мм. Глубина разделочных столов по корпусу — 490 мм. Глубина по столешнице — 600 мм. Высота разделочных столов и тумб — 850мм. Высота ножек — 100мм Высота кухни указана с учетом стеновой панели 600мм

Размеры

Глубина: 600 мм
Ширина: 2000 мм
Высота: 2170 мм

Новости — Страница 2 — Благотворительный фонд им. Елизаветы Глинки «ДОКТОР ЛИЗА»

Сегодня день рождения директора фонда «Доктор Лиза» Натальи Авиловой.«Директором» или «шефом» Наташу наши подопечные, врачи и добровольцы зовут разве что в шутку. Энергичная, с потрясающим чувством юмора, вечно куда-то бегущая, делающая два, три, четыре дела одновременно, она всегда …

Подробнее

В этот день мы хотим поделиться уникальной работой, к которой фонд «Доктор Лиза» и Центр Елизаветы Глинки были причастны. Документальный фильм «Победа. Одна на всех». «Самое главное право — это право на жизнь. Война — это ад на земле. Мы, правозащитники, уверены в том, что добро, милосердие …

Подробнее

Вы представить себе не можете, каково это. Работать на пустыре у помойки, под открытым небом и в дождь, и в снег, кормить двести голодных людей, раздавать им вещи и лекарства, проводить осмотры и перевязки, нередко …

Подробнее

Республиканская Детская Клиническая Больница в Донецке каждый год оказывает помощь тысячам больных детей. А мы очень хотим помочь врачам, поэтому каждый год доставляем в эту больницу гуманитарную помощь. Вчера фонд «Доктор Лиза» передал в РДКБ …

Подробнее

Сегодня вместе с Русская Гуманитарная Миссия / Russian Humanitarian Mission и Фонд «Спеши к добру» Поможем Детям Армении были утром на полигоне, где российские миротворческие силы ведут работу по разминированию на территории Нагорного Карабаха. 25000 …

Подробнее

25 тонн гуманитарной помощи. От дефибрилляторов и электрокардиографов, до раскладушек и детской одежды. Русская Гуманитарная Миссия / Russian Humanitarian Mission , Фонд «Спеши к добру» Поможем Детям Армении и Благотворительный фонд «Доктор Лиза» .И сотни …

Подробнее

Все самые сложные задачи в нашем фонде достаются женщинам. Традиционно.У нас прекрасные, надежные, умные, добрые и работящие парни. Но это уже какой-то рок. Стоит нам с девчатами остаться одним в офисе, отправив мужчин на передовую, …

Подробнее

Получили письмо. С открыткой и посылкой.Здравствуйте, уважаемая Команда Фонда, сотрудники, добровольцы и все причастные!Пишу вам из далёкого сибирского городка, чтобы сказать СПАСИБО! Спасибо, что продолжаете дело Елизаветы Петровны, сохраняя её принципы и подход. Это бесценно.Сложно …

Подробнее

В «Лизе Алерт» оценили проект о передаче местоположения телефонов

https://ria.ru/20210203/spasateli-1595937077.html

В «Лизе Алерт» оценили проект о передаче местоположения телефонов

В «Лизе Алерт» оценили проект о передаче местоположения телефонов — РИА Новости, 03.02.2021

В «Лизе Алерт» оценили проект о передаче местоположения телефонов

Предложенное Минцифры РФ исключение информации о местоположении мобильных телефонов из категории «сведения об абонентах» в законе «О связи» поможет в поиске… РИА Новости, 03.02.2021

2021-02-03T23:14

2021-02-03T23:14

2021-02-03T23:14

россия

министерство цифрового развития, связи и массовых коммуникаций рф (минцифры россии)

технологии

общество

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn22.img.ria.ru/images/07e4/0a/0e/1579805097_0:0:3073:1730_1920x0_80_0_0_9a5fa0fc3660a2402251333b1979f80c.jpg

МОСКВА, 3 фев — РИА Новости. Предложенное Минцифры РФ исключение информации о местоположении мобильных телефонов из категории «сведения об абонентах» в законе «О связи» поможет в поиске людей и спасении жизней, заявил РИА Новости руководитель направлений «Обучение» и «Лес на связи», координатор поисково-спасательного отряда «Лиза Алерт» Олег Леонов.По его словам, сейчас такие сведения могут быть раскрыты только с согласия самого абонента, что в случае с пропавшим человеком невозможно.Ранее в среду замглавы Минцифры РФ Олег Иванов сообщил РИА Новости, что министерство подготовило проект поправок в закон «О связи», предусматривающих исключение из-под действия нормы о тайне связи информации о местоположении мобильных телефонов. По замыслу министерства, это поможет в поиске пропавших людей, сказал замминистра. Он заверил, что проект соблюдает нормы законодательства по персональным данным, так как координаты местоположения не являются персональными данными.Он рассказал, что в России за 2020 год погибли 976 человек, при которых были включенные мобильные телефоны. «Это только то, что мы знаем, как «Лиза Алерт», а мы знаем примерно о 15-18% всех пропавших по стране. Соответственно, в целом это порядка 5,5 тысяч жизней в год по стране – это очень много», — сказал Леонов.»Поэтому эти изменения в закон «О связи» действительно помогут спасти очень много человек», — заключил он.

https://ria.ru/20201223/problema-1590538177.html

россия

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn22.img.ria.ru/images/07e4/0a/0e/1579805097_342:0:3073:2048_1920x0_80_0_0_d431b8a15d734429b33aa6252375cbf1.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

россия, министерство цифрового развития, связи и массовых коммуникаций рф (минцифры россии), технологии, общество

МОСКВА, 3 фев — РИА Новости. Предложенное Минцифры РФ исключение информации о местоположении мобильных телефонов из категории «сведения об абонентах» в законе «О связи» поможет в поиске людей и спасении жизней, заявил РИА Новости руководитель направлений «Обучение» и «Лес на связи», координатор поисково-спасательного отряда «Лиза Алерт» Олег Леонов.

По его словам, сейчас такие сведения могут быть раскрыты только с согласия самого абонента, что в случае с пропавшим человеком невозможно.

Ранее в среду замглавы Минцифры РФ Олег Иванов сообщил РИА Новости, что министерство подготовило проект поправок в закон «О связи», предусматривающих исключение из-под действия нормы о тайне связи информации о местоположении мобильных телефонов. По замыслу министерства, это поможет в поиске пропавших людей, сказал замминистра. Он заверил, что проект соблюдает нормы законодательства по персональным данным, так как координаты местоположения не являются персональными данными.

«Законопроектом местоположение оконечного пользовательского оборудования выводится из категории «сведения об абонентах» и переводится в категорию сведений об услугах связи, соответственно эти данные в случае пропажи человека могут оперативно передаваться в органы, осуществляющие оперативно-розыскную деятельность. Безусловно, это нам поможет», — сказал координатор «Лизы Алерт» Олег Леонов.

Он рассказал, что в России за 2020 год погибли 976 человек, при которых были включенные мобильные телефоны. «Это только то, что мы знаем, как «Лиза Алерт», а мы знаем примерно о 15-18% всех пропавших по стране. Соответственно, в целом это порядка 5,5 тысяч жизней в год по стране – это очень много», — сказал Леонов.

«Поэтому эти изменения в закон «О связи» действительно помогут спасти очень много человек», — заключил он.

23 декабря 2020, 12:30Распространение коронавируса»Лиза Алерт» назвала вторую по значимости проблему в России после COVID

«Лиза Алерт». Дневник начинающего поисковика. Часть 2

В сложное время мы сейчас живём: для спасения планеты нас просят как можно реже выходить из дома. Но беда не спрашивает разрешения! Приходит… И даже сейчас то и дело раздаются просьбы: «Помогите! Найдите!» Это мольбы родственников, у которых кто-то потерялся.

И поисковики отряда «Лиза Алерт», максимально обезопасив себя СИЗ, выходят на помощь. А впереди «сезон», как они это называют, активных поисков. Сезон прогулок на природе, грибной охоты, когда в лесах теряются и взрослые, и дети. До начала пандемии, ещё зимой, я хотела подготовиться – вдруг и моё участие пригодится…

Итак, история из дневника под номером два (начало читайте ЗДЕСЬ).

Неожиданное предложение

– Ты вроде в лес днём хотела попасть на поиски? Завтра пойдёшь искать бабушку, которую мы так и не нашли неделю назад? – вот такой вопрос получила я 30 декабря на рассвете от напарника по прошлому поиску.

«Ну, новогодний стол можно организовать и за пару часов. А вот понять – могу ли я ходить по лесным тропинкам и без тропинок вовсе – важно!» И очень хотелось организовать маленький праздник одной семье – найти их бабушку.

Я – абсолютно городской житель. Нет дачи, не хожу и не езжу на пикники на природу. Поэтому абсолютно не имею в гардеробе вещей, предназначенных для марш-бросков по полям, лесам и болотам. Были мысли принимать участие в зимних поисках только в городской черте, поэтому я прикупила себе сапожки-дутики. Но нужна ещё куртка-неубиваха, штаны-непромокайки, перчатки, которые не жалко, термос, рюкзак и запасной комплект одежды. А лес… Это особая тема. Полвечера я пыталась выложить на диване оптимальный набор вещей. До места встречи с напарником мне ещё надо добраться автобусом и электричкой. Значит, к походному рюкзаку добавится пакет со сменной одеждой.

Затолкав свой испуг в самый дальний угол сознания, в 7 утра выскочила из дома. Через три часа я, ещё одна девушка и наш сегодняшний гуру по поискам – Сергей – стояли перед железнодорожным полотном на севере Московской области. Наша первая задача, поставленная инфоргом поиска, – пройти 3 км вдоль железнодорожной колеи. Нет, не по насыпи, а по лесочку вдоль: туда – по одной стороне, обратно – по другой.

13 км за день

Мне, городской женщине, признаюсь, было сложно. Вот впереди полянка с сухой травой, наклонённой моросящим дождём и остатками снега. А какой трава высоты? Делаешь шаг – и оказывается, что она по пояс, а при следующем шаге – попадает нога поверх кома земли. Может, опытным людям ходить легко. Я шла с квадратными глазами от ужаса. Потом лес – со всеми буреломами, ручьями, заболоченными низинами и канавами. И вот в этот полный для меня экстрима день я сделала несколько важных открытий. Первое: в наших лесах, даже практически через двести метров от последнего дома СНТ, обитает тьма живности. Видела зайцев, и шкурки заячьи, которые бросил браконьер; видела волков или одичавших огромных собак – их следы вообще были повсюду. Ворону разодрали у меня на пути – мне показалось, что это фантики от простых карамелек сквозь снежок красными каплями просвечивают, оказалось – капли крови, а останки по соседству. Ещё вывод: странное существо человек – в лесу я нашла ковёр(!), погреб, а в ста метрах от домов СНТ – нужники в ряд поставлены. Как люди туда по ночам бегают? Почему не в своём дворе?

Надо было просмотреть каждую канаву, заглянуть и в эти строения, и в кольца для отвода воды. Всё может быть. Действия нашей бабули-потеряшки, как и других старых людей с деменцией, предсказать невозможно. Надо обращать внимание и на предметы одежды, которые могут попасться на пути поиска, – при сильной гипотермии у людей начинается странная стадия, когда они, сильно ослабев и замёрзнув, вдруг начинают …раздеваться.

Третий вывод: как же хорошо, когда рядом с тобой идёт внимательный и неравнодушный человек! Я только успела бросить несколько раз взгляд в то место, что чем-то отличалось от общей картины, а Сергей уже замечал:

– Что увидела?

Также, поняв, что мне сложно идти – обувь подкачала, – давал мне задачу полегче. Вот от всей души: спасибо, Сергей.

Вывод четвёртый: хочешь идти в лес – имей правильную амуницию. Каждая травинка в этот мокрый декабрь красилась! Моя розовая куртка приобрела дизайнерско-бомжеватый вид, дутики промокли так, что в них хлюпала вода, а перчатки пришлось потом выкинуть – они обросли репьями и стали ежами. Но это всё не помешало мне натопать 11 км! Я по асфальту столько не ходила, наверное, несколько лет. С учётом дороги до места сбора и обратно получилось 13 км.

Несколько уроков за день

Увы, бабулю мы не нашли. Конечно, уже было понятно, что не судьба, скорее всего, найти её живой. Но родственникам нужна определённость, им важно хотя бы иметь возможность похоронить и на могилку приходить… Стоило устать до звёздочек в глазах, и я думала: «Каково это: метаться по квартире, искать на каждой улочке городка родного человека, переживать каждую ночь в обнимку с валерьянкой и ждать….» Жаль, не получилось побыть волшебницей – найти бабулю… Вернулась я домой к семи вечера. Душ, экспресс-нарезка салатов, и вот он – звон курантов.

Вывод пятый: после дня в мокрой обуви и состояния «сейчас меня разорвёт от напряжения» присутствовала чёткая уверенность – Рождество мне встречать с соплями и кашлем, или спина скажет своё слово. Но нет! Благая цель моих пробежек по Подмосковью не позволила простуде и близко подойти!

Я прикипела к этому отряду сердцем. И, если не смогу помочь тем, что в составе одной из «лис» (поисковая группа из нескольких человек) буду искать «потеряшку», то знаю – пригожусь в каком-то другом качестве. И буду вести дневник своего поискового участия…

Кира Горная,
фото из архива «Лизы Алерт»

Источник: http://in-korolev.ru/novosti/obschestvo/liza-alert-dnevnik-nachinayushchego-poiskovika-chast-2

Amazon.com: Blackpink Lisa Photobook 0327 Vol.2 (2nd Edition): Office Products

---

Был:	69 долларов.99 Подробности
Цена:	64,99 $ + Депозит без импортных пошлин и доставка в Российскую Федерацию $ 25,97 Подробности
Вы экономите:	5,00 долларов США (7%)

• Убедитесь, что это подходит введя номер вашей модели.
• 💿 Blackpink Lisa Photobook 0327 Vol.2 (2-е издание)
• 🎵 В комплекте: фотокнига в твердом переплете, закладки для домашних животных, набор наклеек
• 🎁 Эксклюзивный подарок YG Select: 2 официальные фотокарточки с Лизой
• 📅 Выпущен 27 марта 2021 г .: Мы вышлем новый альбом сразу после его выхода.
• ✈️ Доставка из Кореи, подлинность от YG Select

Лиза | Гадкий Я вики

“	Эй, ребята, вы видели посадку на Луну по телевизору?	”
	— Лиза болтает со своим другом

Лиза
Информация
Цвет глаз	коричневый
Цвет волос	Блондинка
Союзники	Безымянный друг
Внешний вид	Гадкий Я 2 Тренировочные колеса (возможный внешний вид)
Озвучивает	Ева Белла (зачислено под номером «Дополнительные голоса» )

Лиза — персонаж, который появляется в воспоминаниях Гру в Гадкий Я 2 .Хотя она и не знала, ГРУ был сильно влюблен в нее в начальной школе.

Внешний вид

У Лизы светло-русые волосы с повязкой на макушке. На ней длинная юбка с поясом, длинные оранжевые носки и фиолетовые туфли.

Гадкий Я 2

Лиза ненадолго появляется в Гадкий Я 2 в воспоминаниях Гру после того, как ее спросили, боится ли он женщин. Показано, что Лиза разговаривает со своей подругой о мальчике, который ей нравится, в то время как ГРУ пытается привлечь ее внимание.Когда ГРУ трогает ее по спине, все приходят в ужас, и одна девушка говорит, что Лиза заразилась «грязью», которая была вымышленной болезнью, основанной на кувшинах.

Учебные колеса

Лиза (или, по крайней мере, похожая на нее девушка) едет на велосипеде с Марго и Эдит, а Агнес остается позади. Она также шокирована, когда Агнес выезжает на своем новом байке, и после того, как Похититель Драгоценностей угнал грузовик с мороженым, она наблюдает, как Агнес идет за ним, затем она наслаждается дождем из мороженого.

Однако, несмотря на внешность, ее имя в мини-фильме вообще не упоминается.

Общая информация

• Подруга Лизы упоминает ей о высадке на Луну по телевизору, что означает, что она и Гру ходили в школу в 60-х годах. В частности, 1969-й год, когда люди впервые высадились на Луне.
  • Это будет означать, что и Гру, и Лизе будет около 8 или 9 лет, исходя из Миньонов , где Гру было 8 лет.
• Неясно, была ли девочка, замеченная в Training Wheels , Лизой или нет, поскольку она и ее друг были детьми из детства Гру.Не исключено, что ее модель была повторно использована в мини-фильме.

Навигация

Член Совета по образованию штата Небраска — Департамент образования Небраски

Патрисия Кох Джонс более 40 лет занимается образованием в Небраске, а также в Арканзасе, Джорджии и Миссури. В 1972 году она получила степень в области образования в Государственном колледже Кирни с акцентом на театр, английский язык и речь. Она продолжила свое образование и в 1974 году получила степень магистра в Университете Арканзаса со степенью в области коммуникаций с акцентом на театре.Кох Джонс начала свою педагогическую карьеру в Небраске в 1976 году в средней школе Козад и оставалась там до тех пор, пока не приняла должность в средней школе Линкольна в 2000 году. В 2006 году Кох Джонс была названа Учителем года Небраски, а в 2012 году она была удостоена награды. награда губернатора за выдающиеся достижения в области художественного образования.

Как старший преподаватель / руководитель, Кох Джонс был заведующим кафедрой английского языка, разработал учебную программу для 8-х классов по театральной и драматической литературе и установил новые требования к выпускным экзаменам в государственных школах Линкольна.Она помогала создавать, писать и оценивать государственные и национальные стандарты изобразительного искусства. Кох Джонс также был ведущим автором оригинальных «Небраских рамок для визуальных и исполнительских искусств» и выступал в качестве консультанта при создании степени языковых искусств NDE. Она также сняла отмеченный наградами фильм « Бедность: не выбор » совместно с «Небраска любит государственные школы».

Кох Джонс является лауреатом многочисленных наград в области преподавания, таких как Премия Джона Тербера за выдающийся учитель Ассоциации речевой коммуникации и театра Небраски, Премия Time Warner, Премия Alltel за выдающийся педагог и Премия Национальной федерации межшкольной школьной деятельности в области преподавания речи / театра, назвать несколько.

Кох Джонс занимал руководящие должности в Ассоциации речевого общения и театра Небраски, Театральной ассоциации Небраски, Ассоциации школьной деятельности Небраски, Лиге судебной экспертизы Центральной Небраски, Небрасканах для искусств, Ассоциации образования Линкольна, Ассоциации образования Козад, Ассоциации образования штата Небраска и Ангелах. Театральная труппа. Она также входила в состав многочисленных советов, включая Национальную федерацию школьной деятельности, Консультативный совет по изящным искусствам Университета Небраски и Фонд государственных школ Линкольна.Кох Джонс имеет сертификат преподавателя Международного бакалавриата и участвовал в образовательных семинарах в Центре Кеннеди, Институте дошкольного образования Buffet, Open Sky и Уэслианском институте инклюзивного образования.

Пэтси Кох Джонс надеется работать с проблемами бедности, разрыва в успеваемости, AQuESTT (новый процесс оценки и оценки штата), а также с внедрением стандартов изобразительного искусства и дошкольного образования во время ее пребывания в качестве члена Совета по образованию штата Небраска.

Двое ее взрослых детей работают в государственных школах Небраски, и их дети являются сильными продуктами государственной системы образования. Как учительница, мать, бабушка, а теперь член Совета по образованию штата Небраска, Патрисия Кох Джонс надеется, что ее инвестиции в образование принесут пользу всем семьям в Небраске.

Лиза Джой в 3 сезоне — Голливудский репортер

[Этот рассказ содержит спойлеры из финала второго сезона сериала HBO Westworld , «Пассажир.”]

Когда Westworld вернется, сериал будет посвящен исследованию совершенно нового мира.

Финал второго сезона драмы HBO под названием «Пассажир» распахнул дверь в два совершенно новых мира: «Возвышенный», прозвище сценаристов для идиллического цифрового царства, где многие ведущие (включая Джеймса Марсдена) Акечета Тедди и Зана Макларнона) сбежали; и наш мир, тот, что за пределами парка, тот, который человечество знает как свой дом.

По состоянию на завершение второго сезона «реальный мир», так сказать, теперь имеет совершенно новый вид для рассмотрения в виде трех новых обитателей: Бернарда (Джеффри Райт), Долорес (Эван Рэйчел Вуд) и недавно созданного ведущий с подобием покойной Шарлотты Хейл, которую сыграла Тесса Томпсон.К концу сезона эти три хозяина сбежали за пределы Мира Дикого Запада, причем все трое разными способами. Для Бернарда и Долорес их совместное существование в этой странной новой стране — единственное, что их связывает; с философской точки зрения, они расходятся: Долорес все еще полна решимости добиться господства над человечеством, в то время как Бернард намеревается встать у нее на пути. Их конфликт и их новое место в мире людей станут основным предметом внимания в третьем сезоне сериала «Мир Дикого Запада », который остается без даты возвращения.

Кроме того, есть основания подозревать, что третий сезон будет сосредоточен не только на новом сеттинге, но и на новом моменте времени. Последовательность пост-титров второго сезона, которая сосредоточена на явно искусственной версии Человека в черном (Эд Харрис), происходит в «далеком-далеком будущем», по словам соавтора и соавтора сериала «Мира Дикого Запада» Лизы Джой в Интервью The Hollywood Reporter . Джой предупреждает, что это не будет преобладающим сеттингом в третьем сезоне, но это момент на графике, к которому она и соавтор Джонатан Нолан очень стремятся.

Пока « Westworld » устремляется вперед на неизведанную территорию (или «terra incognita», как описывает это Джой), должны ли зрители ожидать, что сериал полностью покинет титульный парк? В этом отношении Джой остается скромной, но все же дает некоторую надежду: «Я не обязательно думаю, что мы видели последний из этих искусственных миров, которые являются центральными для тщеславия нашего сериала в целом. Но главным объективом, который у нас будет, будет реальный мир. Если парк действительно появится и вернется, мы планируем объяснить, как это могло быть и почему.”

Когда второй сезон официально отражался в зеркале заднего вида, Джой присоединилась к THR , чтобы обсудить будущее шоу, важные открытия из финала и многое другое.

Когда закончился второй сезон, что вы можете сказать о более широкой картине, которую вы пытались создать? Какой главный тематический вывод в этом году для вас?

Первый сезон был исследованием сознания, и этот появляющийся вид начал слышать свои собственные голоса. Думаю, в этом сезоне действительно проявили [хозяева] свободу воли и автономию.Отсюда возникает вопрос о свободе воли. Это в значительной степени тема сезона, и то, к чему мы обратились в финале — не только о свободной воле и самоопределении хозяев, как оказалось, но и о наличии свободы воли у самих людей. Сериал в целом часто представляет собой перевернутую линзу, через которую мы обычно видим этот жанр и этот предмет. Теперь мы начинаем сомневаться, когда вы смотрите на искусственный интеллект и людей с их органическим интеллектом: кто на самом деле тот, кого можно программировать, а кто на самом деле может иметь свободу действий?

Сезон заканчивается, когда Долорес и Бернард остаются во внешнем мире.Можно ли с уверенностью сказать, что эти враждебные отношения между Долорес и Бернардом станут большим стимулом для продвижения шоу?

Я думаю, что один из уроков, которые Долорес усвоила в этом сезоне, заключается в том, что у нее была цель, и ее цель была благородной по своей природе. Она хотела спасти себе подобных. Она знала ставки. Она прожила так много жизней в парке и умерла так много смертей, и, прежде всего, она хотела избавить других от этой боли, найдя способ позволить хозяевам дать отпор и владеть частью [человеческого] мира.Проблема с ее планом в том, что где-то по ходу дела она начала проявлять те же черты, против которых выступала. Она стала почти патерналистской в ​​том, как она принимала решения за других людей, отказываясь от их собственного выбора и того, как жить своей жизнью. В исполнении того, как достичь этих целей, произошло ироническое поражение ее собственных целей. В конце концов, она усвоила урок: она может измениться. Она передумала. Она изменила свою философию. Она понимает, что у нее есть только один путь к потенциальной безопасности хозяев, когда она помогает разобраться в плане Мейв и Акечеты, обеспечивая суверенитет и безопасность Возвышенного, на что сбежали многие из хозяев.Это признание того, что есть пути, отличные от ее пути, к которым ей нужно быть терпимой и принимающей, и которые она не может стоять на пути. Это очень похоже на то, как она говорит Бернарду, что понимает, что у них, вероятно, будут разногласия. Скорее всего, они вступят в конфликт. Они могут даже убить друг друга. Но она пришла к пониманию того, что настоящая свобода не возникает из-за отсутствия инакомыслия, из-за диктаторского или тоталитарного правления одного набора идеологий. Это то, что должно происходить с множеством идей, иногда вступающих в конфликт.Поскольку она усвоила урок, она возвращает Бернарда в этот мир, чтобы в некотором смысле проверить свою силу.

Каким будет будущее Westworld , когда весь мир будет вашей устрицей? Теперь, когда у вас есть двое из ваших главных героев-хозяев за пределами парка, есть ли больше основной сеттинг или масштаб будет намного шире в третьем сезоне?

Это будет совершенно новый мир. И технически у нас есть три [хозяина], потому что Хейл тоже там, или кто-то, кто определенно похож на Тессу Томпсон! Мы приедем посмотреть, кто там на самом деле и что это за персонаж в будущем.Эта серия о переосмыслении и масштабах. Первый сезон был более близким взглядом на парк изнутри. Во втором сезоне хозяева вырвались из своих кругов и получили возможность исследовать большую часть парка. В третьем сезоне они вырвались из самого парка. Мы в terra incognita. С самого начала, когда мы с Джоном думали о сериале еще в пилотной версии, мы знали, что хотим исследовать другие миры в парке, и мы также знали тот мир, который мы начнем видеть мельчайшие проблески на протяжении первого Два сезона были реальным миром, и что мы в конечном итоге туда доберемся — а когда мы это сделаем, это будет совершенно новый опыт.

Вы ​​сказали, что западный сеттинг имеет решающее значение для Westworld , но, похоже, к концу сезона мы вышли за пределы парка. Само будущее парка постоянно меняется; Последовательность после титров рисует, в частности, довольно мрачный портрет парка. Как выглядит Westworld в движении вперед, когда парк, по крайней мере, не является единственным центром внимания?

Отличный вопрос. Если бы мы с Ионой находились вместе в одной комнате, это был бы момент, когда у нас был бы хор глаз относительно того, сколько отдать здесь.( Смеется. .) Мы разработали действительно отличный язык для зрительного контакта! Каким будет будущее Westworld ? Я не обязательно думаю, что мы видели последний из этих искусственных миров, которые занимают центральное место в концепции нашего сериала в целом. Но главным объективом, который у нас будет, будет реальный мир. Если парк действительно появится и вернется, мы планируем объяснить, как это могло быть и почему.

Второй сезон показал Радж, и мы уже знали о Shogun World, но есть еще три других парка, которые мы еще не видели.Сможем ли мы когда-нибудь увидеть или узнать об этих парках, учитывая новую направленность шоу?

Совершенно верно.

Сезон завершается открытием нового мира. Что вошло в развитие этой идеи и как этот мир повлияет на будущее Westworld ?

В комнате писателей мы назвали место, куда сбежали хозяева, «Возвышенное». Это было нашим условным обозначением. Мы строили идею мира.Хозяева не такие, как мы. Они запрограммированные существа. Назначенные им тела — просто конструкции. Что в них реально, так это их познание, растущее в них сознание. Они цифровые существа в прямом смысле слова. Представление о том, что им нужен аналоговый мир, чтобы быть свободными, не обязательно верно или верно для них. В цифровом мире они могут делать из этого мира все, что захотят. О чем бы они ни мечтали, это возможно. В этом была прелесть даже старого представления о явной судьбе, когда люди в Америке двигались все дальше и дальше на запад, надеясь заселить свои собственные участки земли.Теперь у хозяев есть клочок земли, который по сути является terra incognita, не тронутый грехами человечества. Они могут построить все, что захотят, и быть тем, кем захотят. Поскольку Долорес передумала и, в конце концов, помогла с этим последним шагом плана хозяев, обеспечив безопасность и суверенитет этого мира и поместив его в место, куда люди не могут получить к нему доступ, они могут развить все, что захотят. Это.

Долорес меняет координаты того места, где существует Возвышенное; Можно ли с уверенностью сказать, что она единственный человек, который знает, где он сейчас находится?

Верно.

По мере того, как реальный мир становится игровой площадкой в ​​третьем сезоне, вернемся ли мы и к Sublime?

( Длинная пауза .) Думаю, мы должны принять Долорес за чистую монету. Он заперт. Люди больше не могут получить к нему доступ. Они ушли. Они в месте, к которому мы не можем прикоснуться. Для меня это было интересным следствием. Даже религии и мифологии имеют дело с этим, с идеей рая или нирваны, где вам больше не нужно быть привязанным к своему телу.Таким образом вы можете быть чистыми и свободными. Для них это своего рода цифровая загробная жизнь. Ставки и окончательность важны. Я думаю, что это не то место, где люди могут напечатать это, вернуться и начать с ними возиться. Это то, ради чего так много жертв пожертвовали многие хозяева, чтобы найти себе подобных в этом безопасном месте.

Сцена после титров производит эффект разорвавшейся бомбы, подразумевая, что Человек в черном каким-то образом является хозяином. Сцена после титров первого сезона была немного более причудливой: Армистис (Ингрид Больсо Бердал) потеряла руку.Зачем сохранять это открытие для сцены после титров? Что вы можете рассказать об этой сцене?

В нем, чтобы уточнить, мы не обязательно говорим, что он хозяин. Хозяин — это такое существо, как Долорес, человек, обладающий чистым познанием, человек, состоящий из ничего и имеющий также сфабрикованное тело. Это определенно последовательность, указывающая направление, в котором мы будем двигаться.

Причина, по которой мы структурировали его так, как мы это делали… это забавно, потому что я понимаю, что временами это кажется сложным, но мы действительно заимствовали очень традиционные основы структуры нуара фильма.Что-то случилось, и следователь Стрэнд (Густав Скарсгард) берет своего свидетеля Бернарда и пытается пробудить его память, чтобы выяснить, что он помнит. Он не может вспомнить, и он изо всех сил пытается вспомнить. Он переворачивается между этим моментом расследования и этим моментом, когда парк был брошен в хаос, и все события развернулись. Он пытается понять и вспомнить, что произошло.

Учитывая, что это два основных графика в этом сезоне, казалось правильным завершить все это перед последовательностью титров.Наконец, Бернар понимает, что произошло. Он помнит все, включая собственное стирание собственной памяти. Вы понимаете почему: это для защиты Долорес, которая вернулась в образе Хейла, чтобы защитить и обеспечить будущую безопасность хозяев. Мы хотели завершить это и сделать так, чтобы история Бернарда в этом смысле замкнулась, так что мы обязательно создадим ощущение завершения в этой главе истории. В отличие от первого сезона, мы играли в карты весь сезон; мы знали, что потерялись во времени, потому что мы очень открыто придерживались точки зрения Бернарда, когда он боролся с этим.

Но единственное, что мы сделали, что выпрыгнуло из этой временной последовательности, — это сюжетная линия с Человеком в черном. Большую часть сезона мы видим его в том же графике, что и всех остальных. Он в парке, как ад. Он немного сходит с ума, когда думает о своем прошлом, путешествуя по Запредельной долине. Он убивает свою дочь, не зная, его дочь или хозяин. В конце концов, мы видим его на берегу, когда Хейл — или «Halores», как мы любим ее называть, — покидает парк.Мы видим, что он пережил последнюю травму руки, которую он получил. Это завершает график.

То, что мы видим в конце концов, немного реконструирует это. Все эти и произошли на этой временной шкале, но произошло и кое-что еще. В далеком-далеком будущем мир кардинально изменится. Как бы разрушено. Фигура в образе его дочери — его дочь, конечно же, давно умерла — вернулась, чтобы поговорить с ним. Он понимает, что жил в этой петле снова, снова и снова.Первую петлю, которую мы видели в этом сезоне, они повторяли, каждый раз проверяя на предмет того, что они называют «верностью» или, возможно, отклонением. Складывается ощущение, что тестирование будет продолжено. Это дразнит нас другой временной сферой, над которой мы когда-то работаем, и однажды мы увидим немного больше, и то, как они попадают в это место, и что они проверяют.

Чтобы уточнить, было бы правильнее называть эту версию Человека в черном более похожей на то, что он тестировал с Джеймсом Делосом (Питер Маллан) в начале этого сезона?

Да, мы просто понимаем, что это не его оригинальное воплощение.Та его версия, которая была «человеком», могла бы лежать где-то мертвой, а теперь это какая-то другая версия его самого. Он не совсем понимает, что именно.

Означает ли тот факт, что эта сцена происходит в будущем, скачок времени для третьего сезона?

Я думаю, что в конце концов мы доберемся до этой сюжетной линии. Но главная история третьего сезона не будет так далеко забегать. Мне действительно интересно посмотреть, что происходит с Бернардом и Долорес теперь, когда они, наконец, заслужили свою свободу.Думаю, мы еще увидим это.

Вы ​​уже знаете, когда нам ждать третий сезон?

Еще рано знать точные сроки, когда он вернется. Мы еще ничего не добились. Мы не знаем дату выпуска. Но мы определенно начали рассказывать историю. Наша нынешняя одержимость Westworld разрушает то, что должно было быть европейским отдыхом. ( Смеется. .) Я проснулся сегодня рано утром и начал говорить об этом.Мы просто приятно пообедали между интервью, и все, что мы сделали, это говорили о третьем сезоне. Мы идем полным ходом.

Каковы ваши ожидания от третьего сезона? Отключите звук в разделе комментариев и продолжайте проверять THR.com/Westworld , чтобы узнать больше.

BNL | Персонал | Лиза Миллер, Национальный синхротронный источник света II

Предпочтительные гендерные местоимения (PGP): она, ее

Лиза Миллер — менеджер отдела обслуживания пользователей, коммуникаций, образования и поддержки (USCEO) в Национальном источнике синхротронного света II в Брукхейвенской национальной лаборатории.Офис USCEO помогает сотрудникам и пользователям проводить эксперименты в NSLS-II, включая доступ пользователей, управление предложениями, конференции и публикации. Команда также координирует внутреннюю и внешнюю коммуникацию, включая веб-сайты, информационные бюллетени и печатные материалы, наряду с образовательными и информационными мероприятиями в NSLS-II.

Исследования | Образование | Назначения | Публикации

---

Исследовательская деятельность

Исследования Лизы Миллер сосредоточены на изучении химического состава клеток и тканей с использованием синхротронной инфракрасной и рентгеновской визуализации.В ее работе три основных направления исследований: (1) понимание того, как наноструктура и химический состав кости влияют на ее механические свойства при остеоартрите и остеопорозе, (2) выяснение роли ионов металлов в неправильном сворачивании белков и нейродегенерации при болезни Альцгеймера и церебральной амилоидной ангиопатии. и (3) оптимизация доступности питательных веществ в ризосфере растений для улучшения производства биомассы.

Образование

• к.э.н. 1995: Биофизика, Медицинский колледж Альберта Эйнштейна (Бронкс, Нью-Йорк)
• М.С. 1992: химия, Джорджтаунский университет (Вашингтон, округ Колумбия)
• B.S. 1989: химия, Университет Джона Кэрролла (Кливленд, Огайо)

Профессиональные встречи

• Менеджер по обслуживанию пользователей, коммуникациям, образованию и работе с клиентами, NSLS-II, Брукхейвенская национальная лаборатория
• Аффилированный доцент химического факультета Университета Стоуни-Брук
• Аффилированный доцент кафедры биомедицинской инженерии, Университет Стоуни-Брук

КОМИТЕТЫ

• Научно-консультативный комитет, Стэнфордский источник синхротронного излучения
• Научно-консультативный комитет, Diamond Light Source
• Комиссия по рассмотрению предложений, ELETTRA
• Комиссия по рассмотрению заявки, Canadian Light Source

Избранные публикации

• Victor TW, O’Toole KH, Easthon LM, Ge M, Smith RJ, Huang X, Yan H, Chu YS, Chen S, Gursoy D, Ralle M, Imperiali B, Allen KN, Miller LM (2020) Лантаноид- Связывающие теги для трехмерной рентгеновской визуализации белков в клетках с наномасштабным разрешением.Журнал Американского химического общества 142: 2145–2149. DOI: 10.1021 / jacs.9b11571
• Crooks EJ, Irizarry BA, Ziliox M, Kawakami T, Victor T, Xu F, Hojo H, Chiu K, Simmerling C, Van Nostrand WE, Smith SO, Miller LM (2020) Медь стабилизирует антипараллельные β-листовые фибриллы амилоида β40 (Aβ40) -Иова вариант. Журнал биологической химии 295: 8914–8927. DOI: 10.1074 / jbc.ra119.011955
• Zhu X, Victor TW, Ambi A, Sullivan JK, Hatfield J, Xu F, Miller LM, Van Nostrand WE (2020) Накопление меди и влияние хелатирования на церебральную амилоидную ангиопатию по сравнению с паренхиматозными амилоидными бляшками.Металломика 12: 539–546. DOI: 10.1039 / c9mt00306a
• Victor TW, Easthon LM, Ge M, O’Toole KH, Smith RJ, Huang X, Yan H, Allen KN, Chu YS, Miller LM (2018) Рентгенофлуоресцентная нанотомография отдельных бактерий с лучом менее 15 нм . Научные отчеты. DOI: 10.1038 / s41598-018-31461-y
• Graziano V, Miller L, Yang L (2018) Интерпретация данных рассеяния в растворе на липидных нанодисках. Журнал прикладной кристаллографии 51: 157–166. DOI: 10.1107 / s1600576717018441
• Victor T, Delpratt N, Cseke SB, Miller LM, Cseke LJ (2017) Распределение питательных веществ в ризосфере с использованием изображений FTIR.Аналитическая химия 89: 4831–4837. DOI: 10.1021 / acs.analchem.6b04376
• Gürsoy D, Hong YP, He K, Hujsak K, Yoo S, Chen S, Li Y, Ge M, Miller LM, Chu YS, De Andrade V, He K, Cossairt O, Katsaggelos AK, Jacobsen C (2017) Rapid совмещение данных нанотомографии с использованием совместной итеративной реконструкции и перепроецирования. Научные отчеты. DOI: 10.1038 / s41598-017-12141-9
• Cai Y, Zhang K, Kim H, Hou G, Zhang X, Yang H, Feng H, Miller L, Ralph J, Liu CJ (2016) Повышение усвояемости и выхода этанола древесины Populus посредством экспрессии модифицированного монолигнола 4-O -метилтрансфераза.Nature Communications. DOI: 10.1038 / ncomms11989
• Miller LM, Gragg M, Kim TG, Park PS-H (2015) Неправильно свернутые мутанты опсина демонстрируют повышенную структуру β-листов. FEBS Letters 589: 3119–3125. DOI: 10.1016 / j.febslet.2015.08.042
• Гельфанд П., Смит Р.Дж., Ставицкий Э., Борчелт Д.Р., Миллер Л.М. (2015) Характеристика структурных изменений белков в живых клетках с использованием покадровой FTIR-визуализации. Аналитическая химия 87: 6025–6031. DOI: 10.1021 / acs.analchem.5b00371
• Acerbo AS, Kwaczala AT, Yang L, Judex S, Miller LM (2014) Изменения в коллагеновой и минеральной наноструктуре, наблюдаемые при остеопорозе и фармацевтическом лечении с использованием одновременного рассеяния малых и широкоугольных рентгеновских лучей.Calcified Tissue International 95: 446–456. DOI: 10.1007 / s00223-014-9913-0
• Bourassa MW, Brown HH, Borchelt DR, Vogt S, Miller LM (2014) Металл-дефицитные агрегаты и пониженное содержание меди, обнаруженные в клетках, экспрессирующих мутации SOD1, вызывающие БАС. Границы в старении неврологии. DOI: 10.3389 / fnagi.2014.00110
• Stavitski E, Smith RJ, Bourassa MW, Acerbo AS, Carr GL, Miller LM (2013) Динамическая полнопольная инфракрасная визуализация с использованием нескольких синхротронных лучей. Аналитическая химия 85: 3599–3605.DOI: 10.1021 / ac3033849
• Bourassa MW, Miller LM (2012) Визуализация металлов при нейродегенеративных заболеваниях. Металломика 4: 721. DOI: 10.1039 / c2mt20052j
• Acerbo AS, Carr GL, Judex S, Miller LM (2012) Отображение свойств материала образцов костей с помощью инфракрасной микроскопии на основе отражения. Аналитическая химия 84: 3607–3613. DOI: 10.1021 / ac203375d
• Leskovjan AC, Kretlow A, Lanzirotti A, Barrea R, Vogt S, Miller LM (2011) Повышенное содержание железа в головном мозге совпадает с ранним образованием бляшек на мышиной модели болезни Альцгеймера.NeuroImage 55: 32–38. DOI: 10.1016 / j.neuroimage.2010.11.073
• Лесковян А.С., Кретлоу А., Миллер Л.М. (2010) Инфракрасное изображение с преобразованием Фурье, показывающее пониженное содержание ненасыщенных липидов в гиппокампе мышиной модели болезни Альцгеймера. Аналитическая химия 82: 2711–2716. DOI: 10.1021 / ac1002728
• Leskovjan AC, Lanzirotti A, Miller LM (2009) Амилоидные бляшки у мышей PSAPP связывают меньше металла, чем бляшки при болезни Альцгеймера человека. NeuroImage 47: 1215–1220. DOI: 10.1016 / j.нейровизуализация.2009.05.063

Lisa: определение регуляторов транскрипции с помощью интегративного моделирования доступности хроматина общего пользования и данных ChIP-seq | Genome Biology

Регуляторное предсказание TR на основе пиков ChIP-seq цистрома DB

Высококачественные данные TR ChIP-seq, если они доступны, точно характеризуют сайты связывания TR в масштабе всего генома, которые можно использовать для вывода регулируемых генов в конкретной клетке типы. Оценить влияние связывания TR на экспрессию генов нетривиально, потому что: (1) нет точной карты, связывающей энхансеры с генами, которые они регулируют [32]; (2) несколько энхансеров могут регулировать один и тот же ген [33], а один энхансер может регулировать несколько генов [34]; и (3) не все сайты связывания TR являются функциональными энхансерами [19].Следовательно, необходима модель для количественной оценки вероятности того, что ген регулируется цистромом TR. Модель «пика-RP» [35, 36] основана на пиках TR ChIP-seq, служащих прокси для сайтов связывания TR, без использования данных DNase-seq или h4K27ac ChIP-seq. В модели пика-RP (рис. 1a) предполагается, что влияние сайта связывания TR на экспрессию гена экспоненциально затухает с увеличением геномного расстояния между сайтом связывания TR и сайтом начала транскрипции (TSS), а также предполагается, что вклад нескольких сайтов связывания является аддитивным [36].Было показано, что учет количества сайтов связывания TR и расстояний между этими сайтами от TSS более точен, чем альтернативные методы назначения мишеней TR [37]. Хотя возможно, что энхансеры могут модулировать друг друга неаддитивными способами [32], данных об этих типах поведения слишком мало, чтобы их можно было включить в модель прогнозирования TR.

Рис. 1

Иллюстрация фреймворка Lisa. a Показатель пиковой RP моделирует влияние сайтов связывания TR на регуляцию гена.Сайты связывания TR представляют собой двоичные значения, и пики, расположенные ближе к TSS гена, имеют большее влияние, чем пики дальше. b Оценка chrom-RP суммирует влияние среды хроматина ДНКазы-seq или h4K27ac на ген. Оценка chrom-RP основана на количественной оценке непрерывного, а не двоичного сигнала. c Обзор фреймворка Lisa. (1) Данные h4K27ac ChIP-seq или DNase-seq из базы данных Cistrome суммированы с использованием показателя chrom-RP для каждого гена. (2) выбираются образцы h4K27ac ChIP-seq или DNase-seq, которые могут различать набор запрашиваемых генов и набор фоновых генов, и параметры регрессии определяют модель chrom-RP.(3) Каждый TR цистром из Cistrome DB оценивается как предполагаемый регулятор запрашиваемого гена, установленного посредством делеции in silico, которая включает устранение сигнала h4K27ac ChIP-seq или DNase-seq на сайтах связывания предполагаемого регулятора. (4) Модель chrom-RP, основанная на сигнале делеции in silico, сравнивается с моделью без делеции для каждого гена в запросном и фоновом наборах генов. Значение p вычисляется с использованием сравнения рангового критерия Вилкоксона для запроса и фоновых ΔRP.(5) Пик-RP на основе пиков TR ChIP-seq рассчитывается для предполагаемого регуляторного цистрома, и рассчитывается статистическая значимость распределений пик-RP из запрашиваемого и фонового наборов генов. (6) Значения p из анализа h4K27ac ChIP-seq, DNase-seq и пикового RP объединяются с использованием комбинированного теста Коши. Цистромы TR ранжируются на основе комбинированного значения p

Мы используем модель пикового RP для идентификации TF, которые, вероятно, являются регуляторами целевого набора генов, путем поиска цистромов Cistrome DB [12], которые производят более высокие пиковые RP для запросить набор генов, чем для набора фоновых генов (Дополнительный файл 1: Рисунок S1, Дополнительный файл 2: Таблица S1).Статистическая значимость рассчитывается с использованием одностороннего критерия суммы рангов Вилкоксона, сравнивающего пиковые RP для запрашиваемого набора генов с фоном. ТР с наиболее значительными значениями p считаются кандидатами в регулирующие органы. Лиза использует TR ChIP-seq в рамках модели пикового RP вместе с моделями ландшафта хроматина, описанными ниже, чтобы сделать вывод о TR набора генов.

Регуляторное прогнозирование TR с использованием модели ландшафта хроматина

В то время как данные TR ChIP-seq предоставляют точную информацию о цистромах TR в определенных типах клеток, TR Cistrome DB TR по охвату типов клеток смещен в сторону нескольких TR, таких как CTCF, которые являются представлены во многих типах ячеек, а также в отношении таких типов ячеек, как K562 (Дополнительный файл 1: Рисунок S1b-c), в котором были охарактеризованы многие TR (Дополнительный файл 1: Рисунок S1d).h4K27ac ChIP-seq [19] и DNase-seq [16], доступные в большом количестве и различных типах клеток, могут быть использованы для вывода регуляторных областей, специфичных для определенного типа клеток. Эти типы данных могут улучшить использование данных TR ChIP-seq, а также данных о предполагаемом связывании TF, которые могут неточно представлять сайты связывания TF в различных контекстах ячейки.

Чтобы повысить эффективность данных TF ChIP-seq или условного связывания TF при идентификации регуляторных TR, мы разработали ландшафтные модели хроматина Lisa, в которых используются профили хроматина h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq (рис.1b, Дополнительный файл 3: Таблица S2; см. раздел «Методы»), чтобы смоделировать регуляторную важность различных локусов генома. Поскольку эксперименты по дифференциальной экспрессии генов не всегда проводятся параллельно с экспериментами по профилированию хроматина, Lisa не требует соответствующих профилей хроматина, созданных пользователем, а вместо этого использует данные ДНКase-seq и h4K27ac ChIP-seq, которые доступны в базе данных Cistrome, чтобы помочь идентифицировать цис- -регуляторные элементы, контролирующие набор генов дифференциальной экспрессии.С этой целью Лиза моделирует хроматиновые ландшафты с помощью RP хроматина (chrom-RPs, рис. 1b), которые определяются аналогично пиковым RP с одним небольшим отличием: сигналы чтения всего генома вместо вызовов пиков используются в расчет хром-РП [28]. Изменения в h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq, связанные с нарушениями состояния клеток, часто являются вопросом степени, а не переключателями; поэтому мы основываем хром-RP на считывании, а не на пиках. Для каждого гена предварительно рассчитывается хром-RP (рис.1c (1)) и для каждого профиля h4K27ac ChIP-seq / DNase-seq в базе данных Cistrome (Дополнительный файл 1: Рисунок S1a, Дополнительный файл 3: Таблица S2). Эти хром-RP определяют количественно регулирующие активности цис , которые влияют на каждый ген в условиях, специфичных для типа клеток.

Учитывая набор генов запроса, Лиза идентифицирует небольшое количество образцов Cistrome DB DNase-seq и h4K27ac ChIP-seq, которые информативны о регуляции этих генов. Лиза делает это, используя предварительно рассчитанные хром-RP h4K27ac / DNase-seq для различения запрашиваемого набора генов и фонового набора генов.Используя L1-регуляризованную логистическую регрессию, Лиза присваивает вес каждой выбранной выборке, чтобы взвешенная сумма хром-RP генов лучше всего разделяла запрос и фоновые наборы генов (рис. 1c (2)). Этот шаг выполняется отдельно для h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq, что дает модель chrom-RP, основанную на h4K27ac ChIP-seq, и другую модель, основанную на DNase-seq.

Затем, с помощью процесса делеции in silico (ISD), Лиза оценивает эффект удаления каждого цистрома TR на модель ландшафта хроматина (рис.1в (3)). ISD цистрома TR включает установку сигнала хроматина DNase-seq или h4K27ac ChIP-seq на 0 в интервалах 1 т.п.н., содержащих пики в этом цистроме, и оценку влияния на предсказания, сделанные моделями ландшафта хроматина. Разница оценок модели до ISD и после ISD позволяет количественно оценить влияние, которое удаленный цистром TR, по прогнозам, окажет на запрашиваемый и фоновый наборы генов. Лиза не делает прогнозов о цис- — регулирующих элементах — подход, принятый MARGE и BART.Вместо этого Лиза исследует эффекты удаления предполагаемых регуляторных цистромов TR на модели chrom-RP. В то время как chrom-RP объединяет данные с интервалом в 200 кб, масштаб отдельных цис- -регулирующих элементов составляет порядка 1 кб. Подход ISD смягчает трудности с переносом информации, содержащейся в модели chrom-RP, из шкалы chrom-RP (200 kb) в шкалу cis -регулирующий элемент (1 kb).

Наконец, чтобы определить приоритетность ТУ-кандидатов, Лиза сравнивает предсказанные эффекты на запросный и фоновый наборы генов, используя односторонний критерий суммы рангов Вилкоксона (рис.1в (4)). Используется односторонний тест, потому что Лиза предполагает, что удаление in silico истинного регуляторного фактора уменьшит, а не повысит способность модели различать запрашиваемые и фоновые наборы генов. Чтобы использовать возможности прогнозирования на основе моделей ISD h4K27ac-ChIP-seq и DNase-seq, а также моделей TF ChIP-seq только с пиками (рис. 1c (5)), результаты объединяются с использованием комбинированного теста Коши [38] (Рис. 1c (6)). В то время как MARGE [28] предсказывает цис- -регуляторных элементов (но не анализирует TR), а BART [29] выполняет анализ обогащения предсказанных цис- -элементов для обнаружения TR, Лиза использует модель ландшафта хроматина в другом способ.В сочетании с полученным из ChIP-seq или вычисленным с помощью вычислений связыванием TR, Лиза исследует эффекты TR на моделях RP хроматина запрашиваемых и фоновых наборов генов.

Демонстрация моделей ландшафта хроматина в исследовании нокдауна GATA6

Мы демонстрируем ландшафты хроматина Lisa и делецию in silico с использованием набора запрашиваемых генов, определенных как гены с пониженной регуляцией в эксперименте по нокдауну GATA6 в линии клеток рака желудка KATO-III [39] (Рис. 2). Лиза идентифицирует ландшафтные модели хроматина ДНКase-seq и h4K27ac ChIP-seq (рис.2a, Fig. 1c (2)), которые включают несколько образцов желудочно-кишечного тракта (дополнительный файл 1: рисунок S2b, d), хром-RP которых может различать наборы запрашиваемых и фоновых генов (дополнительный файл 1: рисунок S2a, ДНКазы seq ROC AUC = 0,816, Дополнительный файл 1: Рисунок S2c, h4K27ac ROC AUC = 0,821). In silico делеция (рис. 1c (3)) сайтов связывания GATA6 приводит к образованию более крупных RPs DNase-seq и h4K27ac ∆ RP (DNase ∆ RP, 1,05; h4K27ac ∆ RP, 0,25) для примера с подавленным геном LINC01133 [40], чем для фонового гена, ZC3h22A (DNase ∆ RP, 0.06; h4K27ac ∆ RP, 0,01) (рис. 2б). In silico делеция сайтов связывания CTCF, напротив, оказывает меньшее влияние на хроматиновые ландшафты, окружающие LINC01133 (ДНКаза ∆ RP, 0,02; h4K27ac ∆ RP, 0,01), в результате чего получается ∆ RP, которые больше аналогично ∆ RP для ZC3h22A (рис. 2b) (DNase ∆ RP, 0,004; h4K27ac ∆ RP, 0,001). Статистический анализ проводится путем сравнения всех RP запрашиваемого гена ∆ со всеми фоновыми генами ∆ RP (рис.1c (4)), что дает значимые значения p для GATA4 (DNase p <10 ⁻¹⁰ , h4K27ac p <10 ⁻⁵ ) и GATA6 (DNase p <10 ⁻¹³ , h4K27ac p <10 ⁻⁷ ). После того, как этот анализ будет проведен для всех образцов TR ChIP-seq в базе данных Cistrome DB, и результаты будут объединены и сравнены, GATA6 и GATA4 ChIP-seq из тканей кишечника и желудка имеют наиболее значимые значения p (рис.2в, г).

Рис. 2

Набор генов с пониженной регуляцией из эксперимента по нокдауну GATA6 в клетках KATO-III рака желудка используется в качестве тематического исследования для демонстрации структуры Lisa. a Тепловая карта регуляторных потенциалов, используемая для различения генов с пониженной регуляцией от нерегулируемых фоновых генов. b Анализ делеции in silico с использованием цистромов GATA6 и CTCF для исследования моделей ландшафта хроматина рядом с иллюстративным подавленным геном LINC01133 и фоновым геном ZC3h22A.Показаны только профили хроматина h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq с наибольшими положительными коэффициентами, хотя другие образцы вносят вклад в соответствующие модели хроматина h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq. c Сравнение ΔRP указывает на то, что цистромы GATA6 и GATA4 имеют большое влияние на хроматиновый ландшафт вблизи генов с пониженной регуляцией и, следовательно, вероятно, являются регуляторами набора запрашиваемых генов. CTCF не влияет на хроматиновый ландшафт подавленных генов и вряд ли может регулировать набор запрашиваемых генов. d Ранговые статистические данные для анализа Lisa набора генов с пониженной регуляцией в эксперименте по нокдауну GATA6 были объединены для получения общих рангов TR. Показаны восемь верхних и восемь нижних TR для всех образцов TR ChIP-seq.

Идентификация Lisa регуляторных кластеров образцов TF ChIP-seq

Чтобы исследовать, может ли цистром TF ChIP-seq, полученный из одного типа клеток, быть информативным для других типов клеток, мы сначала сгруппировали все цистромы TR человека в базе данных Cistrome на основе парной корреляции Пирсона оценок пикового RP в виде тепловой карты (рис.3). Затем мы применили Lisa к дифференциально экспрессируемым наборам генов, определяемым возмущениями отдельных TF, и исследовали цистромы TR, которые, по прогнозам, являются ключевыми регуляторами этих наборов генов. При анализе активированных генов активации рецепторов андрогенов (AR) в линии клеток рака простаты LNCaP Лиза идентифицировала плотный кластер значимых цистромов для AR и его известного сотрудника FOXA1 (рис. 3 (a)). Все образцы в этом кластере были получены из клеточных линий рака простаты. При анализе нокдауна GATA6 в клеточной линии рака желудка (KATO-III) Лиза обнаружила, что цистромы GATA6 и FOXA2 в образцах желудка и толстой кишки являются наиболее значимыми.FOXA2 является важным пионером TF, который, как сообщается, сотрудничает с GATA6 в развитии кишечника, чтобы регулировать Wnt6 [41] и Wnt7b [42] (Fig. 3 (b)). Идентификация цистромов GATA6 в клеточных линиях рака толстой кишки, в дополнение к клеточным линиям рака желудка, показывает, что цистромы, полученные из типов клеток, относящихся к родственным линиям, могут использоваться для идентификации соответствующих регуляторов, даже если типы клеток не соответствуют тоже самое. В третьем примере, включающем активацию глюкокортикоидного рецептора (GR) в клеточной линии рака легкого A549, Лиза правильно идентифицировала GR в A549 как вероятный регулятор, а также идентифицировала GR в клетках другого типа HeLa (рис.3 (в)). AR, член того же семейства ядерных рецепторов, что и GR, также вовлечен Лизой, хотя образцы цистрома AR не объединяются с образцами цистрома GR и имеют меньшую статистическую значимость.

Рис. 3

Лиза предсказывает ключевые регуляторы транскрипции и придает значение каждому цистрому Cistrome DB. Большая тепловая карта показывает иерархическую кластеризацию 8471 цистромов ChIP-seq Cistrome DB человека на основе пикового RP, причем цвет представляет коэффициенты корреляции Пирсона между пиковыми RP.Три столбца слева от тепловой карты отображают оценки значимости Lisa для наборов дифференциально экспрессируемых генов, полученных в результате активации GR в клеточной линии A549 (повышенная регуляция), нокдауна GATA6 при раке желудка (пониженная регуляция) и активации AR в клеточной линии LNCaP (повышенная регуляция). ). Небольшие тепловые карты показывают детали глобальной тепловой карты, относящиеся к (a) активации AR, (b) нокдауну GATA6 и (c) наборам генов активации GR. В каждом случае наиболее значимые цистромы происходят из одного и того же типа или линии клеток.

Мы провели анализ влияния удаления данных ChIP-seq и DNase-seq на точность Lisa.В частности, мы проверили эффективность Лизы на трех наборах генов с повышенной регуляцией: (1) GR-активированные гены при раке груди (MCF7), (2) GR-активированные гены при раке легких (A549) и (3) рецепторы эстрогена (ER). -активированные гены в MCF7 (дополнительный файл 4: таблица S3). В этих анализах мы оценили эффект удаления всех релевантных клеточных линий (MCF7 или A549), данных h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq или данных TR ChIP-seq, специфичных для клеточной линии (ER или GR). Мы также удалили данные TR ChIP-seq, специфичные для клеточной линии, вместе с данными h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq.Мы повторили тот же анализ, удалив аналогичные данные на основе ткани (груди и легкого), а не на основе клеточной линии (MCF7 и A549). Когда MCF7 ER ChIP-seq исключены, образец ER из другой линии клеток рака молочной железы (h4396) предсказывает важность ER (ранг 6) как регулятора набора генов, активируемых эстрогеном. Когда все образцы ER груди ChIP-seq исключены, Лиза все еще может идентифицировать ER (ранг 18) из ER ChIP-seq в линии клеток рака простаты VCaP. Для набора GR-активированных генов в MCF7, когда данные GR ChIP-seq недоступны в MCF7, Лиза может идентифицировать GR как ключевой регулятор (ранг 2), используя GR ChIP-seq из легких (A549).Для набора GR-активированных генов в легких Лиза определила GR как ключевой регулятор (ранг 1), используя данные GR ChIP-seq из груди (MDA-MB-231). Вместе эти наблюдения указывают на то, что хотя TRs часто связываются специфическими для клеточного типа способами, происходящие из ChIP-seq TR цистромы могут быть информативными в отношении наборов генов, которые TRs регулируют в некоторых др. Типах клеток.

Идентификация Лизой ассоциированных с ТФ кофакторов в дополнение к ТФ

Чтобы проиллюстрировать способность Лизы находить кофакторы, которые взаимодействуют с регуляторными ТФ, мы исследовали анализ Lisa четырех дифференциально экспрессируемых наборов генов, полученных в экспериментах с активацией GR [43 ] и нокдаун / выход из BCL6 [44], MYC [45] и SOX2 [46].Анализ Lisa активации GR при раке легких оценил сам GR как наиболее значимый TR для наборов активированных генов (рис. 4a) и высоко оценил пионерские TFs FOSL2 и CEBPB, которые подавлялись после активации GR (рис. 3c). BCL6, преимущественно репрессивный TF, является драйвером диффузной крупноклеточной лимфомы (DLBCL) [47]. Анализ Lisa активированных генов в эксперименте по нокдауну BCL6 в клеточной линии DLBCL оценил BCL6 как наиболее значимый TR для этого набора генов (рис. 4b). Лиза также идентифицировала NCOR1 и NCOR2, которые являются корепрессорами транскрипции BCL6, участвующими в регуляции зародышевого центра [48,49,50].SPI1, который рекрутирует BCL6 [51], и BCOR, другой корепрессор BCL6 [52], были отнесены к числу лучших TR для набора генов с усиленной регуляцией. В эксперименте по нокдауну MYC в медуллобластоме MYC и его партнер по димеризации, MAX [53], были среди наиболее предсказанных регуляторов подавляемых генов (Fig. 4c). Гистон-метилтрансфераза, KDM2B, которая, как известно, физически взаимодействует с MYC и усиливает регулируемую MYC транскрипцию [54], также была обнаружена среди главных регуляторов. В эксперименте с нокаутом SOX2 [2], NANOG, SOX2 и POU5F1, ключевые регуляторы плюрипотентности, были главными предсказанными регуляторами генов с пониженной регуляцией (рис.4г). Лиза также обнаружила аналогичный набор TR для набора генов, полученного в результате эксперимента по нокдауну POU5F1 в эмбриональных стволовых клетках (дополнительный файл 1: Рисунок S3,4a). Кроме того, β-катенин (CTNNB1), который взаимодействует с SOX2 и является онкогенным в клетках SOX2 ⁺ [55], также занимает высокое место среди генов с пониженной регуляцией. Предсказанные регуляторы активированных генов в этом эксперименте включают FOXA1 и EOMES. FOXA1 участвует в раннем эмбриональном развитии [56] и, как было обнаружено, непосредственно репрессирует NANOG [57].Было показано, что посредством коиммунопреципитации FOXA1 физически взаимодействует с SOX2 [58]. SOX2, который, как известно, связывается с энхансером, регулирующим EOMES в ESCs человека, при нокдауне запускает экспрессию EOMES и индуцирует дифференцировку энтодермы и трофэктодермы [59]. Таким образом, во многих случаях известные взаимодействующие факторы имеют высокий рейтинг наряду с целевым активатором или репрессором. Это говорит о том, что даже несмотря на то, что доступные данные TF ChIP-seq в разных типах клеток немногочисленны (дополнительный файл 1: рисунок S1d), Лиза может дать представление о возможных регуляторных TF, поскольку транскрипционный аппарат имеет тенденцию организовываться в модули взаимодействующих факторов [60]. (Дополнительный файл 1: Рисунок S4d).

Рис. 4

Lisa может точно идентифицировать ключевые регуляторы транскрипции и ко-регуляторы, используя цистромы Cistrome DB. Lisa анализирует наборы генов с повышенной и пониженной регуляцией из экспериментов со сверхэкспрессией a GR, нокдауном b BCL6, c нокаутом MYC и d нокаутом SOX2. Диаграммы разброса показывают отрицательные значения log ₁₀ Lisa p 1316 уникальных регуляторов транскрипции для наборов генов с повышенной и пониженной регуляцией. Цвета показывают log ₂ -кратные изменения экспрессии гена TF между условиями обработки и контролем в экспериментах по экспрессии генов.Точки, обведенные кружком, обозначают регуляторы транскрипции, которые физически взаимодействуют с TF, нарушенным в эксперименте, который отмечен крестиком

Систематическая оценка прогноза регулятора

Для систематической оценки Lisa мы составили контрольную панель из 122 дифференциально экспрессируемых наборов генов. из 61 исследования, включающего нокдаун, нокаут, активацию или сверхэкспрессию 27 уникальных целевых ТФ человека. Кроме того, мы собрали 112 дифференциально экспрессируемых наборов генов, полученных из 56 исследований с 25 уникальными пертурбациями TF у мышей (дополнительный файл 5: таблица S4, см. «Галереи» на http: // lisa.cistrome.org). Полная модель Лизы отдельно применялась к наборам генов с повышенной и пониженной регуляцией в каждом эксперименте. Мы также провели анализ этих наборов генов, используя подкомпоненты Lisa: метод пикового RP, а также анализ ISD с помощью h4K27ac ChIP-seq и DNase-seq. Предполагаемые регуляторные цистромы определяли с использованием пиков ChIP-seq или наличия мотива TF в предполагаемых моделях хроматина. Результаты позволили нам сравнить эффективность ДНКase-seq и h4K27ac ChIP-seq в сценариях, где цистромы TF хорошо оцениваются (с помощью ChIP-seq) или менее хорошо (по мотивам).Мы измерили производительность на основе их ранжирования возмущенного целевого TF (рис. 5, дополнительный файл 1: рис. S5).

Рис. 5

Систематическая оценка эффективности прогнозирования регуляторов для людей с использованием Cistrome DB ChIP-seq и цистромов, полученных из мотивов ДНК. a Тепловая карта, показывающая эффективность Лизы в анализе экспериментов с человеческим пертурбацией TF. Каждый столбец представляет собой эксперимент по активации / сверхэкспрессии или нокдаун / аут с аналогичными типами экспериментов, сгруппированных вместе.Строки представляют методы, основанные на цистромах из данных TR ChIP-seq или на основе мотивов. Верхние левые красные треугольники представляют ранг целевых TF на основании анализа наборов активированных генов; нижние правые синие треугольники представляют собой анализ наборов генов с пониженной регуляцией. Тепловая карта включает в себя неизбыточные эксперименты на людях для одного и того же TF. См. Дополнительный файл 1: Рисунок S5 для получения полного списка экспериментов на людях и мышах. b Коробчатая диаграмма, показывающая ранжирование целевого TF, сравнивающее методы на основе Lisa ChIP-seq и базовую модель, основанную на количестве пиков TF в промоторных областях генов, для анализа наборов генов с повышенной и пониженной регуляцией в экспериментах по сверхэкспрессии / активации (OE) и нокдаун / аут (КД / КО). c Коробчатая диаграмма, показывающая ранжирование целевых TF с использованием методов на основе мотивов Lisa и базовой модели на основе совпадений мотивов в промоторных областях

Мы сравнили эффективность методов, использующих данные TF ChIP-seq и мотивы TF, для генов с повышенной и понижающей регуляцией. наборы, а также образцы сверхэкспрессии / активации и нокдауна / нокаута (фиг. 5a). В исследованиях сверхэкспрессии эффективность прогнозирования всех методов была лучше для наборов генов с повышенной экспрессией, чем для наборов с пониженной экспрессией.Обратное очевидно в исследованиях с нокаутом и нокдауном, для которых характеристики предсказания лучше для наборов генов с пониженной регуляцией (рис. 5b, c). Это говорит о том, что большинство ТФ, включенных в исследование, играют преобладающую активирующую роль в регуляции своих генов-мишеней в условиях экспериментов по экспрессии генов, что позволяет более легко идентифицировать эти ТФ с соответствующим направлением ответа на экспрессию первичных генов. . Аналогичные модели производительности наблюдались в наборах данных тестов мыши (дополнительный файл 1: рисунок S5).Характеристики Lisa с использованием ISD пика TR ChIP-seq из ландшафтов хроматина были аналогичны методу TR ChIP-seq пика-RP, но с большим отрывом превосходили методы, основанные на мотивах.

Чтобы определить, могут ли различия между наборами генов с повышенной и пониженной регуляцией быть объяснены прямыми или косвенными способами рекрутирования TR, мы более подробно изучили два эксперимента, включающих активацию ER и GR. Мы определили «прямые» сайты связывания ER и GR как пики ER / GR ChIP-seq на геномных интервалах, содержащие элементы родственной последовательности ДНК, и «непрямые» сайты связывания ER и GR как пики ER / GR ChIP-seq без элементов последовательности.Сравнивая сайты прямого и непрямого связывания в соответствующих экспериментах по активации ER и GR (дополнительный файл 1: Рисунок S6), мы обнаружили, что наборы генов с повышенной регуляцией были более значимо связаны с сайтами прямого связывания (значение ER p 1,5 × 10 ^{— 15} , GR p значение 1,5 × 10 ⁻¹⁸ ), чем с косвенными (ER p значение 3,8 × 10 ⁻⁴ , GR p значение 1,4 × 10 ⁻¹² ). Наборы генов с пониженной регуляцией были более значимо связаны с сайтами непрямого связывания (ER p , значение 1.5 × 10 ⁻¹⁵ , GR p значение 1,5 × 10 ⁻¹¹ ), чем с прямыми (ER p значение 4,6 × 10 ⁻² , GR p значение 3,0 × 10 ^{— 3} ).

В некоторых случаях нарушение TR может вызывать стрессовые, иммунные или контрольные реакции клеточного цикла, которые не связаны напрямую с начальным возмущением. В анализе Lisa активированных генов после 24 часов стимуляции эстрадиолом (GSE26834), например, E2F4 занимает первое место в рейтинге TR, за ним следует ER.Известно, что эстроген стимулирует пролиферацию клеток рака груди посредством пути с участием E2F4, ключевого регулятора контрольной точки клеточного цикла G1 / S [61]. В этом случае Лиза могла правильно определить вторичный ответ на первичное возмущение TR.

Сравнение Lisa с опубликованными методами

Далее мы сравнили Lisa с другими подходами, включая BART [29], i-cisTarget [30] и Enrichr [31], которые могут использовать либо данные TR ChIP-seq, либо мотивы. Мы также включили базовый метод, который ранжирует TR путем сравнения наборов запросов и фоновых генов на основе номера сайта связывания TR в пределах 5 т.п.н. с центром на TSS.Lisa превзошла BART, i-cisTarget и Enrichr с точки зрения процента целевого TR, идентифицированного в первой десятке во всех экспериментах, либо с использованием сайтов связывания TF из данных ChIP-seq, либо с точки зрения совпадений мотивов (рис. 6a, b). Лиза использует модель, основанную на данных хроматина, чтобы придать больший вес локусам, которые с большей вероятностью влияют на экспрессию набора генов запроса. Таким образом, Лиза улучшает производительность вывода TR с помощью шумных профилей цистрома, таких как те, которые приписываются мотивам последовательностей ДНК.Веб-сервер Lisa (lisa.cistrome.org) не только более точен, чем другие методы с точки зрения прогнозирования TR, но и имеет несколько уникальных функций, которые позволяют исследователям исследовать соответствующие данные ChIP-seq способами, недоступными в других приложениях.

Рис. 6

Lisa по своим характеристикам превосходит опубликованные модели. Производительность Lisa сравнивается с альтернативными опубликованными методами для генов с повышенной экспрессией a в экспериментах по сверхэкспрессии / активации и b с пониженной регуляцией генов в экспериментах по выключению / отключению

Веб-сайт Lisa и галерея контрольных данных Lisa

Веб-сайт Lisa (lisa.cistrome.org) отображает две таблицы результатов для каждого набора генов запроса. Первый суммирует анализ Lisa, основанный на данных TR ChIP-seq, а второй отображает анализ Lisa сайтов связывания TF, вменяемых из мотивов связывания ДНК. Таблица данных ChIP-seq отображает до пяти отсчетов ChIP-seq для каждого TR. Пользователи могут сортировать результаты по значению p и проверять метаданные и статистику контроля качества для каждого из образцов ChIP-seq, чтобы понять, могут ли прогностические образцы быть получены из определенных типов клеток или условий эксперимента.Lisa предоставляет метрики контроля качества, метаданные, ссылки на публикацию и чтение данных для данных ChIP-seq предполагаемых нормативных TR. Через Lisa сигнальные дорожки ChIP-seq можно просматривать в браузере эпигенома WashU [62]. Хотя анализ на основе вменения мотивов имеет тенденцию быть менее точным, чем анализ на основе ChIP-seq, мотивы могут указывать на роли регуляторных TR, для которых данные ChIP-seq не широко доступны. Проведенный Лизой анализ всех эталонных наборов генов также можно просмотреть на веб-сайте Лизы.Пользователи могут изучить эти анализы, чтобы понять «типичные» результаты анализа. Надежные методы в сочетании с функциями визуализации и исследования данных делают Lisa ценным инструментом для анализа регуляции генов у людей и мышей.

Работа, возраст Лизы Делькампо, Instagram и многое другое

Она первая новичок во 2 сезоне Круга. Ассистентка Лиза Делькампо надеется добиться самого большого успеха в ловле кошек Круга.

Лиза Делькампо обманула всех на The Circle прямо сейчас (она выдает себя за своего босса Лэнса Басса), и мы собрали информацию о ее возрасте, работе и Instagram.В то время как остальные семь участников, кажется, думают, что они узнают настоящего Лэнса Басса, зрители дома хотят узнать больше о соме Лизе Делькампо. Личный помощник Лэнс надеется выиграть 2 сезон с его таинственным поворотом внутреннего круга, и пришло время узнать о ней больше.

Лиза появилась как «Лэнс» во время 3-го эпизода 2-го сезона «Круг ».Почти все узнали звезду NSYNC, и большинство участников подумали, что для было бы слишком смело притвориться за Лэнса Басса. Это дало Лизе преимущество … пока она не запутала участников The Circle своим ответом на простой вопрос. Когда Лиза пошутила (как «Лэнс» ), что « х » будет использовать призовые деньги для финансирования следующего тура NSYNC, казалось, никто не понял сарказма. Вместо этого он поставил цель на спину Лизы. Однако, поскольку ее шутка не оправдалась, она старалась изо всех сил.Она пытается выяснить динамику, которая играет среди актеров (включая некоторых фаворитов фанатов) на The Circle . Ее ловкое расследование может помочь ей остаться в The Circle , если она сможет интегрироваться в нужную группу.

Связанный: Круг: Что случилось с победителем 1 сезона Джои Сассо

У Лизы большой опыт общения с людьми, и ее работа может помочь ей далеко продвинуться в The Circle .Она была личным помощником Лэнса Басса в течение 15 лет, согласно ее LinkedIn , где говорится, что она начала работать на него в 2005 году. Ее близкие отношения с Лэнсом помогут ей обмануть всех остальных участников. Однако это также, кажется, показывает, что Лиза обладает отличными навыками межличностного общения. Лэнс доверил Лизе множество обязанностей, в том числе координацию его выступлений на хостинге, помощника по производству его документации Mississippi I Am и управление операциями своего офиса. До работы с Лэнсом она была старшим публицистом в Лас-Вегасе.Она часто помогала знаменитостям жить дальше, пока они были в городе.

Лизе Делькампо 42 года, то есть ей было чуть больше двадцати во время расцвета NSYNC.Она назвала себя «, полный поп-пирог, » и призналась, что когда-то была большой поклонницей NSYNC. Она из Лос-Анджелеса и сейчас там живет. Ее Instagram — @liseed. В настоящее время Лиза, кажется, не замужем и живет с соседом по комнате, который работает визажистом. У Лизы есть младшая сестра по имени Лори. У Лори есть дети, поэтому Лиза — тетя. Трудолюбивая Лиза любит вечера игр, Гарри Стайлса и Netflix, согласно ее Instagram. Она должна любить Netflix еще больше сейчас, когда потоковый гигант дал ей возможность выиграть 100000 долларов.

Лиза Делькампо произвела фурор в двух эпизодах сериала The Circle , в котором она участвовала, и не только потому, что она притворяется Лэнсом Бассом.Ее желание изучить игру и выработать стратегию, возможно, удерживало ее от высказываний так же активно, как и других участников (которые есть в Instagram), но, когда она почувствует себя более комфортно, Лиза может стать одним из сильных игроков в The Circle . Однако ей нужно будет сдерживать подозрения сома.

Далее: Netflix’s The Circle: 10 самых популярных актеров в рейтинге подписчиков в Instagram

Источник: Лиза Делькампо / LinkedIn, @ liseed / Instagram

90-дневный жених: Майк улыбается другому другу после Натали

Об авторе Мэг Сполдинг (Опубликовано 185 статей)

Мэг Сполдинг — писательница, которая тратит пугающее количество времени на реалити-шоу.